请问大家 用Lipofectamine? 2000 转染细胞时培养夜里面到底加不加血清(血清,转染细胞,质粒,无血清培养液) - 细胞实验 - 生物秀
标题: 请问大家 用Lipofectamine? 2000 转染细胞时培养夜里面到底加不加血清(血清,转染细胞,质粒,无血清培养液)
摘要: [请问大家 用Lipofectamine&
转染细胞时培养夜里面到底加不加血清(血清,转染细胞,质粒,无血清培养液)] 请问大家，用Lipofectamine 2000 转染细胞时，除了质粒和Lipofectamine 2000 用无血清培养液稀释外，细胞培养液是不是也必须无血清，请做过转染的战友给点建议，加不加有什么差别吗？再有6小时可以换液了吧（10％DMEM），换不换有差别吗，此时可以加双抗了吗。谢谢大家。 关键词:[血清 转染细胞 质粒 无血清培养液 有差别 转染 细胞培养液]……
请问大家，用Lipofectamine? 2000 转染细胞时，除了质粒和Lipofectamine? 2000 用无血清培养液稀释外，液是不是也必须无，请做过转染的朋友给点建议，加不加有什么差别吗？再有6小时可以换液了吧（10％DMEM），换不换有差别吗，此时可以加双抗了吗。谢谢大家。
回复稀释时一定不要加和双抗，培养液里可以加血清，加与不加没什么大的区别。至于换液根据复合物对细胞的毒性而定，有的转染后对细胞产生毒刑，所以最好要换液，换液可以从转染后0.5-24小时。如果以后要用抗性（如G418）筛选那么，最好不要加双抗了。回复如果以后要用抗性（如G418）筛选那么，最好不要加双抗了。 这个是什么原因啊！？回复稀释时一定不要加血清和双抗，培养液里也不加血清，并且转染时用ＰＢＳ清洗细胞两遍，已消除血清对转染的抑制效果，６小时后补加血清，我是这么做的，效果不错．回复谢谢大家.zxzxzxzxzx ,请问补加血清时是不是滴几滴就可以,你换液了吗,回复转染的时候不加血清。但是转染过后最好换液，换成完全培养基吧。反正换液跟补加血清相比也麻烦不了多少，而且脂质体对细胞还是有一定的毒性的，换掉它比较好。回复我转染时用OPTI-MEM无血清培养基 一般4-5小时后换为完全培养基（血清浓度5%） 48小时后在进行筛选 效果不错回复同问，为何用G148筛选不要加双抗啊？难道双抗对细胞状态有影响？回复大家怎么理解这句话：Lipofectamine? 2000说明书上的：4）incubate the cells at 37°C in a CO2 incubator for 24-48 hours until they are ready to assay for transgene expression. It is not necessary to remove the complexes
however, growth medium may be replaced after 4-6 hours without loss of transfection activity. 是不是可以在24－48小时中换培养液？回复我也曾就此问题请教过一个公司，他们的技术支持这样告诉我：在稀释LIPOFECTINE和质粒DNA时，一定要用无血清和无(antibiotic)的培养基，而且培养基的成分越简单越好，因为这个过程只是为了让LIPFECTINE 包裹DNA，血清影响LIPOFECTINE 对DNA包裹。只要包裹好了，有血清应该对转染的过程不是很大。回复大家怎么理解这句话：Lipofectamine? 2000说明书上的：4）incubate the cells at 37°C in a CO2 incubator for 24-48 hours until they are ready to assay for transgene expression. It is not necessary to remove the complexes
however, growth medium may be replaced after 4-6 hours without loss of transfection activity. 是不是可以在24－48小时中换培养液 转染后6小时或更久（根据细胞状态而定，一般1 /4~1/5细胞形态改变既可），可以更换完全培养基。再24～48h可以更换含筛选(antibiotic)的完全培养基，这个时间也依赖于细胞的状态（部分细胞开始有生长、伸展的迹象时）。此外，加抗生素(antibiotic)时建议不要换液，直接加到培养液中既可，因此时细胞较脆弱，尽量减少损伤）回复转染的时候培养液里不加血清，并且转染前用ＰＢＳ或hank"s清洗细胞两遍。尽量的去除血清。血清对转染效率有抑制作用。转染过后最好换液，换成完全培养基。而且转染时培养基内不能有抗生素(antibiotic)。脂质体对细胞有一定的毒性的，换掉它比较好。回复看了上面的讨论 作为转染新手的我 非常想知道另外一个问题 就是根据说明书，转染之前需要更换培养基进行刺激，那么更换的培养基中是否是完全培养基还是物抗无血清的培养基呢？非常感谢
相关热词：
..........
