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最近想做个免疫荧光，在染核问题上有些疑问。DAPI染核和hoechst染核有什么区别，为什么有的人用DAPI，有的人用hoechst。个人觉得荧光的强弱和稳定性的要求不同可能导致选择不同的染色方法，不知这算不算是区别？还有没有其他的区别？
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<td class="t_f" id="postmessage_、每个染料有自己独特的激发谱线和发射谱线.这也是以上两个染料的主要区别.
另外Hoechest 33258 是膜透性的,因此在活细胞时候能轻松进入;DAPI是半透性的,有选择性的进入.! b( K2 G) w. b* L# k
因此Hoechest 33258 一般用来染活细胞,可以长驱直入;DAPI一般是染固定细胞.
2、两者都可以用紫外看，参见以下的激发发射波长: i4 `, A9 t. u* }" G
Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。9 y&&u. R: ?% L, V
DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后，最大激发波长为364nm，最大发射波长为454nm。
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DAPI染色液3 \/ [$ V$ q& a7 y
产品简介：
6 j7 h6 j! W8 _) c, u0 ?8 W' g
&#216; DAPI染色液(DAPI Staining Solution)是经过精心优化几乎适用于所有常见细胞和组织细胞核染色的染色液。 2 E( e! M7 s4 H, }&&o# j1 J0 A3 v
&#216; DAPI，即2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride，也称DAPI dihydrochloride，分子式为C16H15N5·2HCl，分子量为350.25，CAS Number 。
&#216; DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。 &&U6 X5 k2 S$ d& a% S1 \4 h
&#216; DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。 8 {2 m+ n1 X) t) v* O
&#216; DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后最大激发波长为364nm，最大发射波长为454nm。 ! z+ s7 ?. ^7 W, L
&#216; 本DAPI染色液可以直接用于固定细胞或组织的细胞核染色。
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保存条件：
1 V' y1 s% Y7 Z
-20℃避光保存，一年有效。
% e4 X) N" [' y, }8 O; [% h
注意事项：
9 M% E0 F% ~3 D& m$ K: _, Z% v&&u& d
&#216; DAPI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
&#216; 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
&#216; 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。抗荧光淬灭封片液可以向碧云天订购。
&#216; 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
+ G6 [1 R7 n( y3 o3 ?
使用说明：: }4 y& p8 S) d$ P
8 i8 J1 \" M( ^# \2 C
1. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行DAPI染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的DAPI染色。 &&n3 M7 p" l5 k7 S: P# s) K
2. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量DAPI染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，混匀。
3. 室温放置3-5分钟。
4. 吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。 . N$ b( g, B# E& M/ t* ^" u
5. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。
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回复 - w* j" B9 x7 v8 X' K
- I( p$ e2 B0 }/ Y: @/ g% q
Hoechst 33342/PI双染色法
) j8 ?3 Z( _/ Y' `. I
1．悬浮生长的细胞在培养状态下加入Heochst 33342，终浓度为1μg/ml；帖壁生长的细胞用含有0.02％EDTA的0.25％胰蛋白酶消化成单细胞悬液，离心，弃上清，用1ml全培养液重悬细胞，加入Heochst 33342，终浓度为1μg/ml，37℃孵育7～10min。* ]&&o- w+ V' c, [! C& m. ?( ^( K
2．4℃ 500～1000r/min离心弃去染液。
3．加入1.0ml PI染液，4℃避光染色15min。
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本帖最后由 wang_kai1212123 于
10:30 编辑
' j6 ^8 l0 t& V$ k: L( v3 N
DAPI 可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用，和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞，荧光显微镜观察细胞标记的效率高(几乎为100 %) ，且对活细胞无毒副作用。DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
Hoechst 33342、 DAPI染料与DNA的结合是非嵌入式的，主要结合在DNA的A-T碱基区。紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光,同时，由于对细胞毒性小，hoechst可以用于干细胞（SPcell)的富集。不对之处，请多多指正~~谢谢+ Q8 I8 d8 o0 G# @+ e
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回复 : k6 r& q: n" G&&M9 t* G
别的都同意，但对活细胞无毒副作用有待斟酌，据我了解dapi是一种颇具毒性的东西，操作时尽量避免接触皮肤，所以对细胞应该还是有毒性的吧。
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Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低， Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。
DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。# M: F& p1 Q; y/ L1 a
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细胞都死了，无所谓毒不毒吧
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回复 7 v9 }4 \2 Y% z&&g) u2 a) w- s
那做共聚焦用hoechst好不好呢？还是DAPI比较好用啊？
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Powered by人类染色体R带和特殊异染色质区(DA—DAPI带)同时荧光染色--《国外医学.遗传学分册》1981年01期
人类染色体R带和特殊异染色质区(DA—DAPI带)同时荧光染色
【摘要】：正 若以DNA链A-T特异的抗生远霉素A(antibiotic distawycinA简称DA)加入到固定的人类染色体中,然后用对A-T有特异性的荧光染料4′-6-二脒基-2-苯吲哚(4′-6-diamidiao-2-phenylindole简称DAPI)染色,可见含有结构异染色质的一定染色体区域荧光很强烈。现发现1、9、16号染色体的C带区,15号染色体的短臂和Y染色体的长臂(DA-DAPI带)有明亮的荧光。如远霉素A与色霉素A_3:(chromomycinA_3)联合用作复染剂,荧光染料表现出互补碱基链的特性,在R带区色霉素荧光的反差大大增强。本文报道的是三种染料同时使用,即用
【关键词】：
【正文快照】：
若以DNA链A一T特异的抗生远霉素A(antibiotie dista企了cinA简称DA)加入到固定的人类染色体中,然后用对A一T有特异性的荧光染料4产一6一二眯基一2一苯叫噪(4尸-6一diamidino一2一phen了lindole简称DAPI)染色,可见含有结构异染色质的一定染色体区域荧光很强烈。现发现1、9、16
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DAPI 即4&#39;,6-二脒基-2-苯基吲哚(4&#39;,6-diamidino-2-phenylindole)，分子式为C16H15N5&2C3H6O3 ，分子量457.48。
DAPI是一种能够与DNA强力结合的荧光染料。它结合到双链DNA小沟的AT碱基对处，一个DAPI分子可以占据三个碱基对的位置。结合到双链DNA上DAPI分子的荧光强度提高大约20倍，常用与荧光显微镜观测，根据荧光的强度可以确定DNA的量。另外，因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。
在荧光显微镜观察下，DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。单独DAPI的最大吸收波长为340nm，最大发射波长为488nm；当DAPI与双链DNA结合时，最大吸收波长为364nm，最大发射波长为454nm（10 mM Tris pH7.0，100 mM NaCl，10 mM EDTA），其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。DAPI也可以和RNA结合，但产生的荧光强度只有与DNA结合的荧光强度的1/5，其发散光的波长范围约在500nm左右。
DAPI的配制及贮存
固体粉末：避光，2-8 ℃保存，3年没有问题。
贮存液：用无菌水配制成浓度1 mg/ml的贮存液，配好后用锡纸包起来，避光，可在-20 ℃下长期保存。（DAPI易溶于水，在PBS中溶解度不高）
使用浓度：贮存液用1xPBS稀释到终浓度100 ng/ml。
10x PBS的配制
6.1 g 无水Na2HPO4
2 g 无水KH2PO4
加水到1000ml
贮存液可根据需要用蒸馏水稀释
荧光封片液：0.5 mol/L碳酸盐缓冲液与甘油等体积混合，pH9.5
染色与观察：制好的玻片上滴加几滴DAPI染液，染色10分钟，流水冲去染液，滤纸吸除多余水分，加一滴荧光封片液，置于荧光显微镜下观察，激发波长360-400nm。
注意事项：DAPI可能具有致癌性，全部操作过程中必须带塑料或乳胶手套。
DAPI结构式
DAPI与DNA的复合物晶体结构
北京拜尔迪生物技术公司是一家高新技术企业，成立于2003年，经过多年的不懈努力已经发展成为一家专业从事生物化学及分子生物学试剂的开发、销售、服务的生物技术公司。
&&&&&&&&本公司专注于生命科学的前沿和发展，并努力将最新、最优秀的产品介绍给广大客户，使我国的科研工作者的工作与世界同步。同时拥有一支实力雄厚、年青化、知识化和专业化的人力资源队伍，充斥于公司的各个管理层，为客户提供专业化的服务。
&&&&&&& 公司目前代理和经销的品牌如下：
&&&&&&& &1 中国区授权代理：美国INALCO公司，德国MOBITEC产品，美国Biovision，美国Mediatech(Cellgro)；
&&&&&&&& 2 北京区授权代理：美国BIOMIGA公司，英国OXOID公司，SIGMA Aldrich公司的北京地区指定经销商（涵盖SIGMA ALDRICH(Mysigma)，德国sartorius，Bioassay systerm，Abgent等&&；
& &&&&& 3 经销美国Amresco、Invitrogen(Gibco)、BD(Difco) 、Roche、美国 GE公司（Pharmacia）以及日本YAKULT公司的试剂以及Axygen和Millipore公司的耗材；
&&&&&&& 4 仪器品牌：DRAGON、EPPENDORF、GILSON以及北京六一厂等；
&&&&&&& 5 抗体品牌：SANTA CRUZ、ABCAM、CHEMICON、UPSTATE、R&D和ABNOVA
&&&&&&& 以上品牌试剂及耗材，我公司长期备有大量库存，可现货供应，为广大客户带来方便。
&&&&&&&& 对所有的客户和朋友，本公司一贯坚持提供最好服务，这个承诺不会随着时间的改变而改变。我们将不断的与全球各优秀生命科学产品厂商联系，尽力做好与您的需求连接，满足您的实验需要，并为您提供质量最好的产品和技术支持。你的满意是我们的动力源泉。我们的发展壮大离不开你们的支持。&
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中国生物器材网 电话：021-细胞实验中 DAPI染料的具体作用是什么?会干扰GFP的检测吗?
黎约压过8049
DAPI,是一种能够与DNA强力结合的荧光染料,常用与荧光显微镜观测.因为DAPI可以透过完整的细胞膜,它可以用于活细胞和固定细胞的染色.在荧光显微镜观察下,DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发.当DAPI与双股DNA结合时,最大吸收波长为358nm,最大发射波长为461nm,其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色.&所以不会影响绿色荧光蛋白的观测.
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