考马斯亮蓝染色g250与蛋白质的络合物 放...

蛋白质有哪些显色反应?非常着急!越多越好!_百度作业帮
蛋白质有哪些显色反应?非常着急!越多越好!
蛋白质的显色反应常用的显色反应 双缩脲反应:该反应是肽键常用的反应,即在碱性铜溶液中,肽键与铜离子形成络合物,呈紫色(在540nm有最大光吸收峰).酚试剂法:该反应是比色法测定蛋白质的常用方法,即蛋白质以碱性铜溶液处理后,加用酚试剂,呈蓝色(在650nm有最大光吸收峰).考马斯亮蓝法:即蛋白质与一种蛋白质染料考马斯亮蓝G250反应形成复合物,该复合物在595nm有最大光吸收峰.
显色反应:某些蛋白质(含苯环)遇到浓硝酸变性产生黄色不溶物.(1)铁离子和苯酚 (2)酸碱指示剂 (3)铁离子和KSCN
蛋白质的显色反应常用的显色反应 双缩脲反应:
该反应是肽键常用的反应,即在碱性铜溶液中,
肽键与铜离子形成络合物,呈紫色(在540nm有最大
光吸收峰)。 酚试剂法:
该反应是比色法测定蛋白质的常用方法,即蛋白
质以碱性铜溶液处理后,加用酚试剂,呈蓝色(在650nm...实验十一 考马斯亮蓝染色法定量测定蛋白质
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[实验十一 考马斯亮蓝染色法定量测定蛋白质](2) 另取试管6支,吸取上述各管蛋白质溶液0.1ml,加入3.0ml考马斯亮蓝G250试剂, 充分振荡混合,放置5min后,测定A595值。(3) 分光光度法的基本原理和分光光度计的使用方法(分组实际操作、讲解)(4) A595为纵坐标,标准蛋白含量为横坐标,绘制标准曲线。2. 样品提取液中蛋白质含量的测定(1)…… [本文关键词:蛋白质 提取液 标准曲线 考马斯亮蓝 上清液]…
(2) 另取试管6支,吸取上述各管蛋白质溶液0.1ml,加入3.0ml考马斯亮蓝G250, 充分振荡混合,放置5min后,测定A595值。
(3) 分光光度法的基本原理和分光光度计的使用方法(分组实际操作、讲解)
(4) A595为纵坐标,标准蛋白含量为横坐标,绘制标准曲线。
2. 样品提取液中蛋白质含量的测定
(1)蛋白质提取:称取样品约200mg,加蒸馏水5ml,匀浆,4000rpm离心10min,取上清液。残渣用2.0ml蒸馏水悬浮,4000rpm离心10min,合并上清液并定容至10ml。
(2)蛋白质含量测定: 取3支试管,各吸取样品提取液0.1ml,加入考马斯亮蓝G2503.0ml,充分振荡混合,放置5min后,测 A595 值
(3) 根据A595值,在标准曲线上求出样品中蛋白含量。
3. 结果计算
样品蛋白质含量( g/g鲜重)=a ( g) × 提取液总体积 (ml) / [测定所取提取液体积(ml)×样品鲜重(g)], a为从标准曲线上查得的蛋白质含量,单位为 g
【实验结果与分析】
复习思考题、作业题:
1. Bradford法测定蛋白质含量的原理是什么?应如何克服不利因素对测定的影响?
2.为什么标准蛋白质必须用凯氏定氮法测定纯度?
3. 根据蛋白质的呈色反应,测定蛋白质的方法还有哪种?根据所学知识推断各种测定方法有何优点、缺点
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植物体内的蛋白质的量如何测量啊?
提取植物蛋白(TCA/丙酮法)后用Bradford法(考马斯亮蓝G250)或BCA(铜络合物)法蛋白定量.
一、原理LoWry法是双缩脲法(Biuret)和福林酚法(Folin-酚)的结合与发展。其原理是蛋白质溶液用碱性铜溶液处理后,碱性铜试剂与蛋白质中的肽键作用产生双缩脲反应,形成铜—蛋白质的络合盐。再加入酚试剂后,在碱性条件下,这种被作用的蛋白质上的酚类基团极不稳定,很容易还原酚试剂中的磷钨酸和磷钼酸,使之生成磷钨蓝和磷钼蓝的混合物。这种溶液蓝色的深浅与蛋白的含量成正相关,所以可以用于蛋白...
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【求助】请教大家关于生理方面的问题,请大家指教
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小弟最近在做几个植物生理指标的测定,有几个菜鸟问题想请教大家,请大家指教1.在SOD酶活测定时,为什么要设置照光对照管和暗中空白管,目的何在?2.在考马斯亮蓝法测定可溶性蛋白质含量时,实验原理说明,在一定蛋白质浓度范围内(0-100微克/ml)考马斯亮蓝-G250与蛋白质络合物的吸光值与蛋白含量成正比,又为何要制作 0-1000微克/ml的 标准曲线,是为了确定取样量使样品吸光值在
0-100微克/ml范围内吗?如不是,请指教.3.在MDA含量测定中,要测532,450,和600nm的吸光值,其中,450和532是特异吸收峰,600nm的测定是为何,是否消除可溶性糖的干扰?4.在POD和CAT测定时,反应液在4度条件下可放置多久?我想现配现用,想请问下列反应液中,0.15% 和0.2%H2O2是否仍是W/W比?CAT活性测定时,在3 ml反应体系中含0.15% H2O21 ml,50 mM磷酸缓冲液(pH7.0)1.95 ml,加入酶液50 μl启动反应,POD活性测定时,在3 ml反应混合液中包括1 ml 50 mmol/L(pH7.0)磷酸缓冲液,1 ml 0.2%的 H2O2,0.95 ml 0.18 mol/L愈创木酚(pH7.0问题太菜,而且表述繁琐,敬请大家不吝赐教,小弟跪谢了
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