tsk-gel凝胶色谱柱装反了，怎么办？(柱子,色谱柱,凝胶,抗生素,凝胶柱) - 生物药学 - 生物秀
标题: tsk-gel凝胶色谱柱装反了，怎么办？(柱子,色谱柱,凝胶,抗生素,凝胶柱)
摘要: 做药物的高分子有关物质，使用的是tosoh家的tsk-gel柱，是一种球状蛋白填料，机理类似凝胶色谱。
装反了没有发现，用了一半天。发现之后正过来峰就分岔了。反着用的时候峰型和柱效还都不错。这根柱子很贵，将近一万块。悔啊，没有看好就装上了。其实我在装之前还看了方向的！流速是0 8ml min
请教各位，峰型分岔还有什么办法解救这根柱子吗？感谢感谢！！网友回复一般反着用就是柱子不想要了，没有……
做药物的高分子有关物质，使用的是tosoh家的tsk-gel柱，是一种球状蛋白填料，机理类似。
装反了没有发现，用了一半天。发现之后正过来峰就分岔了。反着用的时候峰型和柱效还都不错。这根柱子很贵，将近一万块。悔啊，没有看好就装上了。其实我在装之前还看了方向的！流速是0.8ml/min
请教各位，峰型分岔还有什么办法解救这根柱子吗？
感谢感谢！！网友回复一般反着用就是柱子不想要了，没有什么好办法可以解决，正过来小流速先冲着，很小的流速冲几小时，但是要有柱子报废的心理准备网友回复我真不是诚心的呀~
那反过来使用柱子的寿命能用多久？
我的问题见笑了网友回复正过来冲吧，多冲些时间网友回复我们导师做了几十年液相了，反过来冲就是柱子不想要了，这是老师的原话，做实验犯错误太正常了，任何人学习期间都会犯很多错误，不过这个价钱有点贵就是了网友回复你的柱子现在怎么样了，低流速再冲久一点应该就没事了的网友回复你也是用TSK GEL的柱子啊。你是(antibiotic)的么。网友回复引用内容:
你的柱子现在怎么样了，低流速再冲久一点应该就没事了的 现在保留时间较长的物质柱效下降特别明显
而且柱效不稳呢，一开始很差我就用磷酸盐跑了两天
好很多，做完一部分晚上冲柱子转天再换流动相
柱效又不行了，不知道怎么回事啊
我是做的头孢类的网友回复我建议你咨询一下柱子的生产厂家，看看他们有什么好的建议。也不是所有的色谱柱都不能反着用的，呵呵网友回复凝胶柱本身平衡就要好几个小时，多冲下，用低浓度的NaCl和NaOH水溶液作为流动相冲一下吧，问题应该不大，之前实验室有根凝胶柱柱效低了，反过来后柱效还稍微高了些呢网友回复楼主你的柱子好了么？我现在也在用TSK柱，只用了4天峰就分叉了，也是分离(antibiotic)聚合物，而且操作是严格按照说明书上的，是不是这样的柱子就是很容易坏啊，我也很郁闷啊，9000多的柱子啊！
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[求助]凝胶色谱柱的使用寿命
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[求助]凝胶色谱柱的使用寿命
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我使用的TSK3000SW型7.5*600的色谱柱，我们做了很多年，发现每根色谱柱只能使用到80-100批次(最多一次有用过200批，仅一次而已)的样品就发现柱子不行了。我想请各位大侠帮忙找一下原因！！谢谢！！！
我们的处理方法：
新柱子的使用和处理：先使用超纯水以0.2ml/min流速冲洗过夜，后以0.5mol/l磷酸二氢钠以0.4ml/min流速洗至基线平稳（一般是5个柱体积），然后再以1%异丙醇以0.2ml/min流速过夜。
流动相：磷酸二氢钠5.0321g，磷酸氢二钠24.2736g，加水500ml使之溶解，加异丙醇5ml，混匀，PH值为7.0。过0.45膜,超声30分钟备用。
色谱柱工作一天后用1%异丙醇以0.2ml/min流速冲洗过夜。
长时间不用柱子（如周末、放长假）用先使用超纯水以0.2ml/min流速冲洗过夜，后以0.5mol/l磷酸二氢钠以0.4ml/min流速洗至基线平稳（一般是5个柱体积），然后再以1水以0.2ml/min流速过夜。再0.05%叠氮钠溶液以0.2ml/min流洗（15h以上）。之后取下色谱柱，于30度以下常温保存。
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你好，我也一只用凝胶色谱柱，大概用了将近一年了。