生物秀是目前国内最具影响力的生物医药门户网站之一，致力于IT技术和BT的跨界融合以及生物医药领域前沿技术和成功商业模式的传播。为生物医药领域研究人员和企业提供最具价值的行业资讯、专业技术、学术交流平台、会议会展、电子商务和求职招聘等一站式服务。
官方微信号：shengwuxiu
电话：021-君，已阅读到文档的结尾了呢~~
TRAF6基因沉默对内毒素炎症反应的抑制效应研究抑制,毒素,作用,研究,TRAF6,作用研究,抑制效应,基因沉默,traf6,内毒杆菌
扫扫二维码，随身浏览文档
手机或平板扫扫即可继续访问
TRAF6基因沉默对内毒素炎症反应的抑制效应研究
举报该文档为侵权文档。
举报该文档含有违规或不良信息。
反馈该文档无法正常浏览。
举报该文档为重复文档。
推荐理由：
将文档分享至：
分享完整地址
文档地址：
粘贴到BBS或博客
flash地址：
支持嵌入FLASH地址的网站使用
html代码：
&embed src='/DocinViewer-4.swf' width='100%' height='600' type=application/x-shockwave-flash ALLOWFULLSCREEN='true' ALLOWSCRIPTACCESS='always'&&/embed&
450px*300px480px*400px650px*490px
支持嵌入HTML代码的网站使用
您的内容已经提交成功
您所提交的内容需要审核后才能发布，请您等待！
3秒自动关闭窗口细胞库/细胞培养
ELISA试剂盒
实验室仪器/设备
原辅料包材
体外检测试剂
转染的时候能否用加血清的培养基
转染的时候能否用加血清的培养基
来源：互联网
点击次数：178
总有一种转染方法适合你
ayao0问：转染
的时候可以用加血清的培养基吗
前几天学习做细胞脂质体转染
，看师姐是用的加血清的培养基，整个过程比以前的方法简单方便了很多。
不用过四个小时就去换液，可以过了48个小时看转染
效率很不好，以前也有人用这种方法做过，很成功。
到底这种新的方法行不行的通，做的时候需要注意哪些问题
monica912认为：
这种方法是完全可以的，我经常这样做，没问题的。
后最好4~6小时或过夜就换液，目的就像楼上说的减少脂质体对细胞的损伤。换液时可以用无血清的培养液洗一下细胞(一定要轻)，然后再加培养液。
biologychem认为：
时最好换无血清培养基，因为这样可以让细胞饥饿一下，有助于随后转染时细胞对脂质体-质粒复合物的摄取，过4-8小时再换为正常培养基，减少脂质体对细胞的毒性作用，这样比较好.
pazj指出：
我的做法和biologychem 的一样，转染率很高的，我觉得很不错的，
转染时用血清培养基的这种方法，我没试过。
相关实验方法
本网站所有注明“来源：丁香园”的文字、图片和音视频资料，版权均属于丁香园所有，非经授权，任何媒体、网站或个人不得转载，授权转载时须注明“来源：丁香园”。本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系，我们将立即进行删除处理。
难度系数：
共405人点评打分
难度系数：
共183人点评打分
难度系数：
共153人点评打分
难度系数：
共147人点评打分
难度系数：
共125人点评打分
丁香通采购热线：400-
Copyright (C)
DXY All Rights Reserved.细胞转染的步骤_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
细胞转染的步骤
上传于||暂无简介
阅读已结束，如果下载本文需要使用0下载券
想免费下载更多文档？
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢}