好烦的生物提为了得到一个关于细胞大小的印象,请尝试如下联系.人脑约冲1.5kg,大约有10的12次幂个细胞.假定每个细胞完全充满水,试计算一个脑细胞的平均大小.如果脑细胞是简单的立方庭那么这个平均大小的脑细胞每边长度是多少?如果这些细胞铺成薄薄的单细胞层,这一薄层可以覆盖生物必修1书的多少页?不懂得怎么算
人脑约冲1.5kg,大约有10的12次幂个细胞每个细胞重 1.5*10的-12次方kg每个细胞完全充满水一个细胞的体积=（1.5*10的-12次方kg）÷（1000kg/立方m）=1.5*10的-9次方立方米边长=（1.5*10的-9次方）三次方根=1.14*10的-3次方m面积=（1.14*10的-3次方）的平方=1.3*10的-6次方 平方米这一薄层可以覆盖的面积 =1.3*10的-6次方*10的12次幂=1.3*10的6次方 平方米你量一本书的一页面积用薄层面积 ÷ 一页 面积 就可以了.
人脑约重1.5kg，大约有10的12次幂个细胞
每个细胞重不是理解怎么算
1.5÷10的12次方
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1.5乘上10的-12次幂个升，即1.5乘上10的—4次幂个立方毫米，即150立方微米。
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即送15丁当
细胞数量少用什么方法提RNA，哪位有经验？SOS！！！
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这个帖子发布于12年零178天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我现在遇到的问题，就是24孔板孵育人外周血单一核细胞一段时间加药物作用，然后rt－pcr，因为资源有限，细胞采自患者的外周血，每个孔只用10的5次方个细胞。microarray站友在下面这个帖子里曾经谈到：“RNA的质量是下一步实验得基础，所以建议你买个好试剂盒，因为24孔板一般只能收到10的5次方级别的细胞，用trizol手工抽得率会很低。我现在用QIAGEN mini RNA kit质量很好，就是贵些。”那么大家是否使用过tirzol提rna，我看到trizol 说明书上提到10的2－4次方个细胞可以加糖原，然后还要过26号针头2次以剪切基因组DNA，大家谁试过？效果如何？QIAGEN mini RNA kit的试剂盒的实验流程是什么？最少能够提多少细胞？我在网上查了一下，它有100微克、1mg、6mg3种，而人的10的5次方个血细胞rna大概是多少呢？？谢谢了！
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吞吞 edited on
理论上单个细胞也可以做PCR,10 5细胞不算很少.trizol手工抽得率比QIAGEN mini RNA kit低,有条件尽管用好的,但是经费紧张时tirzol提取不失为一种经济有效的方法.如果有外周血可以多采一些,可以复孔接种,以增加细胞数. 如果细胞数少,可以减少tirzol的量.我们实验室的,他们采集外周血,ficoll液分离单个核细胞,PBS洗涤,然后加0.5mltirzol,混匀,加0.1ml氯仿,低温超速离心.....做下来的效果挺好.&RNA的质量是下一步实验得基础&不错,好的试剂可以提高RNA的效率和质量,但是下面的操作更是决定RNA质量好坏的关键.
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nixiao trizol手工抽得率比QIAGEN mini RNA kit低,有条件尽管用好的,但是经费紧张时tirzol提取不失为一种经济有效的方法.如果有外周血可以多采一些,可以复孔接种,以增加细胞数. 如果细胞数少,可以减少tirzol的量.我们实验室的,他们采集外周血,ficoll液分离单个核细胞,PBS洗涤,然后加0.5mltirzol,混匀,加0.1ml氯仿,低温超速离心.....做下来的效果挺好.&RNA的质量是下一步实验得基础&不错,好的试剂可以提高RNA的效率和质量,但是下面的操作更是决定RNA质量好坏的关键.既然你们实验室做过，太好了！他们的pbmc数量是多少？就是说他们是多少细胞加0.5mltirzol？实验步骤是什么？除了用量均减半有其它不同吗？有必要细胞加糖原，然后再过26号针头2次以剪切基因组DNA吗？谢谢了！
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吞吞 edited on
下面我把microarray回复我的内容贴出来，一方面可以聚些人气，另一方面可以让其它和我有同样问题的也长点见识，同时可以请大家再帮我参谋参谋。其它人用过的也可以给点意见。如果买QIAGEN mini RNA kit的试剂盒，应该买100微克（指的是最大提取量）那种。人的10的5次方个血细胞估计rna大概是1ug左右。QIAGEN mini RNA kit大概价格是一个样本大概40－50元RMB QIAGEN mini RNA kit的试剂盒提2X10的5次方细胞rna量（比2次1X10的5次方细胞rna多）可以做几次RT。RT体系2ug/100ul,用的是TaqMan逆转录试剂盒（Applied Biosystem)（注：real－time pcr）。非常感谢microarray的热情帮助！
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吞吞 edited on
建议你用trizol 买糖原最合算
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juliet 建议你用trizol 买糖原最合算谢谢你，juliet ！你有没有做的经验？你做的细胞数是多少，是什么细胞，得到的RNA怎么样？感谢！
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吞吞 我现在遇到的问题，就是24孔板孵育人外周血单一核细胞一段时间加药物作用，然后rt－pcr，因为资源有限，细胞采自患者的外周血，每个孔只用10的5次方个细胞。microarray站友在下面这个帖子里曾经谈到：“RNA的质量是下一步实验得基础，所以建议你买个好试剂盒，因为24孔板一般只能收到10的5次方级别的细胞，用trizol手工抽得率会很低。我现在用QIAGEN mini RNA kit质量很好，就是贵些。”那么大家是否使用过tirzol提rna，我看到trizol 说明书上提到10的2－4次方个细胞可以加糖原，然后还要过26号针头2次以剪切基因组DNA，大家谁试过？效果如何？QIAGEN mini RNA kit的试剂盒的实验流程是什么？最少能够提多少细胞？我在网上查了一下，它有100微克、1mg、6mg3种，而人的10的5次方个血细胞rna大概是多少呢？？谢谢了！
人的血细胞，如中性粒，单核细胞，嗜酸性等从分离到到TRIZOL　RNA抽提，从我的实验结果来分析的话，约可以得到100－200ng/106细胞，RNA电泳尚完整。愿意与大家共同探讨。
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人的血细胞，如中性粒，单核细胞，嗜酸性等从分离到到TRIZOL　RNA抽提，从我的实验结果来分析的话，约可以得到100－200ng/106细胞，RNA电泳尚完整。愿意与大家共同探讨。谢谢你kuhai！那么如果按照promega、gibco说明书里RT20ul就要1ug RNA，得到的RNA根本不够呀？是不是只能用real－time pcr？
我先做预实验试试吧！
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kuhai wrote:人的血细胞，如中性粒，单核细胞，嗜酸性等从分离到到TRIZOL　RNA抽提，从我的实验结果来分析的话，约可以得到100－200ng/106细胞，RNA电泳尚完整。愿意与大家共同探讨。谢谢你kuhai！那么如果按照promega、gibco说明书里RT20ul就要1ug RNA，得到的RNA根本不够呀？是不是只能用real－time pcr？ 我先做预实验试试我觉得应该采用RT－PCR的方法，好的话可以从ng级扩增目的基因。一般的也可以50ng以上。祝成功！
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我做了106细胞，共得到RNA130ng，和kuhai的经验相同，但是纯度不够，OD260/280仅为1.6，真是郁闷！