色谱柱型号：TSK-GEL G5000PWXL。我们一直用了保护柱(TSK-GEL)。
流动相：磷酸二氢钾，磷酸氢二钾，加水溶解，pH值7.8。
我们用下来，发现，保护柱的柱压升高很快，不知道你们是否用保护柱，如果不用的话，那柱子的寿命肯定短。
再问一下，你所说的柱子 不能用了，是峰型变差了，柱效变低了，还是柱压变高而不能用了。
用这种柱子的好像比较少，总算找到知音了，能否讨论讨论呢。
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我有用在线过滤器的，那边的工程师说没问题的。
我也问了他们本部的工程师
他们也解决不了
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我也想找个用这种柱子的，今天终于看到你了。呵呵........
柱压原先使用的时候也是升高的挺快，到后来改进方法（离子效应的作用）用0.5mol/l磷酸二氢钠以0.4ml/min流速洗至基线平稳就好了很多。
我们判断柱子不行了是因为我们做血液制品的分子大小分布，单体加二聚体的含量要在98%以上，要高于国家标准。当我们发现柱效低于600的时候就判断柱子不行了。
你们一般一根柱子可以做多少批次啊？
用的勤快吗？一次大概做多少批？一个月用几次？
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不好意思，最近忙辞职的事情，一直没有来看看。
关于这个色谱柱，我们找工程师，都找了好几回了，也一直没有解决问题。
我们问题主要是表现在柱压的升高。因为凝胶柱承受的压力小。我们使用的凝胶柱最大不能超过2Mpa。现在发现压力都升高在预柱上了，所以现在我们采取的对策是把压力上限调高。因为柱子上的压力一直小于2Mpa，所以现在是牺牲预柱了。
我们做得也还频繁。一次大概十几批。每个星期有一次。曾经一次性做了将近200批。现在还没有换过柱子。听说柱子要买好点的。我们这根是将近1W，上次听一个兄弟说他们买的是1.5W的。
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关于这个色谱柱，我们找工程师，都找了好几回了，也一直没有解决问题。
我们问题主要是表现在柱压的升高。因为凝胶柱承受的压力小。我们使用的凝胶柱最大不能超过2Mpa。现在发现压力都升高在预柱上了，所以现在我们采取的对策是把压力上限调高。因为柱子上的压力一直小于2Mpa，所以现在是牺牲预柱了。
我们做得也还频繁。一次大概十几批。每个星期有一次。曾经一次性做了将近200批。现在还没有换过柱子。听说柱子要买好点的。我们这根是将近1W，上次听一个兄弟说他们买的是1.5W的。
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凝胶色谱柱的保存也很重要，我们都是用含0.05％叠氮钠的洗脱液的，这样有助于防止细菌繁殖。
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终于找到知己了，呵呵，我们也遇到了同样的问题，现在也没有解决的办法，我们用了才3个多月吧，1万买的，现在就不行了，主要是柱效下降，检测不出来，峰行变宽，三个峰现在成了两个峰，还不敢给领导汇报呢，
流动相：磷酸二氢钾，磷酸氢二钾，加水溶解，异丙醇50ml，PH7.0。
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我也用过这种柱子，大概用一年左右柱效就变低。不过好像用流动相冲柱子久点，然后再拆了柱子用异丙醇洗系统，再用就会好一点。异丙醇我们是不用来直接冲柱子的。
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我一直使用预柱的，觉得预柱的功能还是发挥得很大。因为我们柱效没有下降过，主要是柱压的升高，而柱压的升高主要表现在预柱压力的升高。所以我们做一阵子，发现预柱压力有明显升高后，就用0.2mol/L的NaOH溶液反向冲洗预柱(流速0.3mol/L)，效果很显著，可以明显看到柱压的下降（从1.8MPa下降到0.6MPa），然后再用水正向冲洗预柱。这个方法屡试不爽。但是做了一年之后，发现，预柱的压力升高频率变快，每做一次，大概十几批样品，预柱压力就升高了不少。而且用以前的方法处理（碱反冲），虽然能降低一些压力，但是已经不能降到以前的水平。我们怀疑是有一些不溶于碱的杂质进了预柱，而冲洗不下来，导致的柱压升高。所以现在我们采取的方法是，做完一次，仍然用碱反冲预柱，能降多少算多少。然后把压力上限提高。这样仍能继续做样。我们的柱子一直保护得很好，柱压没有升高，柱效也没有下降。所以建议大家还是要用预柱。预柱我们用的同柱子一样的品牌，大约3千一根。这样也能只牺牲预柱，节约不少钱。更何况现在我们作样还是很顺利。用了一年多了。凝胶色谱（GPC）
主题：【讨论】柱压达到多少时需要更换保护柱啊
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发表于： 09:21:40
如题。最近发现柱压忽然升高了，估计是被污染了，什么条件下需要更换新的保护柱呢？
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原文由 小琪(thxdyx) 发表:如题。最近发现柱压忽然升高了，估计是被污染了，什么条件下需要更换新的保护柱呢？先把柱芯取出来看看有没有污染物，等到柱子坏了再换就得不偿失了。背压升高时是一个表现，谱图有变化吗
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柱压升高到多少？原来多少，是突然升高的?刚升高，可以考虑低流速反冲下，看是否能降下来，样品中有什么堵柱子的东西的，再考虑用什么溶剂冲洗。
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以前没测过，最近测了下，发现，新的预柱加上柱子才25bar，之前已经升高到77bar了，还好我们只是看参照和测试的对比，不然就惨咯。以后得注意尽量不测污染物多的样品。77bar的压力会伤害泵吗？
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你多少根柱子呀？凝胶色谱柱子的压力都很小的，一根分析柱加一根预柱？现在压力是变大了好多了， 可以把预柱拆下来，只接分析柱，看压力多少，一般情况是预柱堵了，更换根预柱就好了，或者反冲下预柱，但反冲时，预柱后什么都别接，直接到废液回收。77bar不会伤到泵，你的是什么GPC，GPC-50可以耐200bar，一般液相能耐400bar，这个是没有问题的。
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原文由 小琪(thxdyx) 发表:以前没测过，最近测了下，发现，新的预柱加上柱子才25bar，之前已经升高到77bar了，还好我们只是看参照和测试的对比，不然就惨咯。以后得注意尽量不测污染物多的样品。77bar的压力会伤害泵吗？压力不需要专门测试的呀，仪器本省就能看到压力的呀，平时要多观察记录其压力变化，判断柱子性能的。您当前位置： >
> TSK凝胶色谱柱TSK凝胶色谱柱
→TSK凝胶色谱柱
&& 尺寸排阻色谱(SEC, Size ExclusiveChromatography)是液相色谱的一个分支，其分离过程是根据被分析物质的分子体积(或分子量)大小，按顺序被洗脱出色谱柱，以达到复杂混合物的分离目的。尺寸排阻色谱是分析大分子化合物的重要手段之一，因为分子量和分子量的分布是化合物的最基本和最重要的参数。根据待分离样品的性质，尺寸排阻色谱又分为适合于分离水溶性样品的凝胶过滤色谱 (GFC，Gel Filtration Chromatography)，以及适合于分离油溶性样品的凝胶渗透色谱(GPC，Gel Permeation Chromatography)。
&&& TOSOH公司(2001年以前是TosoHass公司)是世界上专门从事生产生物样品分离介质的公司之一，其最著名的产品是TSK-GEL色谱柱及其填料，已经在世界范围内非常多的实验室和工厂使用，大量的数据表明该产品非常适合生物及相关样品的分析分离。
&&& 现在，TOSOH公司的所有产品在中国地区的销售全部由大连依利特分析仪器有限公司代理。
