多列拟菱形藻硅化作用及其相关蛋白研究－ 厦门大学学术典藏库－ Xiamen University Institutional Repository
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硅藻是一种需吸收硅以形成其形态各异的硅质细胞壁的真核藻类。一直以来，人们对硅藻是如何形成这些特有的细胞壁产生了极大的兴趣。特别是近十年来，硅藻的硅代谢和硅质细胞壁的形成过程与机理成为了硅藻学家研究的热点。 本论文以多列拟菱形藻（Pseudo-nitzschiamultiseries）为研究对象，采用了硅限制同步化的培养方法研究了硅限制对多列拟菱形藻细胞周期的影响。结合流式细胞仪测定，荧光显微镜观测，硅钼黄法检测等方法研究了拟菱形藻硅化作用特点。运用蛋白质组学方法比较研究了硅化活跃期多列拟菱形藻蛋白质组的表达变化，并通过生物质谱技术对表达差异蛋白进行了鉴定和功能分析。从蛋白质组学水平上研究了硅...&Diatoms are eukaryotic unicellular microalgae. They can uptake silicic acid from the environmental and synthesis silica cell wall. As its unique characteristic, the mechanism of diatom silicon metabolism has become a hot research topic during these decades. In the present work, we investigated the response of cellular biochemistry to silicon deficiency in diatom through slilicon limited method us...&
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自日起总访问量：　　什么是均一化呢？
Western Blot均一化是指：将目标蛋白信号÷上样对照信号得到均一化的数据，以此来校正不同样本之间、不同泳道之间的差异，以获得准确、可重复的Western Blot的结果。上样对照一般是稳定表达的内参蛋白，表达量不受环境、实验处理的影响。
均一化校正的是什么呢？
为什么要进行均一化呢？
均一化校正了样本之间的差异，保证了Western Blot检测到的数据是目标蛋白真实的数据。如果没有进行合适的均一化，不能确保获取的实验数据是真实的生物学差异还是实验导致的误差（如图一所示）。
图一：均一化校正了样本之间的差异，保证了Western Blot 检测到的数据是真实的生物差异而不是实验导致的误差。A图：未进行均一化的数据显示目标蛋白（红色）表达量差异较大，样本四表达量最低；B图：经内参蛋白（绿色）均一化后数据显示，样本之间蛋白表达量差异很小。
有哪些均一化方法呢？
比较经典的方法是用看家蛋白做内参进行均一化，看家蛋白又称管家蛋白，一般被认为在所有的组织中表达恒定且不受实验条件的影响，主要包括 Actin/Tubulin/GAPDH等，但是进一步的研究表明，在某些实验条件下，看家基因的表达会因不同类型的组织、不同的发育阶段、或不同的实验条件而变化。另外，用看家蛋白进行均一化需要注意信号饱和的问题，因为一般情况下看家基因表达丰度相对于目标蛋白丰度较高，两种蛋白可能存在不同的线性范围，为此实验人员往往需要调整上样量。因此为了确保更准确、客观的的均一化方法，有些研究人员、期刊杂志建议用总蛋白做Western Blot的均一化。
总蛋白染色---REVERT™ Total Protein Stain
总蛋白均一化是利用染料对胶上/膜上的总蛋白染色进行均一化，主要包括以下几种类型：不可逆结合染料法：如考马斯亮蓝染色法、Stain Free法等；可逆结合染料法：REVERT™ Total Protein Stain总蛋白染色法。考马斯亮蓝染色法操作简单但往往需要同时跑两块胶，一块胶进行染色另一块胶进行后续免疫试验，因为是对胶进行染色所以存在不能校正转印差异的问题；Stain Free等染料不可逆共价结合蛋白法，是对胶上或膜上总蛋白进行染色，由于与蛋白是共价不可逆结合，因此可能会影响抗体与靶蛋白的结合，并且在膜上的背景较高、线性范围也比较窄；LI-COR REVERT™ Total Protein Stain方法是对膜上总蛋白进行染色，因为是可逆结合所以不会影响后续抗体结合，不干扰Western Blot的检测，而且是在近红外波段成像背景较低，灵敏度较高，因此能够校正Western Blot的所有步骤，适用于任何生物条件下的实验，成像结果见图二。
哪种均一化方法最好？
没有哪一种均一化方法是最好的，因此需要了解每一种方法的特点以便选择一种符合您实验目的、生物学条件的均一化方法，以校正不同样本之间的差异，带给您准确、可重复、可发表的高质量数据。无论您选用哪种均一化方法，LI-COR Odyssey 近红外激光成像系统都能提供准确的结果。
基因有限公司作为LI-COR产品中国区独家代理，邀请您一同关注近红外荧光成像技术在WB准确定量、磷酸化等蛋白修饰化研究、In-Cell-Western、双色EMSA、蛋白芯片及光免疫疗法等方面的应用进展。欲进一步了解详细内容，请关注我们的官方微信“基因快讯”或联系您身边的基因有限公司工作人员。
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