文档分类：
下载后只包含 1 个 DOC 格式的文档，没有任何的图纸或源代码，
下载前请先预览，预览内容跟原文是一样的，在线预览图片经过高度压缩，下载原文更清晰。
您的浏览器不支持进度条
下载文档到电脑，查找使用更方便
还剩?页未读，继续阅读
播放器加载中，请稍候...
该用户其他文档
下载所得到的文件列表RAC-OVA 抗原和抗RAC 单克隆抗体的筛选.doc
文档介绍：
现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2011,Vol.27,No.12RAC-OVA抗原和抗RAC单克隆抗体的筛选李伟汉,何小维,齐维,陈富裕(华南理工大学轻工与食品学院,广东广州510640)摘要:在进行酶联免疫反应实验操作过程中,为了保证材料质量及使用的延续性,在使用前分别对两对抗原抗体进行了筛选和评价。主要是从抗体灵敏度的测定、抗体特异性的测定和抗体效价的测定这三个方面来选择灵敏度好、特异性强和效价高的一对抗原抗体。其中抗体灵敏度的测定中,单位1(江南大学)的抗体IC50的平均值为3.22μg/L,灵敏度较好;两家单位的莱克多巴***单克隆抗体的特异性都较好;单位1的抗体效价为1:32000,效价较高。最终选择江南大学提供的RAC-OVA抗原,原始浓度为10mg/mL,抗莱克多巴***单克隆抗体的原始浓度为9.8mg/mL。关键词:酶联免疫反应;灵敏度;特异性;效价;抗莱克多巴***单克隆抗体文章篇号:11)12-SelectionofRAC-OVAAntigenandMonoclonalanti-RACantibodyLIWei-han,HEXiao-wei,QIWei,CHENFu-yu(CollegeofLightIndustryandFoodSciences,SouthChinaUniversityofTechnology,Guangzhou510640,China)Abstract:DuringtheELISAexperimentaloperationprocess,twopairsofantigenandantibodywithagoodsensitivity,strongspecificityandhightiterwerescreenedandevaluatedrespectivelybeforeusedinordertoensurequalityofmaterialsanduseofcontinuity.Determinationofantibodysensitivity(antibodymadebyJiangnanUniversity)showedanaverageofIC50being3.22μg/Lwithhighsensitivity.Ractopaminemonoclonalantibodiesoftwounitswerebothgood.AntibodytiteroftheantibodymadebyJiangnanUniversitywas1:32000,whichwasbetterthantheother.TheRAC-OVAantigenmadebyJiangnanuniversitywasusedwithoriginalconcentration10mg/mL.TheoriginalconcentrationoftheMonoclonalantibodyanti-RACwas9.8mg/mL.Keywords:ELISA;Monoclonalantibodyanti-RAC莱克多巴***(Ractopamine,RAC)是一种苯酚***类β-肾上腺素兴奋剂,分子式C18H23NO3,分子量301.39[1]。市场销售的莱克多巴***为其盐酸盐,是RS、SR、RR、SS四种异构体的混合物,Ricke等的研究表明异构体RR是莱克多巴***主要的生物活性异构体[2]是一种营养再分配剂,对体内代谢的作用较强,能降低脂肪生成、促进脂肪分解、促进蛋白质合成并减少其降解,还能促进胰岛素的释放,使糖原分解增加,因此能利用合成脂肪的能量和成分来增加蛋白质的合成。由于莱克多巴***具有营养再分配作用,可明显提高瘦肉率,经济回报率高,作为一种新型饲料添加剂而在畜牧生产中应用[3],很多经营商和养殖户普遍使用。但它与盐酸克伦特罗一样,属于违禁药物,而且由于用作生长促进剂的剂量是治疗剂量的5~10倍,易在动物组织,特别是内脏中积聚残留,并通过食物收稿日期:基金项目:广东省科技攻关项目(06)作者简介:李伟汉(1986-),男,研究生,研究方向为食品安全检测通讯作者:何小维,教授,研究方向:碳水化合物功能材料1480。莱克多巴***与“瘦肉精”盐酸克伦特罗一样,也(链进入人体。人体中累计摄入剂量超过一定值,或食用莱克多巴***高残留内脏(大于100ng/g)的内脏组织如肝、肾或肺时,易出现毒副反应,甚至会出现中毒症状,严重时危及生命。动物源性食品中含有违禁药物(如β-兴奋剂、激素、抗生素和精神类药物等)的残留已成了困扰世界的食品卫生难题[4]。药物残留不仅影响我国畜禽产品的出口贸易,同时威胁着消费者的健康。目前,除了美国批准其可作为猪的饲料添加剂外[5],欧盟、中国、日本等多数组织和国家已禁止在畜禽养殖中使用。我国农业部发出的公告《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种录》农业部公告第176号)明确禁止莱克多巴***、盐酸克伦特罗、沙丁***醇等在食品动物中的使用。1材料与方法1.1主要仪器与器材酶标仪(ThermoMμLtiSkanMK3);洗板机(PW-812型自动酶标洗板机,深圳市汇松科技发展有限公司);分光光度计(UV-1601型紫外可见分光现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2011,Vol.27,No.12光度计,日本岛津公司);氮气吹干仪(美国CERA);台式高速冷冻离心机(美国ThermoFisher);pH计(PB-10型pH计,德国Sartorious)。1.2主要试剂莱克多巴***、盐酸克伦特罗、沙丁***醇、酒石酸托特罗定、盐酸特布他林、盐酸环仑特罗、盐酸妥洛特罗标准品(中国药品生物制品检定所);牛血清白蛋白(Sigma);HRP标记的羊抗鼠IgG(美国ProteinTech);四***联苯***(美国Amresco);Tween-20(广州化学试剂厂分析纯);明胶(北京鼎国生物技术有限公司)。1.3溶液的配制1.3.110×PBS(磷酸盐缓冲液,0.01mol/L、pH7.4)的制备称取NaCl80g、KCl2g、Na2HPO414.4g、K2HPO42.4g溶于800mL去离子水中,调节pH至7.4后,定容至1L。使用时用去离子水稀释10倍即得10×PBS。1.3.2洗涤缓冲液的配制为0.05%、pH7.4的PBST缓冲液,在1×PBS中加入0.05%的Tween-20得到PBST缓冲液。1.3.3一抗稀释液的配制为2%BSA-PBST,在PBST缓冲液中加入2%的BSA。1.3.4二抗稀释液的配制为0.1%脱脂奶粉-PBST,在PBST缓冲液中加入0.1%的脱脂奶粉。1.3.5包被缓冲液的配制即0.05%、pH9.6的PBST缓冲液,称取Na2CO3.10H2O4.29g、NaHCO32.94g、1
内容来自淘豆网转载请标明出处.文章责编：gaoxiaoliang&　看了本文的网友还看了
?&&( 10:06:00)?&&( 10:05:00)?&&( 10:04:00)?&&( 10:03:00)?&&( 10:00:00)?&&( 9:59:00)?&&
? ? 　 ? ? 　 ? ? 　 ? ? 　 ? ?
