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第一部分 实验1 大肠杆菌的培养和分离 同步练测
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淘豆网网友近日为您收集整理了关于人过氧化氢酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达的文档，希望对您的工作和学习有所帮助。以下是文档介绍：人过氧化氢酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达 摘要摘要生物体在新陈代谢中,细胞有氧呼吸所消耗的02约10%被还原成H202。后者很容易被细胞中各种还原剂还原成·OH和OH。,而·OH是极毒的羟自由基,能氧化与它接触的几乎所有细胞组份,引起衰老、癌变及其它病症。生物体内存在的过氧化氢酶(eatalase,CAT)能有效地催化细胞中产生的高浓度H202(2H202-+02+2H20),从而防止自由基对细胞的损伤。此外,CAT具有重要的工业应用价值。目前商品化的过氧化氢酶主要来源于牛肝、微球菌和黑曲霉,主要用于工业生产。对于医药和保健来说,人源的CAT应用价值更高。本研究利用基因重组技术实现人CAT基因在大肠杆菌中实现了有生物活性的表达,为其开发利用奠定了基础。本实验使用人eDNA文库,利用嵌套式PCR技术,获得了编码入CAT基因完整读码框的eDNA序列,选用pMAL.c2x、pBV221质粒作为载体,经过定向克隆将人CAT基因分别构建了融合pMAL.c2x.CAT和非融合表达载体pBV-CAT,并转化到大肠杆菌TBl和JMl09中实现表达。在融合表达中,分别选择了37℃、2(来源：淘豆网[/p-5864927.html])8。C、20&C作为不同诱导温度对pMAL.c2x.CAT重组菌进行诱导表达。随着温度的降低,可溶性目的蛋白的表达量逐步增加,12h诱导后表达产物可占总菌蛋白的23%。该表达产物(MBP.CAT)经亲和层析纯化后并未表现出CAT活性。用Factor Xa将MBP蛋白切掉后,产物明显具有CAT活性,说明MBP蛋白的存在可能影响了CAT蛋白的正确折叠,从而影响了它的酶学活性。而在pBV221.CAT非融合表达体系中,经温度诱导后,目的蛋白不仅呈可溶性,且具有CAT活性,但表达量较低。在目的蛋白的活性测定中,本文采用了KMn04染色法和紫外分光光度法进行活性测定。Ⅺ妇04染色法方法简便直观,易操作,特异性好,但不适用于活性定量测定;而紫外分光光度法检测速率快,灵敏度高,操作简便,适于过氧化氢酶活性的快速定量测定。本研究还对重组酶的性质进行了研究(酶的热稳定性、pH稳定性),为以后重组人过氧化氢酶的进一步开发利用及生产、医药等方面的应用奠定了基础。关键词人过氧化氢酶基因大肠杆菌表达活性测定重(来源：淘豆网[/p-5864927.html])组酶IAbstractAbstractIn biological metabolism,1 0%of 02 was consumed by cell redox and deoxidized to H202.H202could be deoxidized into OH—and‘OH by many reducers.’OH(hydroxyl radical)has more toxicity,it Calloxidate rots of anisms and leads tO consenescence,cancer and other diseases.But the catalase(CAT)in biological metabolism can protect the cell by catalyze the H202 to produce 02 andH20(2H202&-*02+2H20).In addition,CAT has more value in indust(来源：淘豆网[/p-5864927.html])rial mercial CATmostly obtained from BLC,Mlysodeilaicus and Aspergillus niger and most were applied to industryproduction.But human CAT will have more value in medic撕on and healthcare.In this study humancatalase(CAT)with biological activity was obtained in E.coli by binant DNAtechnology.This