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人血浆高密度脂蛋白对大鼠内毒素血症的治疗作用初探
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HPLC测定人血浆中醋氯芬酸药物浓度的研究
&&&&&&本期共收录文章20篇
　　摘要： 目的建立测定人血浆中醋氯芬酸浓度的高效液相色谱法。方法取血浆500μL酸化后用乙酸乙酯一步提取，40℃ 水浴氮气吹干，流动相复溶后进样测定。采用Hypersil C18柱 (250 mm×4.6 mm，5μm)；流动相为甲醇-0.1%冰醋酸(65:35，V/V)，流速1.2 mL/min；检测波长为276 nm，柱温为室温。结果醋氯芬酸的血药浓度在0.1～15.0μg/mL范围内线性关系良好，此方法的最低检测浓度为0.1μg/mL。血浆中低、中、高3种浓度的回收率分别为103.23%，104.33%，101.11%，精密度RSD日内为2.800％～6.841％ ，日间为4.702％～8.161％ 。结论该方法专属性强，重现性好，操作简便。适用于药动学研究和血药浓度监测。 中国论文网 /6/view-2877281.htm　　关键词：醋氯芬酸；血浆；高效液相色谱 　　中图分类号：R927.2文献标识码：A文章编号：07)10-0016-03 　　Determination of Aceclofenac in Human Plasma by HPLC 　　YIN Hong-yin, GAO Xi-bao*, ZHUO Jin-hua, FU Jun 　　(School of Public Health, Shandong University, Jinan 250012, China) 　　Abstract：Objective To establish a HPLC method for the determination of aceclofenac in human plasma.Methods Acidified samples of plasma (500μL) were extracted with 4 mL of ethyl acetate. The organic phase was evaporated to dryness by nitrogen at 40℃ water bath. The residue was redissolved in mobile phase and then was determined．Aceclofenac was detected on Hypersil Cl8 column (250 mm×4.6 mm, 5μm) at the wavelength of 276 nm and room temperature. The mobile phase was methanol-0.1% glacial acetic acid (65:35, V/V) and the flow rate was 1.2 mL/min. Results The linear range of calibration curve was 0.1～15.0μg/mL with the determination limit of 0.1μg/mL. The method recoveries of low，medium and high concentration were 103.23%, 104.33%, 101.11%, respectively. The within-day and between-day RSDs were 2.800％~6.841％ and 4.702％~ 8.161％, respectively. Conclusion The developed methodwith good specificity and reproducibility is easy to operate, so it is suitable for the determination of aceclofenac in plasma. 　　Key words： high performance liquid chromatography 　　 　　醋氯芬酸（aceclofenac）是一种具有镇痛作用的非甾体类抗炎药物[1]，化学名为[邻-(2，6-二氯苯基)氨基]苯乙酰乙酸，l992年首先于西班牙上市，具有明显广泛的抗炎作用和强力的解热镇痛作用，其生物半衰期较双氯芬酸长，胃肠耐受性较双氯芬酸好，抗炎活性优于萘普生和保泰松[2]。醋氯芬酸的主要代谢产物为4-羟醋氯芬酸，双氯芬酸和4-羟双氯芬酸约为给药剂量的5%，清除半衰期为6.2 h[3]，由于其血浓度低，给检测工作带来困难。已有采用反向高效液相色谱法（RP-HPLC）测定血浆中醋氯芬酸浓度，以及HPLC测定醋氯芬酸片和胶囊中醋氯芬酸含量的的报道。但是，这些样品的处理方法复杂，稳定性不佳，且均需要内标物。本实验建立了一个以乙酸乙酯为提取剂，并在40 ℃水浴氮气吹干，浓缩后直接进样的新的简便且不需内标的方法。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1仪器与试剂 　　日本HITACHI 高效液相系统，包括L-2130泵，L-2200自动进样器，L-2400紫外监测器，EZChrom Elite工作站；QL-901型旋涡混合器（海门市麒麟医用仪器厂）；KH-600B超声清洗器（昆山市禾创超声仪器有限公司）；梅特勒-托利多AX-205电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；80-2离心沉淀器（上海手术器械厂）。 　　甲醇（色谱纯，美国J.T.Baker公司）；醋氯芬酸对照品（山东医药工业研究所）；乙酸乙酯（色谱纯，美国TEDIA公司）；盐酸（分析纯，烟台三和化学试剂有限公司）；冰醋酸（色谱纯，美国TEDIA公司）；水（市售娃哈哈饮用纯净水）。 　　1.2色谱条件 　　流动相为甲醇-0.1%冰醋酸（65:35，V/V），流速1.2 mL/min。检测波长276 nm，柱温为室温，进样体积20μL，色谱柱为伊利特Hypersil C18 （250 mm×4.6 mm，5μm）。 　　1.3血浆样品的处理 　　精密吸取待测血浆0.5 mL注入l0 mL试管，加入2 mol/L 盐酸 75μL，混旋1 min，再加乙酸乙酯4 mL，混旋2 min，3 000r/min离心10 min，吸全部上清液注入5 mL试管，置于40℃ 水浴中氮气吹干，加100μL流动相溶解残渣，混旋1 min，3 000r/min离心5 min，取20 uL进样。 　　1.4 醋氯芬酸标准溶液的配制 　　醋氯芬酸对照品于干燥器干燥至恒重。经灵敏度0.000 1 g 的电子天平准确称取醋氯芬酸对照品0.010 38 g，用甲醇溶解，最后定容于10 mL容量瓶内，配制成浓度为1 mg/mL的储备液，4 ℃冷藏备用。 　　 　　2结果 　　 　　2.1 方法专一性 　　取15.0μg/mL醋氯芬酸标准溶液进行测定，确定醋氯芬酸在本实验条件下的保留时间（tR=7.9 min），然后分别取空白血浆和含一定量醋氯芬酸的空白血浆按样品处理项操作，进行测定，得空白血浆和含一定浓度醋氯芬酸的空白血浆色谱图，可以看出空白血浆在tR处没有干扰峰，结果见图 1。 　　2.2线性关系及检出限