? ? 　 ? ? 　 ?
? 　 ? ? 　　 ? ? 　 ? ? 　 ? ? 　 ? ?
? ? 　 ? ?
| 　　　 |
| 　　　 |
| 　　　 |
| 　　　 |
| 　　　 |
精选推荐专题 |
| 　　　　　　 |
实用工具 |
| 大全 | 大全　　　　 |
版权声明：如果网所转载内容不慎侵犯了您的权益，请与我们联系，我们将会及时处理。如转载本内容，请注明出处。
Copyright & 2004-
　考试网　All Rights Reserved　
中国科学院研究生院权威支持(北京)　电 话：010-　传 真：010-pH缓冲溶液的组成、作用及计算
pH缓冲溶液是分析测试中应用最为广泛的试剂溶液。其作用是用来稳定溶液的pH值，以满足测试中对恒定pH的要求。虽然pH缓冲溶液的组成并不复杂，但关于pH缓冲溶液的计算却是酸碱滴定分析中计算最为复杂的内容。下面介绍一下pH缓冲溶液的组成和各种类型的化学计算方法。
1 pH缓冲溶液的组成和作用
1.1 pH缓冲溶液的类型与作用
pH缓冲溶液包括两大类：标准缓冲溶液和普通缓冲溶液。
标准缓冲溶液主要用在酸度计测量溶液pH值时的仪器校正和定位，要求数值准确、精确。因此对试剂纯度、浓度准确性、温度等都有严格要求，这类缓冲溶液有专门的化学试剂商品，可以购买配制，也可以用优级纯试剂按资料的配比配制。
普通缓冲溶液主要用于化学分析和仪器分析中要控制一定pH值的测定过程中。几乎所有的EDTA络合滴定都必须在一定的pH范围内进行，因此，需要加入pH缓冲溶液，例如，测定铅、锌用到HAc缓冲溶液，测定钙、镁、锌用到氨缓冲溶液。又如，氧化还原滴定中，碘量法测铜要用到NH4HF2，碘量法测砷、锑要加NaHCO3。
普通缓冲溶液的配制并不需要像标准缓冲溶液配制那样严格和苛刻，因为对缓冲溶液的pH值要求并不需要非常精确，因此，可以用分析纯试剂来配制，也可以用已有的酸、碱、盐溶液来“搭配”（后述）。
1.2 普通pH缓冲溶液的类型
普通pH缓冲溶液按组成不同可分三大类：弱酸-弱碱型缓冲溶液（即共轭酸碱缓冲溶液）、酸式盐缓冲溶液、强酸或强碱溶液。在一些特殊情况下也使用混合体系的缓冲溶液（两种pKa相近的共轭酸碱缓冲溶液混合而成）。大家比较熟悉的是共轭酸碱缓冲溶液，例如，HAc-NaAc、HF-NH4F、NH3-NH4Cl。其实，酸式盐也可作为缓冲溶液，因为酸式盐的pH值大多是恒定的，随其浓度增减的变化不大，例如，NaHCO3溶液在1.0M至0.01M之间，其pH值几乎都在8左右（理论值为8.3），同样可以抵抗溶液中产生的少量强酸、强碱（或外加），保持溶液的pH值恒定或变化微小。强酸、强碱溶液也能缓冲滴定过程中产生的少量强酸或强碱，保持溶液的pH值变化很小，故强酸强碱也可作为广义的pH缓冲溶液（以前的分析化学教材就是这样分的），例如，EDTA络合滴定铋，需另外加入一定量的0.1mol/L硝酸溶液，就是为了增强溶液对滴定中产生的H+的缓冲作用。下面重点介绍最常用的共轭酸碱缓冲溶液的相关知识。
弱酸-弱碱型缓冲溶液的构成与配制。这类缓冲溶液的组成为：弱酸+弱酸盐（即共轭碱）、弱碱+弱碱盐（即共轭酸）。常见的实例有：HAc-NaAc、HAc-NH4Ac（微酸性）、NH4Cl-NH3.这类缓冲溶液的实验室配制方法一般是根据溶液组成和浓度要求，直接称取或量取弱酸、弱酸盐溶液或弱碱、弱碱盐溶液来配制。其实，这类缓冲溶液还可以用强酸与弱碱、强碱与酸来配制，归纳起来，应该有三种配制方法：
（1）弱酸+弱酸盐，弱碱+弱碱盐
例如，HAc-NaAc、NH4Cl-NH3
（2）弱酸（过量）+强碱（适量），弱碱（过量）+强酸（适量）
例如，HAc（过量）-NaOH（适量）、NH3（过量）-HCl（适量）。
这类缓冲溶液需要的共轭碱（NaAc）或共轭酸（NH4Cl）是通过反应后产生的。
（3）弱酸盐（过量）+强酸（不足量）或弱碱盐（过量）+强碱（不足量）
