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&&&&*我国最大贯流式机组群电站基本建成
&&&&*人均GDP明年奔4000美元
&&&&*少林寺上市风波始末
&&&&*“网络打黑”勿轻言
&&&&*“后奥运”时代的体坛悲喜剧
&&&&*春晚导演组否认允许假唱
&&&&【天气小贴士】
&&&&今天是冬至,二十四节气之一。进入冬至,将开始“三九天”中的“一九”,逐渐进入南宁市民认为“冷”的季节。对此,民间有谚语:“冬干年湿,冬湿年干”,专家表示,这一说法往年在广西有约七成的准确率,按照这一说法,春节很可能会出现降雨天气。未来一周内,北方依然有冷空气活跃,届时南下影响广西带来降温的可能性依然存在。
&&&&明日广西主要城市天气:
&&&&南宁 11-20℃ 多云
&&&&桂林 9-18℃ 多云
&&&&柳州 11-18℃ 多云转阴
&&&&【广西新闻】
&&&&我国最大贯流式机组群电站基本建成
&&&&新华社记者周丹丹、谢大明报道:近日,广西长洲水利枢纽举行15台机组全面投产发电总结大会,标志着我国目前最大的贯流式机组群电站工程基本建设完成。
&&&&长洲水利枢纽工程是国家“西电东送”和广西“十一五”期间的重点工程项目。大坝创造了多项“全国之最”:3521米的长度超过三峡大坝的2309.5米,成为亚洲第一长混凝土大坝;灯泡贯流式电站中,机组最多;同水头段的贯流式机组中,水轮机转轮直径最大、单机容量最大,被誉为贯流式机组中的“三峡工程”。工程于2003年开工,2008年创造了“一年六台机组投产发电”的行业纪录。
&&&&广西沼气池入户率达44%
&&&&仍居全国第一
&&&&新华社记者吴小康22日从自治区能源工作办公室获悉,截至2009年11月底,广西累计建成户用沼气池352万座,沼气池入户率达44%,为全国沼气池入户率最高的省区。按测算,这些沼气池每年可为农户提供优质燃料14亿立方米,能源开发量约折合标准煤221万吨。同时,每年还可提供8800万吨沼液沼渣优质有机肥料,为农民增收节支约53亿元。
  广西:三级共建担保体系力解企业融资难题
&&&&新华社记者张周来报道:截至2009年11月,广西金融投资集团首创的自治区、市、县三级共建贷款担保体系已为全广西中小企业提供担保取得贷款45亿元,不到一年的业务量远远超过了广西投融资担保公司成立6年来的业务总和,极大缓解了企业融资困难。
&&&&自治区党委常委、自治区副主席李金早认为,三级共建贷款担保体系在全国是一个创新,是广西经济和金融工作的一大亮点,为解决中小企业贷款难、融资难闯出一条新路子。
&&&&【新闻速递】
&&&&“陈江会”签署三项协议
&&&&海协会与海基会第四次领导人会谈22日上午在台中裕元花园酒店举行。会谈同意将商签两岸经济合作框架协议列为明年第五次两会会谈重点推动的协商议题,将尽快安排两会框架下的专家级商谈。海协会会长陈云林与海基会董事长江丙坤当天下午在台中签署两岸渔船船员劳务合作、两岸农产品检疫检验合作、两岸标准计量检验认证合作等三项协议。陈云林向江丙坤通报,大陆方面已确定,台湾同胞赠送给大陆同胞的一对梅花鹿和一对长鬃山羊将落户山东威海森林公园。
&&&&全国人大常委会召开会议
&&&&审议社会保险法等草案
&&&&十一届全国人大常委会第十二次会议22日在京举行,继续审议侵权责任法草案、社会保险法草案等;首次审议村民委员会组织法修订草案。社会保险法草案增加规定:“参加基本养老保险的个人,达到法定退休年龄时累计缴费不足十五年的,可以缴费至满十五年,按月领取基本养老金。”
&&&&人均GDP明年奔4000美元
&&&&社科院社会学所所长李培林在2010年《社会蓝皮书》发布会上预测,中国人均GDP增速远超当初的计划,明年年底将会达到4000美元。李培林还表示,2009年,总体上已经进入小康居民消费阶段,住房和汽车等大额家庭消费开始进入普及阶段,教育、医疗、旅游等消费支出的比例迅速增加。(新京报)
&&&&上海地铁两车擦碰造成大面积停驶:22日,滞留乘客在上海火车站附近的应急公交疏散点转乘地面公交。
&&&&当日5时50分,上海地铁1号线突发供电触网跳闸故障,造成该区列车停驶。在运营调整恢复中,又发生两车擦碰事故,造成部分停运。为此上海交管部门积极组织力量疏散滞留乘客。(新华社发)
  涉黄光裕案上海公安局原副局长受处分
&&&&日前,中共上海市纪委对上海市公安局原副局长朱影做出党内纪律处分,撤销其九届上海市纪委委员职务。朱影并未被移送司法机关。纪检部门对朱影做出纪律处分,是因为朱影被查出有涉及黄光裕案件的违纪行为。
  黄茂如已回公司正常上班
&&&&在“失踪”约一周后,茂业国际董事长黄茂如回到公司正常上班。对于黄茂如的归来,成商集团于12月21日晚间率先发布公告予以确认,但未对黄茂如“失踪”原因及去向进行任何披露。(中证网)
&&&&儿童血铅超标事件相关人员受罚
&&&&陕西凤翔对部分儿童血铅超标事件进行责任追究,11名干部受到党纪、政纪处分,东岭冶炼公司总经理、副总经理已被免职。
&&&&持刀劫持公交车案犯被判死刑
&&&&曾经在去年5月12日持刀劫持并驾驶一辆大型公交车制造多起交通事故,致2人死亡、10人受伤、27辆机动车受损的案犯苏海军,近日被呼和浩特市中级人民法院一审判处死刑,缓期2年执行。(以上除注明外均据新华网)
&&&&【热点追踪】
&&&&少林寺上市风波始末
&&&&少林寺,这个令人产生敬畏感和神秘感的地方,近日因一则“将上市”的消息再次在国内外引起轩然大波。
&&&&&上市疑云
&&&&12月16日的上海《东方早报》率先披露“少林寺将在2011年上市”的消息称,“香港中旅集团与登封市已签署《合作框架协议书》”。
&&&&按协议书显示,双方确定斥资1亿元成立公司,其中少林寺门票经营权等嵩山少林景区资产被登封市作价4900万元作为入股的一部分,双方合资年限为40年,新公司拟定2011年上市。
&&&&网络上对此几乎是一面倒的批评。有网友感叹:天下从此无少林!
&&&&&“局外”少林
&&&&但事实上,少林寺对于“被上市”的消息“一无所知”。少林寺知识产权和无形资产管理中心总经理钱大梁公开表示,他们对此一点都不知情。
&&&&此后,面对外界众多质疑之声,登封市委宣传部部长崔世英承认该市与香港中旅集团这一合作计划的存在,但尚未签订正式合作协议,不存在 “少林寺上市”等问题。
&&&&&商人心中“唐僧肉”
&&&&1982年,电影《少林寺》将沉寂多年的少林寺推向历史新的舞台,也间接将少林寺推上了商业化大潮。少林寺成了商人心中的唐僧肉,人人都想“吃”一口,实现自己的“得道升仙”。
&&&&&向外走向钱看
&&&&1999年,34岁的释永信升任为该寺最年轻方丈。他极富商业色彩的经营之道,积极发展并保护少林寺的品牌,颠覆世人对出家人的印象。他也被戴上了多顶帽子:中国首位取得企管硕士学位的僧人、少林寺主题电影的制片人、少林寺“首席执行官”。
&&&&在一些人眼里,少林寺堕落了。
&&&&&道德危机
&&&&如果说最初少林寺商业化是为了摆脱经济压力和拓宽国际知名度,如今,它反给少林寺带来了一种新的困境--道德危机。有人开始问:少林寺你还能走多远?少林还能有真功夫么?
&&&&在少林的课堂知客延开法师看来,“大陆少林寺的规矩并未改变,早晚功课、练武、读经,样样没变!若真要说少林有什么变化,就是有了自来水,(和尚)不用天天挑水喝。”(国际先驱导报)
&&&&【有话要说】
&&&&“网络打黑”勿轻言
&&&&对于“网络打黑”的呼吁,公众舆论似乎更为理性。新华每日电讯发表评论称,互联网世界固然存在一些乱象,但若因此矫枉过正,将网络舆论妖魔化,难免会伤及其积极的一面。我们应学习大禹治水的疏导之术,在现实当中引导、规范或者打击制造热点牟利等行为。
&&&&至于“网络黑社会”这一定性,《新京报》也表达了反对意见。12月21日评论文章认为,利用网络打击竞争对手是商业上的事,与刑法上的“黑社会组织犯罪”不是一回事。
&&&&广州日报12月21日评论称,假若借着“网上打黑”而对网络言论设置重重屏障,阻拦网络监督,那么,窒息的是生气勃勃的民主风气,对推进改革开放和社会监督都没有好处。
  你对善良有免疫力了吗
&&&&拾荒老太捡7000元交还民警借1元钱吃早饭--这则新闻在论坛上流传的时候,有网民给它起名“光明帖”。这则新闻因为这三个字而变得意味深长。
&&&&新京报发表评论称,这是被感动并怀疑着的善良。有人赞叹,“小人物见大精神”;有人疑问,老太太是不是该得到10%的奖励;还有人追问,这7000元会回到失主的手里吗?一滴水见太阳,“拾荒老太拾金不昧”引发出来的网络闲话照见的是什么,是社会多元价值的折射,还是我们这个时代的失措与迷茫。
&&&&善良是道德的基础,是社会和谐的原动力。倘若我们对善良产生了免疫力,这个社会将会怎样?拾荒老太无意中用善良完成了对这个时代的测试,而测试的结果,发现有些人具备了病态的免疫力。
&&&&南半球酷暑:21日,人们在巴西里约热内卢的海滩上享受阳光。当天,里约热内卢的最高温度超过35摄氏度。在北半球遭遇严寒袭击时,南半球却烈日炎炎。(新华社/法新)
&&&&【澳门回归十周年】
&&&&回归十年真情感言录
&&&&&以赤子之心回报澳门
&&&&“我是土生土长的澳门人,与澳门居民一起经历了回归祖国的近10年路程。我将以赤子之心回报祖国、回报澳门。”--澳门新任特首崔世安。
&&&&&回到母亲怀抱的孩子最幸福
&&&&“当时唱这首歌的时候,小学三年级的我还不太会讲普通话,对歌词也是一知半解,现在,我已经长大,能够慢慢体会《七子之歌》所代表的含义。小孩子离开了母亲很久,最后终于回到了母亲的怀抱,是最幸福的事情。” --《七子之歌》领唱容韵琳。
&&&&&对澳门未来充满信心
&&&&“澳门回归中国10年来,经济活跃发展,社会进步,这是所有人都有目共睹的。人们对澳门未来充满信心。”--葡萄牙总统席尔瓦。
&&&&&让莲花宝地更加流光溢彩
&&&&10年见证辉煌。澳门以经济社会的全面发展以及繁荣与活力,向世界展示“一国两制”的成功和精彩。我们相信,未来10年,特区各项社会事业必将蓬勃发展,从而使澳门这块莲花宝地更加流光溢彩、繁花似锦。--新华社评论员。
&&&&互动话题“我为赠澳门熊猫起名”精彩留言摘录如下:
&&&&尾号1966:现在社会都普遍推广“和谐”,澳门回归十周年了,不如叫“全全和美美”,涵义在于“十全十美的和谐”。
&&&&尾号0056:叫“澳澳庆庆”吧。
&&&&尾号7390:雄性为华澳,雌性为澳星。
&&&&尾号5693:一只取名为“澳奇”,意为澳门回归十年的发展奇迹!另一只可取名“陆缘”,意为澳门在祖国大陆的关心支持下,才有了今天之成就,澳门人民应该记住这份缘!
&&&&【体坛聚焦】
&&&&“后奥运”时代的体坛悲喜剧
&&&&2009年的中国体坛,在“后奥运”时代的节拍中,上演了一出出惊心动魄的喜剧、悲剧和闹剧,供人谈笑,令人回味。
&&&&&刘翔重新出山
&&&&北京奥运会上刘翔因伤退赛,时隔398天之后,刘翔战胜脚部的伤病,冲破退役的传言,完美复出。9月20日,上海国际田径黄金大奖赛,13秒15,跑出了与冠军相同的成绩。
&&&&刘翔用行动告诉人们,一个真正的勇士,只有接受失败,才能敢于胜利。
&&&&&姚明当上老板
&&&&自从季后赛脚伤发作后,姚明就告别了赛场,并将缺席新赛季。不过姚明并没闲着。今年7月,由姚明授权、“姚之队”全权运作的投资管理公司与上海东方篮球俱乐部签署俱乐部股权转让的框架协议,这意味着,姚明成了姚老板。
&&&&&“飞人”掉进“药瓶”
&&&&10月26日,十一运会组委会宣布,几天前刚获得女子100米金牌的福建选手王静兴奋剂检测呈阳性,成绩被取消。
&&&&“女飞人”王静是目前国内最优秀的女子短跑选手,即使不服药,也最有希望拿到金牌。药检结果已是铁的事实,王静将面临终身禁赛的悲惨结局。
&&&&&足球大腕“私奔”
&&&&年初,周海滨、冯潇霆的“私奔”事件,给中国足坛的巨大疮疤上撒了一把盐。两人在实德、鲁能俱乐部不知情的情况下,分别与韩国、荷兰的足球俱乐部“密谋”转会事宜。两人的行为看似“不厚道”,却是抓住了中国足协球员转会规则的漏洞。中国职业联赛的不职业可见一斑。
&&&&&奥运冠军结婚
&&&&10月18日,张怡宁,结婚。10月13日,王峰,结婚。11月,杜丽和庞伟,成为我国体育史上首对奥运冠军夫妻。
&&&&祝愿奥运冠军们能够事业、家庭“双丰收”。
&&&&&足球打假“认真”
&&&&本年度最具震撼效果的体坛事件,无疑是公安部门掀起的暴风骤雨般的足坛打假。对此,有人噤若寒蝉,但更多人是拍手称快。尽管长路漫漫,但只要路走对了,就不怕远。(新华网)
&&&&【文娱播报】
&&&&春晚导演组否认允许假唱
&&&&近日有媒体爆料,虎年春晚导演组为保证演出效果,计划采用“保守办法”,允许部分演员假唱。不过最新消息是,导演组否认了该说法,称“允许假唱”一说是“无稽之谈”。(新京报)
&&&&杨澜打造顶级私人俱乐部
&&&&日前,由“中粮集团”与“阳光媒体集团”联合倾力打造的全球顶级高端私人俱乐部--“君顶领袖会”在京宣布启动。以阳光文化基金会主席杨澜等为共同主席的君顶领袖会,全球仅有500席会员席位,目前已确认入会的首期创始会员包括查尔斯王子基金会、比尔-盖茨基金会、席琳-迪翁等在内的欧美数国之王室要员、娱乐巨星、顶级富豪等,阵容世界罕见,亚洲仅有。(人民网)
&&&&许晴:两岁孩子不是我女儿
&&&&21日有报道称,电视剧《美丽鲜花在开放》女主角许晴在片场与一个两岁左右小女孩表情亲昵,二人几分神似,貌似许晴“私生女”。该剧制片人侯传杲表示,小女孩只是剧组的演员,在戏中饰演许晴的女儿小叶果。而许晴本人在接受华商报采访时澄清说:“孩子不是我的……这个传闻很无聊。”(中新网)
&&&&谁拥有全球最美的脸蛋?
&&&&美国和加拿大研究团队计算出最新西方女性脸蛋的黄金比例,发现眼睛到嘴巴占脸长36%、双眼距离占脸宽度46%,是大家公认最迷人的脸蛋,而最符合这个公式标准的就是美国“最性感的女星”杰西卡-阿尔芭(见下图)。同时东方女性的黄金比例也随之出炉,按这些标准算下来,李嘉欣果然是标准美女,春哥(李宇春)也勉强算一个。(中新网、现代快报)
&&&&绝景之旅-南极洲:南极洲位于地球最南端,含有世界上90%的冰、70%的淡水资源,南极研究科学委员会执行董事科林-萨马海兹曾指出,如果这里的冰融化,海平面将上升63米。目前,整个南极洲的冰体正以每年约1130亿吨至2670亿吨的速度融化,并且直接威胁到企鹅等物种的存亡。图为南极洲上的帝企鹅。
&&&&【轻松阅读】
&&&&圣诞老人的帮手--中国人
&&&&不要告诉孩子们,现实中的圣诞老人的工厂不在北极附近:在中国东部的工厂,世界上超过一半的圣诞节装饰品和新奇的小玩具都是在那里生产的。
&&&&在上海西南200公里开外的工业化城市义乌,来自中国一些最穷困省份的民工每天工作13个小时,一周工作7天,只为了每月仅100美元的税后工资,而且他们甚至在12月25日也不休息。
&&&&数以百计的工厂和巨大的批发市场满足了美国对新奇小饰品小玩具70%的需求,以及全球50%的需求。这些小玩具小饰品包括圣诞树,金属箔,会跳舞的圣诞老人玩偶和充气驯鹿。
&&&&省级官员说,每年约有3.6亿美元的圣诞节商品从义乌出口,约1万种不同的物品被运到海外。但是今年,义乌尤其缺少了季节性的欢快气氛。成千上万的工人被暂时解雇,因为海外的购买者削减了订单,打算过一个廉价的圣诞节。惨淡的出口数据以及工厂老板的声明表明,这个圣诞节可能是有史以来最黑暗凄惨的。
&&&&不过,中国人一向足智多谋,其他人正在适应发生变化的市场。工厂老板刘朴宏(音)说:“圣诞节不像以前那样了,所以明年,我们将转向做万圣节的商品。商机在那里。”(新华网)
&&&&【生活百科】
  冬至节:各地趣味风俗知多少
&&&&22日是冬至,民间又称为“冬至节”,是我国非常重要的一个传统节日。冬至节,除了吃饺子、面条、汤圆、馄饨等习俗外,我国各地还有很多饶有兴趣的风俗。
&&&&在福建,冬至流行“搓丸”、“贴丸”、“馈丸”,丸子的颜色有红有白,有的被捏成小巧玲珑的玩具,如做成猪头、猪脚,还有荔枝、桃、香蕉,象征兴旺吉祥。
&&&&在杭州,人们把冬至吃剩的鱼头和鱼尾放在米缸里过夜,隔天再取出来吃,说是“吃剩有余”。
&&&&在江苏,人们非常重视冬至,前一夜称“节夜”,也称“除夜”,制糕以祭祖,并馈赠亲友,设席宴饮,称之“节酒”,也称“分冬酒”。有的人家以黄酒加糖浆制成冬阳酒。
&&&&在广东,人们冬至一般祭祖,还要到坟墓前挂纸,俗称“挂冬”。有的地方冬至宴客以鱼肉腊味蚬菜合煮,众人环锅而食,称之“围炉”。
&&&&民俗专家表示,种种趣味盎然的冬至习俗,表现了人们祈求生活富足的心愿,也给我国的民间节日增添了丰富多样的色彩。(新华网)
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流式细胞仪(Flow cytometry )是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零的仪器,它只能测量一个细胞的诸如总核酸量,总蛋白量等指标,而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说,它的细节 为零。定&&&&义对细胞进行自动分析和分选的装置组&&&&成流动室和液流系统注意事项特别强度每次测量都需要对照组应&&&&用分析细胞表面标志
流式细胞仪主要由四部分组成。它们是:流动室和液流系统;激光源和;光电管和检测系统;计算机和分析系统。上图为其结构示意图。流动室由管、管和喷嘴等组成,常用光学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作。设计和制作均很精细,是液流系统的心脏。管贮放样品,单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出;由鞘液管从四周流向喷孔,包围在样品外周后从喷嘴射出。为了保证液流是稳液,一般限制液流速度υ&10m/s。由于的作用,被检测限制在液流的轴线上。流动室上装有压电晶体,受到振荡信号可发生振动。经特异染色的细胞需要合适的光源照射激发才能发出荧光供收集检测。常用的光源有弧光灯和激光;激光器又以为普遍,也有配和或染料激光器。光源的选择主要根据被激发物质的激发光谱而定。汞灯是最常用的弧光灯,其发射光谱大部分集中于300~400nm,很适合需要用紫外光激发的场合。的发射中,绿光514nm和蓝光488nm的谱线最强,约占总光强的80%;光谱多集中在部分,以647nm较强。免疫学上使用的一些激发光在550nm以上,可使用染料激光器。将有机染料做为激光器泵浦的一种成份,可使原激光器的发生改变以适应需要即构成染料激光器。例如用的绿光泵浦含有Rhodamine6G水溶液的染料激光器,则可得到550~650nm连续可调的激光,尤在590nm处最高,约可占到一半。为使细胞得到均匀照射,并提高,照射到细胞上的激光光斑直径应和细胞直径相近。因此需将激光光束经会聚。光斑直径d可由下式确定:d=4λf/πD。λ为激光;f为焦距;D为激光束直径。棱镜用来选择激光的,调整反射镜的角度使调谐到所需要的λ。为了进一步使检测的发射更强,并提高荧光讯号的信噪比,在中还使用了多种滤片。带阻或带通滤片是有选择性地使某一滤长区段的滤除或通过。例如使用525nm带通滤片只允许FITC(Fluoresceinisothiocyanate,异)发射的525nm绿光通过。长波通过反射镜只允许某一以上的通过而将此波长以下的另一特定波长的光线反射。在免疫分析中常要同时探测两种以上的波长的信号,就采用反射镜,或二向色性分光器,来有效地将各种荧光分开。经荧光染色的细胞受合适的光激发后所产生的荧光是通过光电转换器转变成而进行测量的。光电倍增管(PMT)最为常用。PMT的响应时间短,仅为ns数量级;特性好,在200~900nm的光谱区,光量子产额都比较高。光电倍增管的增益从10到10可连续调节 ,因此对弱光测量十分有利。光电管运行时特别要注意稳定性问题,工作电压要十分稳定,工作及功率不能太大。一般功耗低于0.5W;最大阳极在几个毫安。此外要注意对光电管进行处理,并注意良好的。在使用中还要注意安装位置不同的PMT,因为特性不同,不宜互换。也有用硅光电二极管的,它在强光下稳定性比PMT好。
从PMT输出的仍然较弱,需要经过放大后才能输入分析仪器。流式细胞计中一般备有两类放大器。一类是输出信号辐度与输入信号成,称为线性放大器。线性放大器适用于在较小范围内变化的信号以及代表生物学线性过程的信号,例DNA测量等。另一类是对数放大器,输出信号和输入信号之间成关系。在免疫学测量中常使用对数放大器。因为在免疫分析时常要同时显示阴性、阳性和强阳性三个亚群,它们的荧光强度相差1~2个数量级;而且在多色测量中,用对数放大器采集数据易于解释。此外还有调节 便利、细胞群体分布形状不易受外界工作条件影响等优点。经放大后的被送往计算机分析器。多道的道数是和的脉冲高度相对应的,也是和光信号的强弱相关的。对应道数年通常代表发出该信号的细胞相对数目。多道分析器出来的信号再经输往微机处理器编成数据文件,或存贮于计算机的硬盘和软盘上,或存于仪器内以备调用。计算机的存贮容量较大,可存贮同一细胞的6~8个参数。存贮于计算机内的数据可以在实测后脱机重现,进行数据处理和分析,最后给出结果。除上述四个主要部分外,还备有电源及压缩气体等附加。下面分别简要介绍流式细胞仪有关的参数测量、样品分选及数据处理等工作原理。流式细胞仪可同时进行多参数测量,信息主要来自特异性荧光信号及非荧光散射信号。测量是在测量区进行的,所谓测量区就是照射激光束和喷出喷孔的液流束垂直相交点。液流中央的单个细胞通过测量区时,受到会向为2π的整个空间线,散射光的和入射光的波长相同。的强度及其空间分布与细胞的大小、形态、质膜和细胞内部结构密切相关,因为这些生物学参数又和细胞对的反射、折射等光学特性有关。未遭受任何损坏的细胞对都具有特征性的散射,因此可利用不同的信号对不经染色进行分析和分选。经过固定的和染色处理的细胞由于光学性质的改变,其信号当然不同于活细胞。不仅与作为散射中心的细胞的参数相关,还跟散射角、及收集散射光线的等有关。
在测量中,常用的是两种散射方向的测量:①前向角(即0角)散射(FSC);②侧向散射(SSC),又称90角散射。这时所说的角度指的是激光束照射方向与收集信号的光电倍增管轴向方向之间大致所成的角度。一般说来,前向角的强度与细胞的大小有关,对同种细胞群体随着细胞截面积的增大而增大;对球形活细胞经实验表明在小范围内基本上和截面积大小成;对于形状复杂具有取向性的细胞则可能差异很大,尤其需要注意。侧向的测量主要用来获取有关细胞内部精细结构的颗粒性质的有关信息。侧向虽然也与细胞的形状和大小有关,但它对、胞质、的折射率更为敏感,也能对内较大颗粒给出灵敏反映。
在实际使用中,仪器首先要对光散射信号进行测量。当光散射分析与荧光探针联合使用时,可鉴别出样品中被染色和未被染色细胞。光散射测量最有效的用途是从非均一的群体中鉴别出某些亚群。
荧光信号主要包括两部分:①自发荧光,即不经荧光染色细胞内部的经光照射后所发出的荧光;②特征荧光,即由细胞经染色结合上的受光照而发出的荧光,其荧光强度较弱,也与照射激光不同。自发荧光信号为噪声信号,在多数情况下会干扰对特异荧光信号的分辨和测量。在等测量中,对于结合水平不高的荧光抗体来说,如何提高信噪比是个关键。一般说来,细胞成分中能够产生的自发荧光的分子(例核黄素、等)的含量越高,自发荧光越强;培养细胞中死细胞/活细胞比例越高,自发荧光越强;细胞样品中所含亮细胞的比例越高,自发荧光越强。
减少自发荧光干扰、提高信噪比的主要措施是:①尽量选用较亮的;②选用适宜的激光和滤片;③采用电子补偿电路,将自发荧光的本底贡献予以补偿。流式细胞仪的分选功能是由器来完成的。总的过程是:由喷嘴射出的液柱被分割成一连串的小水滴,根据选定的某个参数由逻辑电路判明是否将被分选,而后由充电电路对选定滴充电,带电液滴携带细胞通过静电场而发生偏转,落入收集器中;其它液体被当作废液抽吸掉,某些类型的仪器也有采用捕获管来进行分选的。
稳定的小液滴是由流动室上的压电晶体在几十KHz的作用下发生振动而迫使液流均匀断裂而形成的。一般液滴间距约数百μm。实验f=v/4.5d给出形成稳定水滴的振荡信号频率。其中v是液流速度,d为喷孔直径。由此可知使用不同孔径的喷孔及改变液流速度,可能会改变分选效果。使分选的含细胞液滴在中的偏转是由充电电路和偏转板共同完成的。充电电压一般选+150V,或-150V;偏转板间的电位差为数千伏。充电电路中的充电脉冲发生器是由逻辑电路控制的,因此从参数测定经逻辑选择再到脉冲充电需要一段延迟时间,一般为数十ms。精确测定延迟时间是决定分选质量的关键,仪器多采用移位寄存器数字电路来产生延迟。可根据具体要求予以适当调整。
(50)数据处理原理:FCM的数据处理主要包括数据的显示和分析,至于对仪器给出的结果如何解释则随所要解决的具体问题而定。
①数据显示:FCM的数据显示方式包括单参数直方图、二维点图、二维等高图、假三维图和列表模式等。
直方图是一维数据用作最多的图形显示形式,既可用于定性分析,又可用于定量分析,形同一般X—Y平面仪给出的。根据选择放大器类型不同,坐标可以是或对数标度,用“道数”来表示,实质上是所测的荧光或的强度。坐标一般表示的是细胞的相对数。图10-2给出的是直方图形式。只能显示一个参数与细胞之间的关系是它的局限性。
二维点图能够显示两个独立参数与细胞之间的关系。坐标和坐标分别为与细胞有关的两个独立参数,平面上每一个点表示同时具有相应坐标值的细胞存在(图10-3)。可以由二维点图得到两个一维,但是由于兼并现象存在,二维点图的信息量要大于二个一维直方图的信息量。所谓兼并就是说多个细胞具有相同的二维坐标在图上只表现为一个点,这样对细胞点密集的地方就难于显示它的精细结构。
图10-3  二维点图
二维等高图类似于地图上的表示法。它是为了克服二维点图的不足而设置的显示方法。等高图上每一条上具有相同的细胞相对或绝对数,即“等高”。层次越高所代表的细胞数愈多。一般层次所表示的细胞数间隔是相等的,因此等高线越密集则表示变化率越大,等高线越疏则表示变化平衡。图10-4给出了二维等高图的样式。
假三维图是利用计算机技术对等高图的一种视觉直观的表现方法。它把原二维图中的隐坐标—细胞数同时显现,但参数维图可以通过旋转、倾斜等操作,以便多方位的观察“山峰”和“谷地”的结构和细节 ,这无疑是有助于对数据进行分析的。图10-5为假三维图的示意图。
图10-4  二维等高图 图10-5  假三维图
列表模式其实只是多参数数据文件的一种计算机存贮方式,三个以上的参数数据显示是用多个、二维图和假三维图来完成的。可用ListMode中的特殊技术,开窗或用游标调出相关部分再改变进行显示。例如,“一调二”就是在图上调出二维图来;“二调一”就是从二维图中调出一维图来。图10-6给出了从二维图等高图中调出相应窗口的的示意图。
图10-6 从二维图设窗调出直方图示意
上面简要地介绍了几种数据显示形式,在实际应用中,可根据需要选择匹配,以便了解和获得尽可能多的有用信息。
②数据分析:数据分析的方法总的可分为参数方法和非参数方法两大类。当被检测的生物学系统能够用某种数学模型技术时则多使用参数方法。数学模型可以是一个方程或方程组,方程的参数产生所需要的信息来自所测的数据。例如在测定老鼠精子的DNA含量时,可以获取细胞的尖锐波形分布。如果采用函数来描述这些数据,则参数即为面积、和。方程的则通常使用。而非参数分析法对测量得到的分布形状不需要做任何假设,即采用无设定参数分析法。分析程序可以很简单,只需要直观观测;也可能很复杂,要对两个或多个逐道地进行比较。
逐点(或用手工,或用描图仪、)是大家常用的数据分析的重要手段。我们常可以用来了解数据的特性、寻找那些不曾预料的特异征兆、选择统计分析的模型、显示最终结果等。事实上,不经过先对数据进行直观观察分析就决不应该对这批数据进行。从这一点来看,非参数分析是参数分析的基础。
逐道比较工作量较大,但用直观法很容易发现明显的差异,特别是对照组和测试组。考虑到FCM的可靠性,要注意到对每组测量,都要有对照组,对照组可以是、阴性对照组、或零时刻对照组等,具体设置应根据整体实验要求而定。对照组和测试组的逐道比较往往可以减少许多不必要的误差和错误解释。顺便指出,进行比较时对的总细胞数进行处理,甚至对两条曲线逐道相减而得到“差结果曲线”往往是适宜的。
因为数据分析往往和结果解释关系十分密切,也就是说和生物学背景相关,因此具体的分析法和原理将在后面结合实例再介绍。为了表征仪器性能,往往根据使用目的和要求而提出几个技术参数或指标来定量说明。对于流式细胞仪常用的技术指标有荧光、荧光灵敏度、适用样品浓度、分选纯度、可分析测量参数等。强度一定的荧光在测量时是在一定道址上的一个的峰,荧光是指两相邻的峰可分辨的最小间隔。通常用(C.V值)来表示。C.V的为:
式中,σ为,μ是平均值。
在实际应用中,我们使用挖关系式σ=0.423FWHM;其中FWHM为峰在峰高一半处的值。现在市场上仪器的荧光均优于2.0%。反映仪器所能探测的最小荧光光强的大小。一般用荧光微球上所标可测出的FITC(fluorescein isothiocyanate 异硫氰基)的最少分子数来表示。现在市场使用仪器均可达到1000左右。仪器每秒种可分析/分选的数目。一般分析速度为;分选速度掌握在1000以下。主要给出仪器工作时样品浓度的适用范围。一般在1010细胞/ml的数量级。
其它技术参数尚多,不再一一介绍。古语说:“”。要想很好地应用流式细胞分析和分选技术,必需先对仪器进行调试,使其处于良好的工作状态,并能正确使用仪器。下面简要介绍细胞计的调试项目及要点、使用的程序等等。流式细胞仪在使用前,甚至在使用过程中都要精心进行调试,以保证工作的可靠性和最佳性。调试的项目主要是激光强度、液流速度和测量区的光路等。
激光强度:除调整反射镜的角度以调整到所需的激光出光外,还要结合显示屏上的光谱使激光的强度输出为最大。
液流速度:可通过操作台数字显示监督,调节 气体压力大小以获得稳定的液流速度。
测量区光路调节 :这是调试工作的关键。需要保证在测量区的液流、激光束、90散射测量光电系统垂直正交,而且交点较小。一般可在用标准荧光微球等校准中完成。
中所测得的量是相对值,因此需要在使用前或使用中对系统进行校准或标定,这样才能通过相对测量获得绝对的意义。因而FCM中的校准具有双重功能:仪器的准直调整和定量标度。应该稳定,有形成份形状应是大小比较一致球形,样品分散性能良好,且经济、容易获得。常用标准荧光微球作为非生物学标准样品,鸡血做为生物学标准样品。微球用材料制作,或标有,或不标记荧光素。所用的鸡血标准样品制作过程昭下:取3.8%枸橼酸或肝素抗凝的鸡血(:鸡血=1:4),经PBS清洗3次,再用5~10ml的1.0%与清洗后的鸡红细胞混合,室温下振荡醛化24h,最后经PBS再清洗,贮4℃冰箱中备用。需要指出的是因为未经荧光染色,所测光信号为鸡的自发荧光。①打开电源,对系统进行预热;
②打开气体阈,调节 压力,获得适宜的液流速度;开启光源冷却系统;
③在样品管中加入去离子水,冲洗液流的喷嘴系统;
④利用校准标准样品,调整仪器,使在激光功率、光电倍增管电压、放大器电路增益调定的基础上,0和90散射的强度最强,并要求为最小;
⑤选定流速、测量细胞数、测量参数等,在同样的工作条件下测量样品和对照样品;同时选择计算机屏上数据的显示方式,从而能直观掌握测量进程;
⑥样品测量完毕后,再用去离子水冲洗液流系统;
⑦因为实验数据已存入计算机硬盘(有的机器还备有系统,存贮量更大),因此可关闭气体、测量装置,而单独使用计算机进行数据处理;
⑧将所需结果打印出来。1)光电倍增管要求稳定的工作条件,暴露的较强的光线下以后,需要较长时间的“”以消除或降低部分本底才能工作;另外还要注意;
2)光源不得在短时间内(一般要1h左右)关上又打开;使用光源必须预热并注意冷却系统工作是否正常;
3)液流系统必需随时保持液流畅通,避免气泡栓塞,所使用的鞘流液使用前要经过过滤、;
4)注意根据测量对象的变换选用合适的滤片系统、放大器的类型等;
5)特别强度每次测量都需要对照组。1.分析标志
2.分析细胞内抗原物质
3.分析细胞受体
4.分析肿瘤细胞的DNA、RNA含量
5.分析的功能[1]
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