SW系列订货信息
PW系列订货信息
&&&&TSK-GEL SW系列凝胶色谱柱
&&& TSK-GEL SW系列色谱柱的填料是以刚性的球型硅胶为基质，在其表面通过共价键化学键合亲水基团而成。TSK-GEL SW系列色谱柱的填料具有高性能尺寸排阻色谱所必需的性能，即低吸附性和良好的孔径分布；其pH适用范围为2.5-7.5，可以使用与水完全互溶的有机溶剂，如乙腈、丙酮、甲醇或乙醇等。TSK-GEL SW系列色谱柱适合用于分析分离蛋白质和多肽类样品，其他应用有大量的文献报道。最经常使用的是10& m 的TSKgelG2000SW，TSKgel G3000SW和13&m的TSKgel4000SW色谱柱；TSK-Gel 2000SWXL和3000SWXL是5&m，TSK-Gel 4000 SWXL是8&m的高效填料色谱柱；分析型色谱柱的结构可以是玻璃或不锈钢材质。其它如大粒度和大尺寸的制备色谱柱以及保护柱的相关资料，用户可以直接与本公司联系
&&TSK-GEL PW系列凝胶色谱柱
&&& TSK-GEL PW系列色谱柱的填料是亲水而刚性，多孔球型，化学和机械性能都非常优异的聚合物。适用于以凝胶色谱的模式分析分离蛋白质、多肽、多糖、寡糖、DNA、RNA、水溶性的有机聚合物和其他水溶性大分子样品等。TSK-GEL PW系列色谱柱的pH适用范围为2-12，可使用含有50%的混合有机溶剂为流动相，使用温度可达80℃(TSK-gel G-DNA-PW为50℃)。尽管大多数的TSK-GEL PW填料呈微弱的负电性(约5～8&eq/mL)，但是对于分析分离非离子、阴离子和大多数的阳离子型样品没有任何影响。因为TSK-GELPW填料具有非常宽的分离范围，更加线性的校正曲线以及比TSK-GEL SW色谱柱更加低得多的吸附特性，所以TSK-GEL PW色谱柱经常用于分离水溶性的合成聚合物。
&&& 相对而言，TSK-GEL SW色谱柱适合于分析分离单分散性的生物大分子，如蛋白等，而TSKGELPW色谱柱则更加适合于如多糖和合成聚合物等多分散性样品的分析分离。
&&& TSK-GEL PW有七种不同孔径的填料，通常分析色谱柱使用的填料粒度是10和17&m，制备柱用的是17，22或25&m。TSK-GEL PWXL系列色谱柱所使用的填料是具有更高柱效的6，10或13&m的填料。混合床层的TSKgel GMPW和TSKGELPWXL系列色谱柱用于分离宽分子量范围，TSKgel G-Oligo-PW和TSKgel G-DNA-PW系列色谱柱则是分离寡糖和DNA或RNA的专用柱。其它类型色谱柱如大粒度和大尺寸的制备色谱柱以及保护柱的相关资料，用户可以直接与本公司联系。
&&&&TSK-GEL SW系列凝胶色谱柱
TSK-GEL SW 系列部分色谱柱填料的种类及特性
样品的分子量
5,000～150,000
1,000～30,000
500～15,000
5,000～100,000
1,000～30,000
500～15,000
10,000～500,000
2,000～70,000
1,000～35,000
10,000～500,000
2,000～70,000
1,000～35,000
20,000～10,000,000
4,000～500,000
2,000～250,000
20,000～7,000,000
4,000～500,000
2,000～250,000
& & & & & & & & & & & & & & & && & & & & & & & & & & & & & & & & & & & &&
G2000SW 7.5*300
G3000SW 7.5*300
G4000SW 7.5*300
G2000SW 7.5*600
G3000SW 7.5*600
G4000SW 7.5*600
G2000SW 21.5*600
G3000SW 21.5*600
G4000SW 21.5*600
G2000SW 21.5*300
G3000SW 21.5*300
G4000SW 21.5*300
&TSK-GEL PW系列凝胶色谱柱
TSK-GEL PW 系列色谱柱部分填料的种类及特性&
样品的分子量
可达&2,000
500-800,000
可达60,000
可达&50,000
10,000-1,500,000
1,000-700,000
2,000-300,000
&10,000,000
50,000-7,000,000
4,000-1,000,000
&200,000,000
500,000-50,000,000
40,000-8,000,000
GMPWXL 7.8*300
G2000PW 7.5*300
G2500PW 7.5*300
G3000PW 7.5*300
G4000PW 7.5*300
G5000PW 7.5*300
G6000PW 7.5*300
GMPW 7.5*300
G2000PW 7.5*600
G2500PW 7.5*600
G3000PW 7.5*600
G4000PW 7.5*600
G5000PW 7.5*600
G6000PW 7.5*600
GMPW 7.5*600
G2500PW 21.5*600
G2500PW 21.5*300
G3000PW 21.5*300
描&&&&&&&&述
TSK-GEL ODS-80TM
&P4.6&250mm
TSK-GEL G2500PWXL
&P7.8&300mm
版权所有 (C) 2013 无锡加莱克色谱科技有限公司 电话：+86-510-92503 传真：+86-510-
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十八烷基键合相，功能特点：高纯、超惰性碱灭活固定相，可避免硅羟基与分析物的次级作用：(1) 酸性、碱性和中性化合物高效极佳分离；(2) 与其它品牌色谱柱相比，更适用于碱性物质分离。
规格：柱长 20 mm-300 mm；内径：1.0 mm -4.6 mm；粒径：2.0-10 &m
2、C18-AR：
将C18、苯基(Ph)两种键合相的特性融入单一键合相中，撷取两种键合相的优势，形成独特的选择性。适用于：(1) 方法筛选、开发；(2) 单独C18或Ph无法实现的复杂混合物分离；(3) 具有吸电子基团的异构体分离；(4) 酸性、碱性、中性化合物极佳分离；(5) UHPLC分析。
规格：柱长 20 mm-300 mm；内径：1.0 mm -4.6 mm；粒径：2.0-10 &m
3、C18-PFP：
将C18、五氟苯(PFP)两种键合相的特性融入单一键合相中，撷取两种键合相的优势，形成独特的选择性。适用于：(1) 方法筛选、开发；(2) 单独C18或PFP无法实现的复杂混合物分离；(3) 具有供电子基团的异构体分离；(4) 酸性、碱性、中性化合物极佳分离；(5) UHPLC分析。
规格：柱长 20 mm-300 mm；内径：1.0 mm -4.6 mm；粒径：2.0-10 &m
极性C18键合专利技术；高纯、超惰性SiO2；快速柱平衡；高重现性。适用于： (1) 高水分甚至纯水流动相，实现极性化合物高效分离及LC-MS连用；(2) 快速梯度洗脱；(3) 酸性、碱性、中性化合物的极佳分离。
规格：柱长 20 mm-300 mm；内径：1.0 mm -4.6 mm；粒径：2.0-10 &m
5、C18-HL：
高比表面积、高碳载量、高稳定性固定相，适用于：(1) 高载样量样品分析；(2) 制备色谱；(3) 高保留性能，适用于LC-MS；(4) 酸性、碱性、中性化合物的极佳分离。
规格：柱长 20 mm-300 mm；内径：1.0 mm -4.6 mm；粒径：2.0-10 &m
6、C18-300
高纯、大孔径、超惰性碱灭活固定相：(1) 酸性、碱性和中性大分子化合物的高效极佳分离，如蛋白质和多肽的分析；(2) 与其它品牌色谱柱相比，更适用于碱性物质分离。
规格：柱长 20 mm-300 mm；内径：1.0 mm -4.6 mm；粒径：2.0-10 &m
与ACE C18、C8色谱柱相比，在保持优良色谱性能的同时，疏水性降低；与传统的C4固定相相比，键合相抗水解能力增强，配体稳定性增加。适用于：(1) 反相色谱模式下，低保留的快速分析；(2) 小分子蛋白质分析。
规格：柱长 20 mm-300 mm；内径：1.0 mm -4.6 mm；粒径：2.0-10 &m
与ACE C18相比，C8疏水性降低，但键合相密度增加，因此具有与ACE C18类似的高柱效、高分辨率、极佳峰形。适用于：(1) 方法筛选、开发；(2) 反相色谱模式下，低保留的快速分析；(3) 高水分流动相。