例如，NaAc（过量）+HCl（适量），NH4Cl（过量）+NaOH（适量）
缓冲溶液需要的弱酸（HAc）或弱碱（NH3）则通过反应后产生。
1.3 pH缓冲溶液的效能指标
pH缓冲溶液抵抗外加强酸、强碱的能力可以用缓冲容量β来表示，缓冲容量的意义是，使1L缓冲溶液的pH增大1个单位时需加入的强碱（NaOH）的物质的量（mol），或减小1个pH单位时时需加入的强酸（HCl）的物质的量，显然β越大，缓冲外加强酸强碱的能力就越大。β与pH、总浓度C及共轭弱酸碱的浓度比有关（反映在下式的分布分数δ中），下面是β的计算式：
从（1）式可看出，在强酸、强碱条件下，溶液是具有缓冲作用的，而在微酸至微碱性条件下，例如，pH 3-11范围内，缓冲容量主要由共轭弱酸碱缓冲溶液来决定，这是最常见的缓冲溶液体系。一般共轭弱酸碱缓冲溶液的缓冲容量都可以近似表示为（对一元弱酸弱碱构成的体系）：
（2）式中的C为弱酸+弱酸盐（或弱碱+弱碱盐）的总浓度，显然，总浓度越大，缓冲能力就越大。式中的两个δ分别为弱酸HA、弱酸根A-（又称共轭碱）的分布分数值，δ定义为其平衡浓度与总浓度之比（我以前在论坛中曾作过介绍），它们也是pH值的函数。数据学上可以证明：恒定C时，当两个分布分数值均等于0.5时，缓冲容量最大，其实用意义是：选择缓冲溶液体系时，应该选弱酸与弱酸盐的浓度比接近1，而pH值仍能满足配制要求的体系，对于弱碱及弱碱盐溶液，也有同样的要求。
例如，要配制pH＝5.0的缓冲溶液，可以选择的体系为醋酸+醋酸钠（pKa=4.74），或六次甲基四胺+HCl（pKa=5.15），而不宜选HF+NH4F(pKa=3.18)或NH3+NH4Cl(pKa=9.26)缓冲体系，因为后二者的pKa偏离pH＝5.0太远。
缓冲溶液的计算公式为：
（3）式中的pKa=－lgKa，是弱酸或共轭酸的酸离解常数的负对数，可以在分析化学教材及分析化学手册中查到，对于氨-铵盐类弱碱-弱碱盐缓冲溶液，（3）仍然满足，只是要将从离解常数表中查到的氨离解常数的对数值pKb=4.74，换算为铵根的酸离解常数负对数，共轭酸碱的常数互换关系为：
pKa=14.00-pKb=9.26
（3）式中的Ca、Cb为弱酸及弱酸盐配制时的浓度（称标签浓度或分析浓度），na、nb为弱酸及弱酸盐配制时的物质的量（mol或mmol）。对于氨缓冲溶液，铵盐对应于Ca、氨对应于Cb，na指铵盐的摩尔数，nb指氨的摩尔数。由于同一溶液中浓度比等于摩尔比，因而导出了后一等式（一般分析化学教材中并无这种表示法，不过实际应用中用摩尔比的算式使用较为方便，故笔者提倡用后一关系式计算）。
根据最大缓冲容量的要求，如果选择的缓冲溶液体系的pKa最接近要求的pH值，则式中的浓度比就越接近1：1，这就是选择缓冲溶液的基本原则。例如，要配制pH5.5的缓冲溶液，选择六次甲基四胺+HCl（pKa=5.15），比选择HAc缓冲溶液体系好（pKa=4.74）。因为如果两个缓冲溶液体系的总浓度相等的话，则各自共轭酸碱的摩尔比分别为：
HAc-NaAc：
(CH2)6N4-HCl：
后者更接近1：1，缓冲能力更强。
需要说明的是：缓冲溶液的摩尔比不等于1：1时，分别抗强酸和抗强碱的能力是不相同的，例如pH5.5的(CH2)6N4-HCl溶液，从摩尔比＝2.24：1知，弱碱浓度大于共轭酸（弱碱盐）浓度，该溶液抵抗强酸影响的能力比抵抗强碱影响的能力大（即加入相同量的HCl引起pH值的改变量小于加入相同量的NaOH引起的pH值的改变量）。在某些生化实验中，为了使酸碱两侧的缓冲容量都较大，常采用两个pKa较接近，且满足pKa1&pH&pKa2的混合缓冲溶液，将两个缓冲体系的pH值配成等于指定的pH值，但抵抗强酸影响时，pKa2体系的缓冲能力强，抵抗强碱影响时，pKa1体系的缓冲能力强，以此达到抵抗强酸和强碱的缓冲能力都较强的目的。
