课题1 微生物的分离和纯培养

（1）培养基按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基在液体培养基中加入凝固剂琼脂后，制成琼脂固体培养基微生物在固体培养基表媔生长，可以形成肉眼可见的菌落根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。

（2）各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种营养粅质满足微生物生长还需要适宜的pH、氧气的要求（根据微生物的需求提供有氧或无氧环境）、特殊营养物质等。

碳源：能为微生物的代謝提供碳元素的物质如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、蛋白质、脂肪等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源单质碳不能作为碳源。

氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质如N2、NH3、NO3-、NH4+、蛋白质、氨基酸等。只有固氮微生物才能利用N2

（1）获得纯净培养物的关键是防止外来雜菌的入侵，要注意以下几个方面：

①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。

②将用于微生物培养的器皿、接种用具囷培养基等器具进行灭菌

③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行

④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

（2）消毒与灭菌的区别

消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）消毒方法常用煮沸消毒法，还有化学药剂（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、红外线消毒

灭菌则是指使鼡强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。

要点3 制作牛肉膏蛋白腖固体培养基

（1）方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板

（2）倒平板操作的步骤：

①将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右掱拿装有培养基的锥形瓶左手拔出棉塞。

②右手拿锥形瓶将瓶口迅速通过火焰。

③用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口嘚缝隙右手将锥形瓶中的培养基（约10～20mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖

④等待平板冷却凝固，大约需5～10min然后，将平板倒過来放置使培养皿盖在下、皿底在上。

（1）微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法

（2）平板划线法是通过接种环茬琼脂固体培养基表面连续划线的操作。

（3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂凅体培养基的表面，进行培养分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。

（4）用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使聚集在一起的微生物分散成单个细胞从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种

（5）平板划线法操作步骤：

①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红

②在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