is thebasement of future study and application of the binant proteins.In this research,the cDNA which encoded ORF of human CAT gene was obtained by Nested PeRfr(来源：淘豆网[/p-5864927.html])om human eDNA library,and the expression vectors were constructed by using two different plasmids(pMAL-c2x and pBV221)and transformed into E.coli TB 1 and JMl09 by using CaCl2.The expressedproductS ofthe two binants were soluble.IIl the pMAL-c2x exprcession system,three different temperatures(37、28、20'c)were chosen toinduce the binant bacteria.The quantity of expressed protein increased when temperature fell.Thequantity of expressed protein Was (来源：淘豆网[/p-5864927.html])23%of total bacteria protein after induced 1 2h.The expressed fusionprotein of pMAL-e2x-CAT didn’t have the activity unless the MBP Was removed from the fusion protein.It showed that MBP disturbed protein of CAT to fold correctly.The expressed protein of pBV-CAT WaSsoluble and it has the biological activity of CAT.But the quantity of expressed protein WaS little.In activity d中eting,we using UV-Spec仃ophotome廿'y and KMn04-staining method.TheK]V[n0(来源：淘豆网[/p-5864927.html])4-staining method was simple and convenient but Was unfit for ration activity mensuration.TheUV-Spectrophotometrywas easy operated and had hie)sensitivity.It Was fit for fast ration mensurate ofCAT activity.The characters of the binant protein such aS heat stability and pH stability were also§tudied inthis research.This is the basement of future study and application of the binant proteins.Key words:E.activit(来源：淘豆网[/p-5864927.html])binant enzymⅡ河北大学学位论文独创性声明本人郑重声明: 所呈交的学位论文,是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知, 除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果,也不包含为获得河北大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢。作者签名: 丛!塾垒日期: 型1 2 年』月监日学位论文使用授权声明本人完全了解河北大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。学校可以公布论文的全部或部分内容,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本学位论文属于1、保密口2、不保密年——月——日解密后适用本授权声明。