缓冲溶液的缓冲能力与共轭酸碱的浓度比或摩尔比密切相关，摩尔比偏离1：1的程序越大，则缓冲能力越弱，分析化学中提出了“缓冲范围”的概念，并规定：共轭酸碱的浓度比分别为10：1和1：10的pH值为缓冲溶液具有缓冲作用的边界值，在两个边界值之间的pH范围称为缓冲溶液的缓冲范围，数学表示式为：
将pH＝pKa+1和pH＝pKa-1的区间合并书写，就有了常见的pH缓冲范围表达式：
在已有的分析方法或标准中，缓冲溶液体系及配制方法均已固定并有详细操作，使用者不必再考虑上述问题。
2 缓冲溶液配制相关的计算
2.1 缓冲溶液的计算类型
缓冲溶液的计算分为两大类：
（1）已知共轭酸碱的浓度或质量，计算pH值
（2）已知pH值，计算配制时要满足的浓度和质量
配制缓冲溶液时，有多种组合的方法，常见的有以下几种：
（1）两种溶液混合：如，NH3+NH4Cl溶液，NaOH溶液 +NH4Cl溶液，NH3+HCl溶液。
（2）固体试剂+溶液：如，NH3+NH4Cl固体，NaOH固体 +NH4Cl溶液，HAc+NaAc固体。
（3）两种固体试剂溶解混合：如，NaOH固体 +NH4Cl固体，Na2CO3固体+NaHCO3固体。
由此可见，缓冲溶液的计算类型是很丰富的。实验中的配制一般是按共轭酸碱的量来称取或量取试剂后，再溶解混合到指定体积。但分析化学学习中的计算类型则可以演绎出十几种计算情况。笔者已编制了一个pH缓冲溶液相关计算的实用软件，无论是计算pH值，还是计算浓度、体积、质量，都可以直接在窗体上完成自动计算，涵盖了二十余种可能的计算情况，近期内上传给网友共享。
下式是一般缓冲溶液的pH值与浓度、质量、体积相关的计算公式（共轭酸碱混合型）：
如果缓冲溶液是通过强酸+弱碱、强碱+弱酸来构成的话，计算公式又有如下的形式：
从上面二式可见，缓冲溶液的计算题型可以演绎出几十种情况（当计算量分别是pH、某个C、V、m时，可以线性组合出许多情况），这是学习酸碱滴定时题例变化最多的一个内容，实验室配制则不会涉及这种貌似“化学游戏”的复杂情况。
2.2 pH缓冲溶液计算实例
缓冲溶液计算的基本公式是（3）式，
而在计算过程中最方便，最易于转换的是用摩尔比表示的算式：
可根据具体情况将给定条件和未知量变换为n再代入上式，计算起来就较为方便。
如果已知pH值，要计算C、V、m，则需要将对数式化为指数式（中学数学知识）：
其实，缓冲溶液公式也是用化学平衡定律表达式转换而来的。以HAc-NaAc为例，无论是否加入了醋酸钠（即不管是不是缓冲溶液），下面的平衡始终存在，并有对应的浓度表达式（即化学平衡定律表达式）：
将（8）式左右两边取负对数，整理后即得（3）式。如果计算题属于已知pH值，计算配制时的C、V、m之类的情况，则使用（8）式计算会省去对数-指数转换时的麻烦。
2.2.1 共轭酸碱混合题（计算质量）
例1：配制pH＝5.0的缓冲溶液1L，总浓度为1.0M，问：需要加多少亳升冰醋酸，加多少克无水醋酸钠？已知，冰醋酸浓度约为17.5M，醋酸钠式量82.03g/mol，pKa＝4.74
解：设缓冲溶液中的醋酸钠的浓度为CNaAc，醋酸浓度为CHAc＝1.0-CNaAc，根据（3）式得
（用（8）式计算）
解得：CNaAc＝0.646M，计算得m NaAc=53g
CHAc＝0.254M，计算得VHAc=0.254*=20.2ml
2.2.2 弱酸盐+HCl反应型（计算质量、体积）
例2：配制pH＝5.0的缓冲溶液1L，总浓度为1.0M，没有醋酸试剂，请用醋酸钠+HCl配制。问：需要加多少亳升6.0MHCl，加多少克无水醋酸钠？已知，醋酸钠式量82.03g/mol，pKa＝4.74
解：缓冲溶液中醋酸钠总浓度为1.0M，含醋酸钠1000mmol，设需盐酸体积为VHCl亳升，含HCl的量为6VHCl mmo l，根据（3）式得
解得：VHCl≈59 ml， m NaAc=1.0*82＝82g
2.2.3 弱碱盐+NaOH反应型（计算反应物质量）
例3：配制pH＝10.0的缓冲溶液1L，总浓度为1.0M，请用NH4Cl+NaOH配制。问：需要用多少克氯化铵与多少克NaOH混合（假设氢氧化钠不含碳酸钠和水）？已知，氢氧化钠式量40g/mol，氯化铵式量为53.5g/mol，氨水的pKb＝4.74
解：在氯化铵中加入不足量的氢氧化钠，生成部分氨，剩余部分氯化铵，即构成了氨性缓冲溶液。氯化铵总浓度为1.0M，溶液含氯化铵1.0mol，设需氢氧化钠质量为mNaOH克，即1.0/40 mol。
m(NH4Cl)＝1.0*53.5=53.5(g)
共轭酸NH4+的酸离解常数换算：pKa=14.00-pKb=14.00-4.74=9.26
根据（3）式得
（用（8）式计算）
解得：mNaOH≈33.8g
2.2.4 两种溶液混合（指定pH值）
例4：现有6.0M氨水及4.0M氯化铵溶液，请用这两种溶液配制一个pH＝10.0，总浓度为1.0M的氨-氯化铵缓冲溶液，试计算混合时，氨水：氯化铵：水三者的体积比。
解：因为有恒定的pH值，氨和氯化铵就有恒定的摩尔比，故可以先计算摩尔比
设取1体积氯化铵、3.66体积氨水和V水混合可得到1.0M pH＝10.0的缓冲溶液，即
2.2.5 部分中和的反应液（计算pH值）
例5：将0.50M的HAc与0.30M的NaOH溶液等体积混合，溶液pH值为多大？ pKa＝4.74
解：混合后醋酸有剩余，生成部分醋酸钠，构成缓冲溶液。可按缓冲溶液计算pH值。
共轭酸碱缓冲溶液是一类组成为弱酸-共轭酸或弱碱+共轭碱的混合溶液，它们具有抵抗少量外加强酸、强碱，抵抗稀释（简称抗酸碱、抗稀释），保持溶液的pH值不变或变化很小的作用。抵抗酸碱的原理是：外加的强酸（或强碱）与缓冲溶液中的弱碱（或弱酸）作用后，通过共轭酸碱对的相互转换，化解了溶液的新增的H+或OH-，从而维护了溶液pH值的恒定或减缓了pH值的波动幅度。
缓冲溶液至少有三类配制的方法，实验室中可以根据试剂情况酌情选择。缓冲溶液计算类型千差万别，但记住pH值与共轭酸碱摩尔比关系式，针对具体情况对n作适当代换，即可得到求解C或V或m的简单方程，按常规方法即可求解。缓冲溶液的浓度应该配制大一些，应该选择pKa最接近pH值的缓冲溶液体系，以获得较高的缓冲容量。
关键字缓冲溶液
实验室常用试剂、缓冲液的配制方法大全
责任编辑：
声明：本文由入驻搜狐号的作者撰写，除搜狐官方账号外，观点仅代表作者本人，不代表搜狐立场。
今日搜狐热点常温下，用0.1molL-1HCl溶液滴定10.0mL浓度为0.1molL-1Na2CO3溶液，所得滴定曲线如图所示。下列微粒浓度大小关系正确的是A．当V=0时：c(H+)+c(HCO3-)+2c(H2CO3)=c(OH-)B．当V=5时：c(CO32-)+c(HCO3-)+c(H2CO3)=2c(Cl您好，您目前使用的浏览器版本比较旧，无法使用学优题库的新功能，建议您更换firefox或chrome浏览器学优网，成就我的梦想。 |
| 题文常温下，用0.1mol&L-1HCl溶液滴定10.0mL浓度为0.1mol&L-1Na2CO3溶液，所得滴定曲线如图所示。下列微粒浓度大小关系正确的是A．当V=0时：c(H+)+c(HCO3-)+2c(H2CO3)=c(OH-)B．当V=5时：c(CO32-)+c(HCO3-)+c(H2CO3)=2c(Cl-)C．当V=10时：c(Na+)＞c(HCO3-)＞c(CO32-)＞c(H2CO3)D．当V=a时：c(Na+)=c(Cl-)＞c(H+)=c(OH-)&&&微信扫描左侧二维码，可以将本题分享到朋友圈，或者发送给同学或老师寻求帮助。纠错难度评价：做题心得：官方解析我要解析巩固&&&&&&&&&百度拇指医生
&&&普通咨询
您的网络环境存在异常，
请输入验证码
验证码输入错误，请重新输入}