紧急请教！！sigma的凝血酶应该用什么溶解？ddH2O行吗？在线等！！！ - 实验交流 - 生物秀
标题: 紧急请教！！sigma的凝血酶应该用什么溶解？ddH2O行吗？在线等！！！
摘要: 紧急请教！！sigma的凝血酶应该用什么溶解？ddH2O行吗？在线等！！！rt。thanks! 关键词:[凝血酶]……
rt。thanks!
含0.1%TFA的ddH2O
TFA是什么东东啊？怎么配的？
in my lab. only use dd water. 1 unit/ul. 40 ul/ tube, store in -80
TFA是什么东东啊？怎么配的？TFA是三氟已酸很简单配制啊，比如你要配1ml：取1ul到1ml的DDH2O中就ok了
请教各位，我在实验中用不同浓度的thrombin来刺激培养板中的内皮细胞。可以用PBS溶解thrombin吗？溶解后如何保存？谢谢了！
用PBS溶解thrombin应该没问题，amersham说明书上就是这么建议的，不过不知道sigma的和amersham又没有什么差异。
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提取的植物DNA用枪头挑出来像琼脂块一样，在TE和ddH2O中都不溶解。
采用的是CTAB法提取的DNA，以前也是按照这样正常的步骤来提取的，提取过好多种植物，效果都挺好的。这次提取的是一种山兰的DNA，第一遍时由于巯基乙醇没了，用的抗坏血酸替代的，在用无水乙醇沉淀的时候，也出现了好多絮状的白色丝状沉淀，但是所得的DNA并不能溶解在TE中。第二遍则等到巯基乙醇到货后做的，就是正常的步骤，加巯基乙醇，然后65度水浴，这一遍还有两个不是山兰的植物，结果和上一次一样，在乙醇沉淀时也有白色絮状沉淀，而且量还不少。但是依然不能溶解在TE和ddH2O中，请问这是怎么回事？这两次实验我所用的叶片量是稍微有点多，这会不会和这样的结果有直接关系？
大家遇到DNA不溶解都用什么办法处理的？我已经试过好几种方法了，已经准备重新提取了。
WP__50_51_Pro.jpg
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:shuai:不是吧，图片是我在发现提取的DNA不溶解之后，又进行纯化，再用乙醇沉淀，挑出来就是这样了。
已经这样了的话能用什么办法去除多糖？
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扫描下载送金币RNA试剂盒_百度百科
用于各种植物、动物、微生物的提取，在每个里都有一份说明使用说明书。实验者只需要按照说明书上的步骤操作即可。使用时无需配制其它试剂，非常方便，适合于RNA的快速提取。所提取的RNA完整性好、纯度高，可用于后实验。但目前较好的试剂盒价格比较贵，在实验是可以根据自己的实验需要来定夺试剂盒的使用。
RNA试剂盒试剂组成
（以离心柱型为例）：
一般包括：
成分数量储藏温度　　有效期裂解液　　100ml　　2-8℃　　一年　　漂洗液　　30ml　　RT　　一年　　洗柱液　　100ml　　RT　　一年　　RNasefreeddH2O　　30ml　　RT　　一年　　RNasefree吸附柱　　100个　　RT　　一年　　RNasefree收集管(2ml)　　100个　　RT　　一年　　[1]
此外，还配有一份试剂盒使用说明书，根据不同的生产商，可能还配有不同的试剂，如：、等。
RNA试剂盒操作步骤
1. 样品处理
a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
d. 细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e. 血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积裂解液，混匀后室温放置10分钟， 10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。
2. 将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。
3. 向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。
4. 2-8℃ 1200010分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。
5. 吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul 洗柱液，室温放置2分钟，2-8 12,000 rpm ℃ 离心2min，弃废液。
6. 第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8 12000rpm ℃ 离心2min，弃废液。
7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8 12,000 rpm ℃ 离心2min，弃废液。
8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8 12,000 rpm ℃ 离心2min，弃废液。
9. 12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。
10. 将吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min
即得到RNA。[1]
RNA试剂盒注意事项
所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。[1]
RNA在水溶液中可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯，需电泳检测。[1]
使用时一定要根据自己的实验需要购买专用提取试剂盒， 如果不是专用试剂盒，或许能提出RNA，但不能确保其质量以及完整性，会影响RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析、分子等后续实验的结果。
当前提取效果好的是公司生产的RNA提取试剂盒，但其售价较高，单次实验费用花费太大，对精度要求不高的实验没有必要购买，当然还有其它的进口试剂盒，但是均存在价格高、订货周期长的问题（如果碰上国内无货的时候，要从国外发货，会等很长一段时间）。普通的提取实验用国产的试剂盒就足以，价格不高，基本上各地均有现货，如天根（目前国内生产的试剂盒中销售面比较广的一种）等，其价格比进口试剂盒要便宜许多，且效果还不错，性价比还可以。
RNA试剂盒替代方法
当然，就RNA的提取而言，不一定试剂盒的提取效果就非常好，其实采用一些经典的RNA提取方法，效果也很不错，如：、等，只是试剂盒使用方便，经典的方法操作复杂一些。
．生物在线[引用日期]
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