(请在以上相应方格内打“寸’)作者签名: 堡:型旦墨日期: 型1 2年』月上日导师签名:第1章序言第1章序言1.1过氧化氢酶近年来随着分子生物学和药理学的研究进(来源：淘豆网[/p-5864927.html])展,很多疾病与活性氧的关系密切相关,因而活性氧与人体健康的关系是最为活跃的研究领域,寻找理想的抗氧化药物成为全球关注的重点【H】。根据目前的文献报道,几乎常见疾病的发病原因或者病理变化都有活性氧(Reactiveoxygen species,ROS)的参与,其中研究得较多的有:肿瘤、炎症、动脉粥样硬化、自内障、辐射损伤、烧伤、衰老、关节炎、退化性疾病、自身免疫性疾病、肺病、肾病与肝病掣5d11。虽然ROS与疾病关系密切,可是研究表明,还没有有效药物能抑制机体产生ROS;现在的研究主要通过两方面来清除ROS.一是补充机体内清除ROS酶系统的酶,如超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(Catalase,CAT),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH.PX)等,这些酶不仅可以治疗ROS相关性疾病,在食物中添加这些酶还有可能成为防治ROS相关性疾病的保健食品。二是补充具有抗氧化活性的天然物质,如一些具有抗氧化的中草药,富含维生素E、A、C与胡萝卜素的食品等,此外还包括可以增强抗氧化酶活性的微量元素,如锌、硒、铜(来源：淘豆网[/p-5864927.html])、锰,金属硫蛋白等【12’131。过氧化氢酶(CAr)的作用是可以促使H202分解为分子氧和水,从而使细胞免于遭受H202的毒害。几乎所有的生物机体都存在CAT,其酶促活性为机体提供了抗氧化防御机理。鉴于含有过氧化物酶的抗氧化复合物可用于治疗,故认为CAT也可用于治疗氧化损伤疾病,因此,CAT在医学上有重要的应用价值。缺血性脑损伤是复杂的病理过程,随着分子生物学的进展,揭示了活性氧及其引发的脂质过氧化在脑缺血神经细胞损害中的作用。缺血性脑损伤治疗手段目前仍为恢复血供,增加脑组织的灌流量。但临床和实验资料表明脑缺血达到一定时限,恢复血供、增加供氧反而加重病情。近年来许多学者注意到了自由基在脑缺血过程中所起的作用并在实验中加以证实【141。Demopoulos等的实验证明脑缺血后首先是自由基产生增多,大量消耗了抗氧化剂后才开始引起大量脂质过氧化的损害。许多学者发现脑缺血后血流重建时脑组织和血清中ROOH水平增高,同时组织损害加重,推测脂质过氧化主要发生在再灌流期。不完全脑缺血期间残留的滴状供血提供(来源：淘豆网[/p-5864927.html])微量氧气,使脂质过氧化得以持续.1.河北大学理学硕士学位论文进行,以致缺血后再灌流时不能恢复组织代谢功能,反而加快损害进程。正常呼吸中,各种自由基反应可被氧气所终止。同时细胞中存在的保护性防御机制能够灭活脱离呼吸链的自由基,体内自由基的产生和清除系统经常处于动态平衡状态,所以一般无自由基的净生成。生理情况下脑组织清除自由基靠两个方面,即酶类和天然的抗氧化剂,两者的共同特点是能捕获各种反应所产生的活性辞由基,使之成为稳定的自由基,再将其清除,而CAT正是其中非常重要的一种清除自由基的酶类,因此CAT在缺血性脑损伤治疗中有着非常重要的作用。另外,CAT在对肠上皮细胞的保护中发挥关键性作用。肠上皮细胞是肠黏膜屏障组成中最重要的细胞成分,肠黏膜屏障遭到破坏时伴随着氧活性物质(ROS)的增加,R0怒作为细胞内第二信使可以激活多种转录因子,调控致炎细胞因子和化学因子的过度表达,加重肠黏膜屏障功能的损坏。CAT作为ROS的清除剂可以使过氧化氢分解为水和氧,减少肠黏膜内ROS的数量,减弱ROS的第二信使作用,从而起到保护肠黏膜的作用。晶状体上皮细胞(1ens epithelial cell,LEC)凋亡是除先天性白内障外各种类型白内障发生的共同分子机制【1 51。活性氧损伤是LEC凋亡的主要原因【161,而CAT是细胞活性氧清除系统的重要组成成分,对细胞内活性氧代谢的平衡起着重要作用【171。如果提高LEC.CAT的表达水平,CAT高表达可提高LEC对活性氧的耐受能力,抑制由活性氧导致的线粒体功能损伤,从而抑制LEC凋亡。因此,避免接触CAT抑制剂、在高危人群中适当使用CAT活化剂、在白内障治疗过程辅助使用过氧化氢酶活化剂,均对防治白内障具有一定的作用。因此,在白内障的基因治疗中,CAT基因应是一个值得进一步研究和使用的候选基因。氧化还原平衡是细胞功能的关键决定因子,无论是过分朝向氧化方向还是过分朝向还原方向都会导致严重损伤或细胞死亡【18’191。细胞内的氧化还原平衡受ROS的积累水平影响。现在己经清楚地认识到ROS具有双重作用,低浓度下它们可作为重要的信号分子【20】,通过诱导细胞内一系列保护和防御基因来保护植物。