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向各位请教，你们有没有做过胚胎的RT-PCR,比如说2－细胞，4－细胞，8－细胞，这么少的细胞能否做RT,谢谢。
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吞吞 我现在遇到的问题，就是24孔板孵育人外周血单一核细胞一段时间加药物作用，然后rt－pcr，因为资源有限，细胞采自患者的外周血，每个孔只用10的5次方个细胞。microarray站友在下面这个帖子里曾经谈到：“RNA的质量是下一步实验得基础，所以建议你买个好试剂盒，因为24孔板一般只能收到10的5次方级别的细胞，用trizol手工抽得率会很低。我现在用QIAGEN mini RNA kit质量很好，就是贵些。”那么大家是否使用过tirzol提rna，我看到trizol 说明书上提到10的2－4次方个细胞可以加糖原，然后还要过26号针头2次以剪切基因组DNA，大家谁试过？效果如何？QIAGEN mini RNA kit的试剂盒的实验流程是什么？最少能够提多少细胞？我在网上查了一下，它有100微克、1mg、6mg3种，而人的10的5次方个血细胞rna大概是多少呢？？谢谢了！
人的血细胞，如中性粒，单核细胞，嗜酸性等从分离到到TRIZOL　RNA抽提，从我的实验结果来分析的话，约可以得到100－200ng/106细胞，RNA电泳尚完整。愿意与大家共同探讨。您好，您提rna有什么特殊的嘛？我的1ml血的单个核细胞提出的定量很低
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关于丁香园【图文】RNA提取及其定量分析_百度文库
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RNA提取及其定量分析
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你可能喜欢请问用TRIzol提取总RNA蛋白质除不尽的原因及解决办法?这个是我提取的方法：a）细胞或组织加入Trizol后（10cm2加1mlTrizol）,室温放置5分钟,使之充分裂解.b）12000转离心5分钟,弃掉沉淀.c）按照200µl氯仿每毫升Trizol的比例加入氯仿,涡旋混匀后在室温放置15分钟.d）4℃,12000转离心15分钟.e）将上层水相吸出,至另一个离心管中,注意,千万不要息道中间的界面；如果DNA和蛋白要同时提取,要保留下层酚相.f）按照每毫升Trizol一毫升75%乙醇的比例,涡旋震荡离心管,悬浮沉淀.g）4℃,12000转离心15分钟.弃上清.h）室温晾干.注意：RNA样品不能凉得过干,这样的话很难溶解.i）用合适量的去离子水或者TE缓冲液回溶RNA.注意：这里提到的水和TE都需要用DEPC水处理,并且高温高压灭菌.j）测定RNA的OD值,定量RNA的浓度.提取时氯仿用的是“电子清洁剂”,然后掉了异丙醇沉淀不过老板说这都不是问题
胖子_z0674
1、室温放置5分钟是不可能使之充分裂解的,要充分振荡10-15s；2、显然是DNA污染,蛋白不会跟RNA同时显色吧,这张图上有你也看不到.
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扫描下载二维码实验室如何提取RNA(材料任选)最好推荐一种常见易得的生物,给出详细的操作步骤及注意事项.
sjifbrnwek
植物病毒的RNA提取：大多植物病毒RNA为单链RNA,并且其极性与mRNA极性相同,植物病毒RNA提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获得满意结果.
提纯TMV病毒液（10mg/ml）.
冷冻台式离心机,低温真空干燥仪,电泳仪,电泳槽.
TE-饱和酚:氯仿（1:1）,氯仿,3M NaAc(pH5.2),乙醇(100%和70%),TE缓冲液,无RNA酶的双菌水.
四、操作步骤
1、取一eppendorf管加入提纯TMV（10mg/ml)400ml,再加入等体积酚/氯仿,盖紧管盖后用手充分振荡1分钟,4℃下12000g离心10分钟.
2、吸取水相于一新eppendorf管,再用酚/氯仿抽提,直至水相和有机相交界面无蛋白为止.
3、吸取水相于新eppendorf心管,加入等体积氯仿,用手倒置离心管数十秒,4℃下12000g离心10分钟.
4、取水相,加入1/10倍体积的3mol/L NaAc(pH5.2),2.5倍体积的冰冷乙醇,混匀,-20℃30分钟.
5、4℃下12000g离心15分钟,小心弃去上清液,用70%乙醇洗涤沉淀,4℃下12000g离心5分钟.
6、小心弃去上清液,沉淀真空干燥5分钟或空气干燥10分钟,并溶于无RNA酶的双菌水或TE缓冲液中.
7、取10ml进行电泳分析,另10ml用于cDNA合成.
[注意] 1、整个操作应尽可能在低温下进行.
2、由于病毒RNA镶嵌于外壳蛋白里面,因此要充分剥去病毒外壳蛋白,一般需要多次进行酚/氯仿的抽提.动植物组织mRNA提取：一、材料
水稻叶片或小鼠肝组织.
研钵,冷冻台式高速离心机,低温冰箱,冷冻真空干燥器,紫外检测仪,电泳仪,电泳槽.
1、无RNA酶灭菌水：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃ 2小时）装蒸馏水,然后加入0.01%的DEPC（体积/体积）,处理过夜后高压灭菌.
2、75%乙醇：用DEPC处理水配制75%乙醇,（用高温灭菌器皿配制）,然后装入高温烘烤的玻璃瓶中,存放于低温冰箱.
3、1×层析柱加样缓冲液；20mmol/L Tris·Cl(pH7.6),0.5mol/L NaCl,1mmol/L EDTA(pH8.0),0.1% SDS.
4、洗脱缓冲液：10mmol/L Tris·Cl (pH7.6),1mmol/L EDTA (pH8.0),0.05% SDS.
四、操作步骤
（一）动植物总RNA提取-Trizol法
Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌,样品量从几十毫克至几克.用Trizol法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染.RNA可直接用于Northern斑点分析,斑点杂交, Poly(A)+分离,体外翻译,RNase封阻分析和分子克隆.
1、将组织在液N中磨成粉末后,再以50-100mg组织加入1ml Trizol液研磨,注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%.
2、研磨液室温放置5分钟,然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入氯仿,盖紧离心管,用手剧烈摇荡离心管15秒.
3、取上层水相于一新的离心管,按每mlTrizol液加0.5ml异丙醇的比例加入异丙醇,室温放置10分钟,12000g离心10分钟.
4、弃去上清液,按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇,涡旋混匀,4℃下7500g离心5分钟.
5、小心弃去上清液,然后室温或真空干燥5-10分钟,注意不要干燥过分,否则会降低RNA的溶解度.然后将RNA溶于水中,必要时可55℃-60℃水溶 10分钟.RNA可进行mRNA分离,或贮存于70%乙醇并保存于-70℃.
[注意] 1、整个操作要带口罩及一次性手套,并尽可能在低温下操作.
2、加氯仿前的匀浆液可在-70℃保存一个月以上,RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周,-20℃保存一年.
（二）mRNA提取
由于mRNA末端含有多poly(A)+,当总RNA流径oligo(dT)纤维素时,在高盐缓冲液作用下,mRNA被特异的吸附在oligo(dT)纤维素柱上,在低盐浓度或蒸馏水中,mRNA可被洗下,经过两次oligo(dT) 纤维素柱,可得到较纯的mRNA.
1、用0.1mol/L NaOH悬浮0.5-1.0g oligo(dT)纤维素.
2、将悬浮液装入灭菌的一次性层析柱中或装入填有经DEPC处理并经高压灭菌的玻璃棉的巴斯德吸管中,柱床体积为0.5-1.0ml,用3倍柱床体积的灭菌水冲洗柱床.
3、用1x柱层析加样缓冲液冲洗柱床,直到流出液的pH值小于8.0.
4、将（一）中提取的RNA液于65℃温育5分钟后迅速冷却至室温,加入等体积2x柱层析缓冲液,上样,立即用灭菌试管收集洗出液,当所有RNA溶液进入柱床后,加入1倍柱床体积的1x层析柱加样溶液.
5、测定每一管的OD260,当洗出液中OD为0时,加入2-3倍柱床体积的灭菌洗脱缓冲液,以1/3至1/2柱床体积分管收集洗脱液.
6、测定OD260,合并含有RNA的洗脱组分.
7、加入1/10体积的3M NaAc(pH5.2), 2.5倍体积的冰冷乙醇, 混匀, -20℃30分钟.
8、4℃下12000g离心15分钟,小心弃去上清液,用70%乙醇洗 涤沉淀,4℃下12000g离心5分钟.
9、小心弃去上清液,沉淀空气干燥10分钟,或真空干燥10分钟.
10、用少量水溶解RNA液,即可用于cDNA合成（或保存在70%乙醇中并贮存于-70℃）.
[注意] 1、mRNA在70%乙醇中-70℃可保存一年以上.
2、oligo(dT)纤维素柱用后可用0.3mol/l NaOH洗净,然后用层析柱加样缓冲液平衡,并加入0.02%叠氮钠（NaN3）冰箱保存,重复使用.每次用前需用NaOH水层析柱加样缓冲液依次淋洗柱床.兔肝RNA的制备：实验目的
1.学习从兔肝中提取RNA的方法.
2.通过地衣酚显色法测定RNA的含量.
细胞内大部份RNA均与蛋白质结合在一起,并且多以核蛋白的形式存在.因此,分离制备RNA时,首先遇到的是必须使RNA与蛋白解离,并除去蛋白质.由于RNA的种类来源和存在形式不同,所用的制备方法各异,一般常用的方法有,盐酸胍法,去污剂法和苯酚法.其中,以苯酚法使用较为广泛.产品纯度高,适合小规模生产.
动物组织中以肝脏器官RNA含量较为丰富.经组织匀浆用苯酚处理并离心后RNA溶于上层被酚饱和的水相中,DNA和蛋白质则留在酚层中,向水层中加入乙醇后,RNA即以白色絮状沉淀析出.此法能较好的除去DNA和蛋白质.上述方法提取的的RNA具有生物活性.工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA；其工艺简单,所提取的核酸均为变性RNA,只能用作制备核苷酸原料.本实验就是将兔肝组织,在酚与十二烷基硫酸钠的存在下,RNA与蛋白质分离使蛋白质变性凝固.RNA溶解在水相中,用乙醇使RNA从水相中沉淀,达到分离.
RNA含量的测定,除了可用紫外吸收法及定磷法外,常用地衣酚法测定,其反应原理是当RNA与浓盐酸共热时,即发生降解,形成的核糖继而转变成糠醛,后者与3, 5-二羟甲苯（地衣酚orcinol)反应,在Fe3+或Cu2+催化下,生成鲜绿色的复合物．反应产物在670nm处有最大吸收.RNA在20－250微克范围内,光吸收与RNA浓度 成正比.地衣酚反应特异性较差,凡是戊糖均有此反应.DNA和其他杂质也能给出类似的颜色.
0.05mol/L醋酸缓冲液（PH5.0）
0.05mol/L醋酸钠35毫升, 0.2mol/L醋酸15毫升,加蒸馏水至1000毫升,混合后测PH5.0
25%SDS:称取SDS25克,溶于50％乙醇中至100毫升,室温存放.
80％酚：取苯酚80份,加蒸馏水20份,混匀后装棕色瓶中.
2mol/L醋酸钠：取无水醋酸钠16.4克,用蒸馏水溶解后配成100毫升
RNA标准溶液：取酵母标准RNA配成100μg/ml溶液.
样品待测液：准确稀释成每毫升溶液含RNA干燥制品50-100μg.
地衣酚试剂：先配制0.1%三氯化铁的浓盐酸溶液,实验前以此溶液为溶剂配成0.1%地衣酚溶液.操作步骤
RNA提取：将新鲜兔肝浸入预冷0度0.05mol/L醋酸钠缓冲液(PH5.0)中,除去肝脏处的结缔组织,除去血凝,用滤纸吸干,称取0.9克.
取0.9克肝脏,加入 0.05mol/L醋酸缓冲液(PH5.0)9毫升,250克/升.SDS1.5毫升,移入匀浆管中,匀浆后再加入等体积80%酚,再匀浆一次.
移入三角瓶中,置65度水浴中继续振摇5-8分,取出流水冷却.
离心,3000转/分,10-15分,上层为稍混浊,含有RNA的水相,中层为变性蛋白,下层为酚液,管底残渣,含有RNA.吸出上层水溶液要RNA的收获量,可向中下层液中再加1/2体积的醋酸缓冲液,同样在65度水浴中振摇提取一次,离心后所收得的上层水液,可与上述水液合并,本次实验只提取一次.
用量筒测水液的量,加入1/10体积的2mol/L醋酸钠混匀.再加入2.5倍体积预冷的95%乙醇混匀,冷却放置絮状沉淀充分形成.
离心3000转/分,10分钟,倾出上清(不要废弃,可倒入收集瓶,作蒸馏回收乙醇用.
沉淀用蒸馏水4毫升溶解,慢慢向沉淀中加入蒸馏水,不断搅拌,至沉淀完全溶解即可,待作含量测定.
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