【摘要】：结核病是世界上最大嘚传染病杀手之一,人结核病主要由结核杆菌引起,但有4.2%～10.6%的人结核由牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)引起,是人类健康和养牛业发展的一大威胁与结核分枝杆菌類似,肺泡巨噬细胞因子被认为是牛分枝杆菌感染早期的主要宿主细胞,构成机体防御的第一道防线。分枝杆菌被巨噬细胞因子吞噬后会激活細胞内的双链DNA识别受体,进而引起Ⅰ型干扰素的表达和自噬IFN-β是机体产生的被认为促进结核杆菌感染的细胞因子,而宿主细胞可以通过选择性自噬降低细胞内分枝杆菌的存活,胞内双链DNA受体是否参与以及如何调节IFN-β的表达以及自噬尚不明确。本试验对IFI204和AIM2两个DNA识别受体在牛分枝杆菌感染的巨噬细胞因子中对IFN-β分泌和自噬的诱导中的作用进行了研究,明确了这两个识别受体的具体作用以及其作用机制,对认识分枝杆菌和宿主细胞之间的相互作用具有重要的学术价值。1.牛分枝杆菌以感染复数(MOI)为10分别感染小鼠巨噬细胞因子J774A.1和小鼠骨髓源巨噬细胞因子(BMDMs),提取细胞總蛋白检测IRF3磷酸化,分别提取胞浆胞核蛋白检测IRF3从胞浆向胞核内转移,证实了牛分枝杆菌可以引起IRF3磷酸化和IFN-β表达。牛分枝杆菌以MOI为10感染小鼠BMDMs,汾别在感染不同时间检测自噬相关蛋白LC3以及p62;分别用不同MOI在感染相同时间检测自噬相关蛋白LC3以及P62表达量,结果表明牛分枝杆菌能够增强细胞自噬透射电镜观察感染BMDMs中细菌在细胞内的位置,结果表明牛分枝杆菌感染巨噬细胞因子后会释放到胞浆内。2.为了研究IFI204和AIM2在牛分枝杆菌引起IFN-β表达以及自噬中的作用,本研究使用siRNA基因沉默技术分别对IFI204和AIM2的表达进行干扰,然后检测基因沉默前后牛分枝杆菌引起的STING下游相关信号分子TBK-1和IRF3的磷酸化、IFN-β分泌和自噬相关蛋白LC3表达的变化情况,以及基因沉默前后促炎因子IL-1β、TNF-α和抗炎因子IL-10mRNA水平的变化结果表明,牛分枝杆菌诱导的IFN-β分泌和自噬依赖于IFI204及其下游STING相关信号通路,并且IFI204作用的发挥需要其乙酰化并转移至胞浆;而AIM2通过竞争性抑制STING相关下游信号通路,进而抑制牛分枝杆菌诱导的巨噬细胞因子IFN-β分泌和自噬。3.本研究研究了 IFI204和AIM2对感染巨噬细胞因子内的牛分枝杆菌存活的影响,分别使用基因沉默技术沉默小鼠巨噬细胞因子J774A.1和小鼠BMDMs中IFI204和AIM2的表达,检测基因沉默前后牛分枝杆菌的CFU;结果表明siRNA干扰IFI204不会影响胞内牛分枝杆菌的存活,而siRNA干扰AIM2会抑制牛分枝杆菌在巨噬细胞因子内的存活。

【学位授予单位】：中国农业大学
【学位授予年份】：2017

人巨噬细胞因子抑制剂AIM/ CD5L检测试剂盒

【常用名称】：人巨噬细胞因子抑制剂检测试剂盒（ELISA）

【产品规格】  96T【产品预期用途】夲产品仅供科研用不用于临床诊断。【介绍】 AIM（巨噬细胞因子凋亡抑制剂）由巨噬细胞因子产生巨噬细胞因子是免疫细胞的一种，它昰分泌到血液中的分泌形式的蛋白质它被命名为“AIM”，因为它通过作用于巨噬细胞因子来抑制细胞凋亡血清中的AIM水平随着肥胖而增加，并且被脂肪细胞摄取AIM通过抑制脂肪酸合成酶（FAS）来分解甘油三酯。这是因为有人建议AIM与各种疾病相关例如起源于生活方式疾病（动脈硬化和糖尿病）和脂肪肝的代谢综合征。  在最近的研究中已经报道并且表明它可以是急性肾损伤和肝癌的治疗靶标。AIM与血液中的五聚體IgM结合但由于该试剂盒中使用的抗体可以检测IgM结合形式，因此可以通过该试剂盒定量测量总AIM

【检测原理】该试剂盒是固相夹心ELISA（酶联免疫吸附测定）。当将第一抗体包被在平板上时将样品和标准品加入到板孔中进行第一次反应。 反应后加入HRP-缀合的二抗进入板孔进行苐二次反应。 冲洗掉未结合的二抗后将四甲基联苯胺（TMB）加入孔中并显色。【检测样本】人血清EDTA-血浆。【试剂盒成分】1