环境胁迫如低温、高盐、重金属等诱导ROS的过量产生,引起细胞结构和功能的破坏,所以生物体采取酶促机制或者非酶促机制来调控ROS水平。过氧化氢酶CAT和谷胱甘肽转移酶GST等抗氧化酶在植物的ROS代谢中起重要作用,与控制ROS的浓度和信号传导密切相关【211。第1章序言赵风云等口21利用农杆菌介导法将盐地碱蓬的谷胱甘肽转移酶GST+过氧化氢酶CAT双基因转入低温敏感水稻品种中花11号,并对T4代转基因水稻幼苗的抗低温特性进行了分析,结果显示转基因水稻幼苗有一定的低温胁迫抗性。1.2 CAT的类型划分及结构特点早期按来源不同把CAT划分为真核CAT和原核CAT。真核CAT主要来源于动植物组织中,其中哺乳动物组织中的CAT含量差异很大,肝脏中含量最高,结缔组织中含量最低,在上述组织细胞中,CAT主要与细胞器(如线粒体)以结合形式存在,而在红细胞中则以可溶状态存在,红细胞内的CAT和GSH.Px具有共同保护血红蛋白和其它巯基蛋白的作用。原核CAT主要来源于微生物,研究发现,几乎所有需氧微生物都存在CAT。1989年,Goldberg and Hochman按照不同理、化特性,将CAT划分为典型性(typicad、非典型性(atypical)和CAT-过氧化物酶(catalase—peroxidases,CAT-POD),通常认为这也是种符合进化关系的划分。按催化中心结构差异可分为两类,一是含铁卟啉结构CAT,又称铁卟啉酶,典型性CAT和CAT-POD属于此类;二是含锰离子代替铁的卟啉结构,又称为锰过氧化氢酶(MnCat)[23】,非典型性CAT属于此类。1.2.1典型CAT典型CAT,又称单功能血红素CAT,其几乎存在于所有需要呼吸组织中,包括真核生物和原核生物。大部分典型CAT尽管来源不同,但在结构上具有高度相似性。它们都是由4个具有相同多肽链的亚基组成,每个亚基含有一个血红素辅基作为活性位点,该辅基的形式为铁卟啉,一个分子中含有四个铁原子,其作用基团是血红素,相对分子量一般为200-.一340kDt241,目前几种获得晶体结构的CAT分别来自牛肝((BLC)、微紫青酶僻vitale)、溶壁微球菌(肱lysodeikticus)、奇异变形茵衅mirabilis)、大肠杆菌晖CO∞、啤酒酵母(S.cerevisiae)、人体红血球((HEC)【251。晶体结构的数据表明,非同源CAT亚基结构有很大相似性,如在水溶液中,黑曲霉CAT和牛肝CAT的二级结构基本一致【26】。天然典型性CAT活性位点处于高度自旋Fe3+状态,它可以在H202的2电子氧化下形成化合物I,在此过程中铁原子失去一电子从而与H202的氧原子形成氧代铁部分,卟啉环失去另一电子形成阳离子基,然后化合物I又在另一分子的H202的2电子还原下转变成天然的状态,即Fe”状态,从而完成一个催化循环。.3.河北大学理学硕士学位论文1.2.2 CA I-POD该类CAT广泛存在于动、植物组织中,原核生物仅在真菌中有发现。可以说CAT-POD在自然界中是典型性CAT的衍生物,是CAT同POD产生的可逆聚合体。它们的分子量大约为120--一340kD,通常该酶属于同型二聚体,也有一部分属于四聚体。同典型性CAT相比,CAT-POD具有更为庞大的结构单元,它包含至少700个氨基酸残基。CAT-POD的典型特点是具有两种不同催化行为。由于同样含有铁血红素结构,所以具有同典型性CAT相同催化功能,不同于典型性CAT的是CAT-POD催化能力要低1个数量级,在生物体中,这种差别几乎可以忽略不计。CAT-POD对于有机组织中过氧化反应具有更宽底物范围。典型性CAT对pH变化敏感,与之相比,CAT-POD对于温度、pH、H202含量变化表现更为敏感。对于典型CAT抑制剂3一氨基1,2,4一三唑(AD,CAT-POD不受抑制,仅血红素铁发生暂时性变化网。1.2.3非典型性CAT目前从生物体内发现的非典型性CAT(MnCAT)-=][!常少,Beyer等(1985年)及Barynin等(年)分别从乳酸菌和嗜热生物组织中获得。通过电子光谱与电子自旋共振(ESR)谱证实MnCAT中含有2个紧邻的锰离子,存在混合价态物种Mn2(]I,I/I)和Mn2(III,IV),还原态物种显示弱的反铁磁性偶合,而氧化态物种Mn2(III,Ⅳ)显示较强的反铁磁性偶合,截至目前,己知MnCAT有四种物种:(II,II)、(II,In)、(1II,Ⅲ)、(Ⅲ,iv),其中只有Mn2(II,II)和Mn2(m,Ⅲ)物种显示了极高的催化歧化效率,而活性MnCAT用NH20H和H202处理后则失活,认为是形成了非催化活性物种Mn2(II,Ⅲ)和Mn2(1lI,Ⅳ)。1.3 CAT生理功能和环境胁迫的关系CAT作为生物体内重要物质,具有非常重要的生理功能,其中最为主要的就是参与活性氧代谢过程。