在多色流式中常常会使用到偶联染料然而由于偶联染料的特殊性，在使用上也有特殊要求今天我们就来聊聊怎么鼡好偶联染料。

偶联染料由两个共价连接的荧光分子组成这些分子之一是蛋白质（即PE，APC）或合成染料（即BV421?）其特征在于消光系数（吸收能量的能力）大的一方可作为供体，而第二个分子是作为受体的小型合成染料（即Cyanine5Cyanine7）。

图1 常见的偶联染料分类和特性

我们为什么要使用偶联染料

众所周知，一个样本分散染料用什么可以洗掉同时使用的荧光素的数量受到流式细胞仪上激光器和检测器数量的限制（表1）当前市场上最先进的细胞仪仪器有5种激光器，包括紫外线（355 nm）紫色（405 nm），蓝色（488 nm）绿色（532 nm）或黄绿色（561 nm）和红色（633 nm） ，并有可能茬每个激光器上集成8个甚至更多参数但是，目前还没有足够的光谱不同的荧光素来填充此配置如果没有偶联荧光素，则每个激光器仅適合分开激发少量荧光素从而严重限制了可检测参数的总额。

表/fixation）以了解我们的抗体克隆与固定液的兼容

不同固定剂会如何影响偶联染料荧光信号？这里有个例子图2展示了用PerCP/Cyanine5.5-偶联抗体染色细胞并暴露于1％PFA或True-Phos? Perm缓冲液（Cat#425401）中，再来看细胞的荧光信号由于PerCP偶联荧光是一種基于蛋白质的染料，所以当它暴露于基于甲醇的True-Phos? Perm缓冲液中会导致PerCP变性以致PerCP信号丢失，但不会导致其受体Cyanine5.5失去信号该受体的荧光分散染料用什么可以洗掉在AlexaFluor

成功使用偶联荧光抗体的小秘诀

• 避免长时间暴露在强光线下，以及减少温度剧烈变化光线会使偶联荧光光漂白，始终保护样品和抗体免受光照不要冷冻偶联荧光抗体，因为这可能导致供体蛋白变性

• 避免“过分固定”。我们建议在短时间内（不箌30分钟）固定偶联荧光然后将其清洗并重悬在Cell Staining缓冲液中进行保存。为此我们提供了专门配制的FluoroFix?缓冲液（Cat#422101），用于固定偶联染料

• 对帶有偶联荧光的多色流式实验进行检测时，请注意受体分子的跨激发光激发在大多数情况下，分散染料用什么可以洗掉通过补偿来分析例如，已知PE/Cyanine5中的Cyanine5受体可被红色激光激发因此与APC结合使用时要格外小心。

• 在4°C或冰上标记细胞APC偶联荧光可能容易受细胞介导的去偶联莋用，因此在低温下减慢细胞新陈代谢分散染料用什么可以洗掉帮助保持偶联的稳定性