双缩脲测定蛋白质 双缩脲绘制图表用比值法和标准曲线法各自的优缺点?

1.掌握分光光度计的使用方法
2.掌握标准管法测物质含量的方法。
3.掌握双缩脲法测定含量的方法
双缩脲是由两分子尿素缩合而成的,在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红銫络合物此反应即为双缩脲反应。含有两个或两个以上肽键的化合物都具有双缩脲反应
蛋白质 双缩脲含有多个肽键,在碱性溶液中能與Cu 2+ 络合成紫红色化合物其颜色深浅与蛋白质 双缩脲的浓度 成正比,可以用比色法进行测定双缩脲法最常用于需要快速但并不需要十分精确的测定。

二、 和器材 试剂 :?
(1) 标准蛋白溶液(5mg/ml):准确称取已定氮的酪蛋白(干酪素或牛白蛋白)用0.05mol/L氢氧化钠溶液配制冰箱存放备用。?
O)于500ml蒸馏水中在搅拌下加入300ml10%氢氧化钠溶液,用水稀释到1000ml贮存于内壁涂以石蜡的瓶内。此试剂可长期保存?
(3) 样品血清:动物血清用水稀释10倍,置于冰箱保存备用标准曲线法所用的血清需20倍稀释。?
器材:分析、分光光度计、 水浴箱、 、 吸量管等

1.取三支 试管 按下表操作

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2、搖匀37℃ 水浴 20min后用 分光光度计 于540nm波长处比色,以空白管调零点测得各管吸光度。

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