氧分子对生物体是无毒性的,一旦氧分子的电子分布发生改变,就变成活性氧。活性氧的种类包括H202、羟自由基、超氧阴离子3种。在活性氧代谢过程中,CAT可以使H202发生歧化生成水和氧分子(2H202-*02+2H20),使H202不至于与细胞有氧代谢中产生的超氧阴离子自由基02·‘进一步生成羟自由基·OH,从而防止自由基对细胞的损伤t23’291。第1章序言在环境胁迫等逆境情况下,生物体内广泛存在活性氧爆发现象,导致自由基增多,使细胞膜产生过氧化,导致细胞膜的破坏和损伤。CAT与超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)共同组成了生物体内活性氧防御系统,在清除超氧自由基、H202和过氧化物,以及阻止或减少羟自由基形成等方面发挥重要作用【301。据国外资料报导,动、植物体内CAT对多种环境因子均有明显的生态效应(紫外光、二氧化硫、氮氧化物、氨气以及重金属等等)。其研究成果的应用价值在于抗毒、防癌及环境生物学监测等诸多方面。多种环境因子对生物生理生化过程的影响,可以通过生物体内CAT表现出来。1.4 CAT的研究现状CAT(ECl.11.1.6)【311研究可追溯到19世纪初。Thenard(1811年)首先发现过氧化氢(H202)可以被动、植物组织分解产生氧气,Schonbein(1863年)认为是某种酶在起作用。1901年,1.,oeW将该酶命名为过氧化氢酶(Hydrogen Peroxidase),又称触酶(Catalase,简称CAT)t321。Stem(1936年)证明卟啉环是CAT活性中心,其后Summer等(1937年)得到了牛肝CAT结晶,Herbert和Pinsent(1948年)则从藤黄微球菌获得了原核CAT。随后大量研究发现CAT广泛存在于动物、植物和微生物中,动物肝脏、红细胞、植物叶绿体以及细菌、真菌、放线菌等中含有大量CAT。迄今CAT己经成为农业以及与之相关的食品与乳制品业、纸浆和造纸业、以及农业环保产业中有应用价值的酶之一。1.4.1 CAT的应用现状在牛奶保存和奶酪制造前用H202对牛乳和干酪原料乳进行杀菌消毒,然后再用CAT去除残余H202,与加热杀菌不同,这种杀菌消毒可以在低温下进行,不仅不会杀灭有用的乳酸菌,而且不会影响到脂肪酶、蛋白酶及磷酸酶的作用。另外,利用CAT分解H202放出02的性质,可以在烘烤食品过程中同时添加H202和CAT用作疏松剂【331。在纸浆和造纸工业上,由于发现传统的含***漂白剂与浆中残余木素反应产生***酚类化合物等毒性污染物质后,尤其是在漂白废水中发现剧毒二苯并二恶英PCDDs、***代二苯并呋喃PCDF类物质后,世界各国相继采取措施,禁止在纸浆和造纸工业上采用含***漂白剂,因此近年世界造纸行业相继以H202漂自来代替传统漂白方法【341。传统上用S02和亚硫酸氢钠去除漂白后的H202,随着世界各国对环境和安全问题的考虑,促进了寻找替代S02和亚硫酸氢钠去除H202方法研究,有研究表明CAT可在10min内将H202降解。.5.河北大学理学硕士学位论文纺织印染行业在棉针织物漂染色工艺中,采用过氧化氢酶生物除氧,比传统的高温水洗工艺去除残留H202具有节省水、电、气、人工的优点,又大幅度降低了成本,提高了生产效率,并减少了对环境的污染。在印染工业用水量大,用水较为紧张的地区,生物除氧工艺的采用不仅现实可行,从长远来看,推广生物除氧工艺,对印染工业的可持续发展更具有深远的意义135。。在环保方面,发达国家环保行业主要采用H202处理各种工业废水,而中国环保行业则刚刚起步,只有少数企业使H202处理工业废水,而CAT可以取代化学试剂降解生产H202的工厂或在生产过程中使用H202的工厂排除的工业废水中所含有的H202,利用H202和CAT处理工业废水,可以降解芳环化合物和脂族化合物,利用H202和CAT处理生物过滤器,还可提高其对废水脱臭效果。另外,通过检测生物体内过氧化氢酶的活力的变化,可以为环境污染的生物监测提供检测依据【36】。利用CAT与H202同时使用放出氧气的机理,可用于橡胶成型,塑料及多泡性黏合剂。用葡萄糖氧化酶,除去食品中葡萄糖或氧时,生成的H202用CAT分解,H202分解时生成的氧有杀菌和漂白的作用。1.4.2 CAT的分离纯化目前市售的CAT来源有3个g通过牛肝、猪肝提取纯化而得;由黑曲霉在通风搅拌等控制下培养而得;由小球菌经深层发酵提取精制而得。在国内,发酵法提取过氧化氢酶仅处于实验室研究阶段,尚无工业化生产。而从动物原料中提取过氧化氢酶的研究在近几年才引起重视。有人利用清蛋白和CAT共纯化,从人胎盘发生溶血的血液中提纯过氧化氢酶,以及利用染料亲和层析法纯化CATt371。