规格：柱长 20 mm-300 mm；内径：1.0 mm -4.6 mm；粒径：2.0-10 &m
与传统的CN固定相相比，柱稳定性、重现性均显著提升；与反相色谱柱相比，增加了极性化合物的保留；具有快速平衡能力。适用于：(1) 快速梯度洗脱；(2) 快速方法筛选；(3) 正相或反相色谱分离。
规格：柱长 20 mm-300 mm；内径：1.0 mm -4.6 mm；粒径：2.0-10 &m
10、Phenyl
疏水能力位于C4和C8固定相之间，但对极性化合物有较强的保留能力；与传统的苯基柱相比，柱效、稳定性、重现性增强。适用于：(1) 芳香化合物分析；(2) 胺类、极性化合物分析。
规格：柱长 20 mm-300 mm；内径：1.0 mm -4.6 mm；粒径：2.0-10 &m
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部分产品型号如下：
一、ACE 5um色谱柱
5um,100A C18 C8 C4 CN Phenyl AQ C18-HL
150 x 4.6mm ACE-121-1546 ACE-122-1546 ACE-123-1546 ACE-124-1546 ACE-125-1546 ACE-126-1546 ACE-321-1546
250 x 4.6mm ACE-121-2546 ACE-122-2546 ACE-123-2546 ACE-124-2546 ACE-125-2546 ACE-126-2546 ACE-321-2546
250 x 10mm ACE-121-2510 ACE-122-2510 ACE-123-2510 ACE-124-2510 ACE-125-2510 ACE-126-2510 ACE-321-2510
另有柱长50mm，75mm，100mm，125mm，预柱，柱内径1.0mm，2.1mm，3.0mm，4.0mm，7.75mm请询价。
二、ACE 10um色谱柱
10um,100A C18 C8 C4 CN Phenyl AQ C18-HL
150 x 4.6mm ACE-131-1546 ACE-132-1546 ACE-133-1546 ACE-134-1546 ACE-135-1546 ACE-136-1546 ACE-331-1546
250 x 4.6mm ACE-131-2546 ACE-132-2546 ACE-133-2546 ACE-134-2546 ACE-135-2546 ACE-136-2546 ACE-331-2546
250 x 10mm ACE-131-2510 ACE-132-2510 ACE-133-2510 ACE-134-2510 ACE-135-2510 ACE-136-2510 ACE-331-2510
另有柱长50mm，75mm，100mm，125mm，预柱，柱内径7.75mm，50mm请询价。
三、ACE 300A 5um色谱柱
5um,300A C18-300 C8-300 C4-300 CN-300 Phenyl-300
150 x 4.6mm ACE-221-1546 ACE-222-1546 ACE-223-1546 ACE-224-1546 ACE-225-1546
250 x 4.6mm ACE-221-2546 ACE-222-2546 ACE-223-2546 ACE-224-2546 ACE-225-2546
四、LC/MS柱
3um,100A C18 C8 C4 CN Phenyl AQ C18-HL
100 x 4.6mm ACE-111-1046 ACE-112-1046 ACE-113-1046 ACE-114-1046 ACE-115-1046 ACE-116-1046 ACE-311-1046
150 x 4.6mm ACE-111-1546 ACE-112-1546 ACE-113-1546 ACE-114-1546 ACE-115-1546 ACE-116-1546 ACE-311-1546
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