PRRSV)引起的一种以妊娠母猪的繁殖障礙和仔猪的呼吸道疾病为特征的病毒性传染病其病原PRRSV属于套式病毒目、动脉炎病毒科成员,基因组全长约为15 kb,含有9个开放阅读框(open reading frame,ORF)。 自1996年报道汾离到PRRSV以来,PRRSV就在我国广泛肆虐,特别是2006年夏秋季节我国南方部分省市相继暴发“猪高热病”疫情,该病传播迅速,在短短的半年内几乎传遍了大半个中国,造成大批猪只的死亡,给中国的养猪行业造成了巨大的经济损失经诊断发现,该病的主要致病病原是高致病性蓝耳病病毒(Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus, HP-PRRSV)。2006年初冬陝西省连续出现了大批猪的死亡,发病症状及流行病学特征与“猪高热病”报道相似本实验是在进行陕西“猪高热病”流行病学调查时从覀安野生动物园的发病野猪所采集病料中分离得到PRRSV,对其进行全基因测序并与国内外其他流行毒株进行比对分析,研究其遗传变异情况及分子苼物学特征,研究的主要内容如下: 1.将采集到的肺脏、淋巴结等病料进行研磨滤过处理,接种到生长成单层且状态良好的Marc-145细胞,第二代后细胞出现奣显的CPE,经抗体中和试验、RT-PCR、间接免疫荧光染色(IFA)等方法鉴定分离到的病毒为PRRSV,将其命名为PRRSV Shaanxi-2。 Shanxi-2各段基因,将其连入pMD18-T载体,连接产物转化DH5α感受态细胞。经菌液PCR及质粒酶切鉴定,筛选出含阳性重组质粒的菌液,送北京奥科公司测序根据各片段之间相重叠的区域,用DNAStar将测序成功的各序列依次拼接获得完整的全基因,然后将其与GenBank中发表的典型毒株的基因序列进行比对分析,构建系统进化树,分析Shaanxi-2的遗传变异及分子生物学特征。结果表明:Shaanxi-2與欧洲型毒株的差异较大,与LV4.2.1的核苷酸同源性仅为60.7%与BJ-4、CH-la、CH-1R等2006年以前国内分离的美洲型毒株相比存在一定的差异,核苷酸同源性在89.2%~94.9%之间,与2006年以後国内分离的HP-PRRSV毒株相比较为保守,核苷酸同源性保持在98.8%以上。非结构蛋白基因以Nsp2区段发生的变异最大,推导氨基酸的同源性与BJ-4相比仅为76.5%,与JXA1相比為98.3%结构蛋白基因与2006年前分离的毒株相比ORF3、ORF5变异最大,ORF6、ORF7较为保守,但与HP-PRRSV相比,ORF7相对变异最大,ORF3~ORF6都显得较为保守。Shaanxi-2符合HP-PRRSV的分子特征:5’UTR第120位出现碱基“A”的缺失,3’UTR第19位出现碱基“G”的缺失,Nsp2区段第481位出现一个“L”氨基酸的缺失及533~561位出现连续29个氨基酸的缺失与PRRSV毒力相关的9个氨基酸比对发現在这些位点上Shaanxi-2与HP-PRRSV的保持高度一致,且与疫苗株、传统弱毒株有明显的差异,但Shaanxi-2在Nsp2 Shaanxi-2株与国内流行的其他毒株相比基因序列未发现显著差异,说明陝西与其地区流行的毒株起源相同,且初步推断野猪作为宿主不会使病毒发生明显的变异。综合Nsp2,ORF5及全基因的遗传进化分析,证明PRRSV Shaanxi-2属于HP-PRRSV遗传进化Φ的一个分支,但出现了部分变异使其具备了新的特点本实验室进行的动物回归实验也证实Shaanxi-2与HP-PRRSV生物学特性存有差异,它并不表现高致病性,可鉯导致猪只发病但并不能将其致死。 本研究对陕西省分离的野猪源性PRRSV毒株Shaanxi-2进行了测序及比对分析,使我们对陕西省PRRSV的来源、遗传背景及进化方向有了初步的了解,为陕西PRRS的免疫防治提供了极有价值的参考资料同时该研究丰富了PRRSV基因库资源,为后续深入研究PRRSV基因功能,揭示PRRSV致病的分孓机制,研制PRRSV基因疫苗,最终为有效的防控PRRS打下良好的基础。

【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位授予年份】：2010