有研究者们分离并生产了一种CAT产品,并将其命名为超稳定过氧化氢酶【38】。国内方面,有人采用CM.23及scphadexG.100层析和硫酸铵盐析法纯化了猪血CAT[391。杨利等【钧】首次采用以改性纤维素为基质、亚氨二乙酸(IDA)为取代配基的铜离了对牛肝过氧化氢酶(BLC)的分离纯化进行了研究。林少琴等【41】将新鲜贻贝肉均浆抽提液经硫酸铵盐析、柱层析纯化,得到贝壳动物的CAT,他们还对其某些特性进行了研究。王凡强等【42】将产热稳定性过氧化氢酶的重组大肠杆菌培养后菌体破碎得到的粗酶液经热处理、硫酸铵分级沉淀、层析提纯后得到电泳纯的酶。第1章序言1.4.3 OAT的活性测定雷厚成等【43】研究了过氧化氢酶活性的化学发光法测定。根据平均发光强度,从过氧化氢浓度与化学发光强度关系曲线上查找余留的过氧化氢浓度。徐镜波等Ⅲ】测定CAT活性的原理是利用动植物和微生物细胞内的CAT可催化过氧化氢分解为水和分子氧,通过加入一定量的H202,用碘量法测定未被催化分解的H202,根据被催化分解的H202量,可计算CAT的活性。碘量法又可分为碘量滴定法和紫外分光光度碘量法。碘量滴定法利用H202能将Ⅺ中的I’氧化,生成12,以淀粉作为滴定终点指示剂,用硫代硫酸钠滴定,计算出生成12的量,再换算成所消耗的量。紫外分光光度碘量法,利用12在波长350nm处有一个吸收高峰,吸光度与12的含量成正比来计算生成12的量。用UV-120光度计测定样品对波长为350rim光线的吸光度。彭志英等【45“61采用紫外速率直接法测定CAT活性,这种方法是利用CAT将H202分解生成H20和02这一反应。H202在240rim波长下有强烈吸收峰,CAT能分解过氧化氢,使反应溶液吸光度(A240)随反应时间增加而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出CAT的活性。陈人义等【47】研究用催化分光光度法快速测定血清CAT活性。他们利用CAT催化分解底物过氧化氢,剩余的过氧化氢与钼酸铵、碘化钾反应生成单质碘,后者与淀粉反应生成蓝色,其蓝色深浅与酶的活性成反比。此方法灵敏度高,稳定性较好,简单快速,适用于血清CAT活性的测定,或者根据酶促反应后剩余的过氧化氢与钼酸铵形成稳定的黄色复合物,其颜色的深浅与酶活性成反比,进行比色测定【4引。李彬先、舒立涛【49】根据急性胰腺炎时CAT含量显著增高,通过测定CAT的含量可对胰腺炎作出早期诊断,其敏感性较高,适于临床应用,该方法的原理是CAT能分解过氧化氢产生氧的游离基,氧的游离基将邻***氧化成没什子橙,在405nm波长下测定每分钟邻***转化没什子橙的la mol数,再计算CAT的活性。胡常英等【50】采用两步法对过氧化氢酶活力进行测定,第一步是经典滴定法中的CAT与过氧化氢作用,第二步是剩余的过氧化氢在有氧供体(邻一联二茴香***DH2)存在的情况下用CAT催化反应,氧供体(DH2)被氧化成棕色物,以棕色深浅反推过氧化氢酶活力单位。该方法具有准确、实用性强、仪器要求简单的特点。目前,有关CAT的凝胶活性染色法均为负染法,先后有淀粉一碘系统法【511,FeCl3播放器加载中，请稍候...
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拍照搜题，秒出答案
大肠杆菌可以进行多种代谢方式,以下哪种方式产能最多：A.有氧呼吸 B.无氧呼吸 C.发酵
大肠杆菌可以进行多种代谢方式,以下哪种方式产能最多：A.有氧呼吸 B.无氧呼吸 C.发酵
产能最多,当然是有氧呼吸了.有氧呼吸分解有机物彻底,释放能量多.无氧呼吸产能少,有氧呼吸产能多.微生物进行无氧呼吸,一般叫做发酵.大肠杆菌是兼性厌氧的细菌.
lz你要听课啊大肠杆菌能在有氧的条件下进行细胞呼吸吗?_作业帮
拍照搜题，秒出答案
大肠杆菌能在有氧的条件下进行细胞呼吸吗?
大肠杆菌能在有氧的条件下进行细胞呼吸吗?
大肠杆菌在有氧的情况下进行有氧呼吸,在无氧的情况下进行无氧呼吸.因为大肠杆菌的新陈代谢类型是兼性厌氧型.相关知识点：
2003年全国部分省爆发流行的非典型肺炎是由冠状病毒感染引起的，它与大肠杆菌最明显的区别是（ ） A．有无成形的细胞核 B．有无细胞结构 C
2003 年全国部分省爆发流行的非典型肺炎是由冠状病毒感染引起的，它与最明显的区别是（
） A ． 有无成形的细胞核
B ． 有无细胞结构 C ． 有无细胞壁
D ． 有无遗传物质下
答案:B【解析】试题分析：病毒无细胞结构，是原核细胞结构，所以B选项符合题意。考点：本题考查细胞的结构，意在考查考生能理解所学知识的要点。 
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