　　取空白血浆0.5 mL 置入10 mL 试管，使配成含醋氯芬酸0.1，0.2，0.8，2.0，5.0，12.0，15.0 μg/mL浓度的血浆标准系列，按样品处理项操作，以待测物浓度为横坐标，待测物的峰面积为纵坐标，求得直线回归方程为Y=416 534.57X-15 722.49，相关系数r= 0.999 8，醋氯芬酸在0.1～l5.0μg/mL范围内线性关系良好，检出限为0.1 μg/mL。 　　 　　A：空白血浆，B：醋氯芬酸标准溶液，C：含醋氯芬酸的空白血浆 　　2.3回收率 　　分别取1，10，60μg/mL的标准溶液20 μL直接进样，得标准样品色谱峰面积A0；分别取标准溶液适量置入试管，用空白人血浆使配成含醋氯芬酸0.2，2.0，12.0μg/mL的标准空白血浆系列溶液，按样品处理项操作，进样测定，得提取后色谱峰面积At。以At/A0×100计算即得血浆样品处理方法的绝对回收率，根据色谱峰面积At，按照标准曲线计算标准血浆的实测浓度，计算血浆样品处理方法的相对回收率，结果见表1。由表1可见该实验方法的绝对回收率在70%以上，相对回收率在101.1①e%～104.3③%范围内。 　　 　　2.4 精密度 　　以空白血液配制成低、中、高（0.2，2.0，12.0μg/mL）浓度的醋氯芬酸标准系列，按样品处理项操作，每一浓度于1 d内测定5次和每天测定1次连续测定5 d，计算日内、日间RSD，评价方法的精密度，测定结果见表2，该方法的日间与日内变异均低于10%。 　　 　　2.5稳定性 　　取低、中、高（0.2，2.0，12.0μg/mL）浓度的质控样品，配好后分别于－70℃存放24 h和－70℃存放1周后测定，评价冻融及存放时间对醋氯芬酸稳定性的影响。测定结果见表3。 　　 　　2.6应用 　　5名健康志愿者一次口服试验制剂醋氯芬酸肠溶颗粒100 mg，240 mL温开水送服，服药后2 h内不饮水，于给药前和给药后0.5，1，1.5，2，2.5，3，4，5，6，8，12，24 h取肘静脉血4 mL，肝素抗凝，3 000r/min离心10 min，取血浆分双份贮存于－20℃，按样品处理项处理和测定血浆样品，得时间-血药浓度曲线，见图2。 　　 　　时间-血药浓度曲线 　　 　　3讨论 　　 　　本实验建立的高效液相测定血浆中醋氯芬酸浓度的方法具有较高的灵敏度，良好的方法专属性和精密度。根据醋氯芬酸具有酸性极性的特点，在血浆中加入2 mol/L的盐酸，提取醋氯芬酸的效果甚佳，以乙酸乙酯为提取剂并在40 ℃条件下氮气吹干可很快挥发干，并可有效地避免乙酸乙酯高温自挥发影响醋氯芬酸稳定性，操作简单，处理样品时间短，除了乙酸乙酯作提取剂外，亦有使用乙醚[4,5]、正己烷-异丙醇[6]为提取剂的报道，本实验方法检出限达到0.1μg/mL。绝对回收率在70%以上，相对回收率在101.1%～104.3%范围内，日内、日间变异系数均低于15%，符合生物等效性实验的要求。 　　 　　参考文献 　　[1]Sainz O F. Analgesic eglcacy of aceclofenac:double-blind controlled study vs placebo in odontologia[J]. Curr Ther Res,0-904. 　　[2]Bort R, Ponsoda X, Carrasco E,e. Metabolism of aceclofenac in humans[J]. Drug Metab Dispos, ): 834-841. 　　[3]赵金会，徐云根，陈玉英．醋氯芬酸原料含量测定方法的研究[J]. 中国药科大学学报，）：34-36. 　　[4]王槐武，黄励，梅之南. 高效液相色谱法测定醋氯芬酸缓释片的含量[J]. 中国现代应用药学，）：53-55. 　　[5]梅之南，雷嘉川，施震，等. 高效液相色谱法测定醋氯芬酸肠溶片的含量[J]. 中国药师，）：288-289. 　　[6]刘红梅，金锐，吴琳华，等. 高效液相色谱法测定人血浆中醋氯酚酸的药物浓度[J]. 药物分析杂志，）：328-330. 　　 　　注：“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。”
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1、传统方法必须准备好几支玻璃管，先调配不同的硫酸铜溶液密度，藉由滴下的血液的浮沈，利用目测和比较法判断血液密度。此易造成人为误差。
2、U型管的频率振荡虽属新进，可惜清洗不易、价格昂贵是一缺点。
3、在37℃血液密度是1.060g/cm3这表示测量显示为完整血液混合的密度。
平均血液密度
男性&&&&&&&&& &&&1.058&&&0.002
女性&&&&&&&&&&&& 1.053&&&0.003
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&&&&& 2、具上下限设定、装有蜂鸣器。
&&&&& 3、任何重量的砝码皆可为其标准值，操作方便。
&&&&& 4、只要5CC的血液，只要5秒钟。
&&&&& 5、价格便宜、清洗容易。
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测试种类：
添加剂、悬浮液、乳状液、分散液、同构型溶液
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0.0001 g/cm3
0.001 g/cm3
标准接口：
标准配件：5CC烧杯和特殊玻璃砝码组合&&
选购配件：打印机
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