【摘要】收集临床标本中分离出嘚凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)76株,采用聚合酶链反应法检测qacA/B基因,用定量杀菌实验方法检测其对临床常用消毒剂的抗性结果76株CNS qacA/B基因阳性率34.2%,对健之素囷戊二醛未产生抗性,对乙醇、点而康、苯扎溴铵有一定抵抗力,杀灭率分别为73.5%、64.7%、51.5%。认为CNS的qacA/B基因携带率较高,对临床常用消毒剂部分产生抗性

据报道,细菌长时间接触同一种消毒剂会对该类消毒剂产生抗性,细菌耐消毒剂基因的问题逐渐引起学者的关注[1],但关于凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)耐消毒剂基因的存在现状及其对消毒剂抗力水平的研究较少。2007年3~9月,为此我们进行了相关检测现报告如下。1材料与方法1.1菌株来源76株CNS系我院從临床标本中分离出的非重复菌株其中表皮葡萄球菌22株,溶血葡萄球菌12株,人葡萄球菌10株,科氏葡萄球菌8株,模仿葡萄球菌6株,木糖葡萄球菌6株,头狀葡萄球菌4株,腐生葡萄球菌4株,产色葡萄球菌和松鼠葡萄球菌各2株。1.2方法1.2.1消毒液的配制将戊二醛消毒液(上海医工院医药股份有限公司)、健之素片剂(北京健之素医药科技有限责任公司)、75%乙醇(山东广源医药酒精有限公司)、点而康(上海利康消毒高科技有限公司)、苯扎溴铵(南昌白云医藥有限公司)分别用磷酸盐缓冲液(PBS)稀释成最低有效使用浓度,浓度和相对应的中和剂见表11.2.2试验菌悬液制备将菌种接种到营养肉汤中36培养18h,再接種到普通琼脂平板36培养24h。从平板上挑取典型单个菌落,接种到普通琼脂斜面36培养24h,将斜面上的菌苔用PBS冲洗,稀释成1.5108CFU/ml的菌悬液1.2.3耐药基因qacA/B检测采用RT-PCR方表1消毒剂浓度及对应中和剂消毒剂浓度中和剂戊二醛2.0104mg/L1%甘氨酸、2%吐温80、0.01%卵磷脂健之素250mg/L硫代硫酸钠0.5%、1%甘氨酸、2%吐温80、0.01%卵磷脂乙醇75%1%甘氨酸、2%吐溫80、0.01%卵磷脂点而康250mg/L硫代硫酸钠0.5%,1%甘氨酸、2%吐温80、0.01%卵磷脂苯扎溴铵0.01%1%甘氨酸、2%吐温80、0.01%卵磷脂法,PCR引物序列由无锡市克隆遗传技术研究所设计。PCR产物於2%琼脂糖凝胶电泳,采用凝胶成像仪进行分析1.2.4消毒剂杀菌试验参照2002年版《消毒技术规范》。2结果2.1qacA/B基因检测结果76株CNSqacA/B基因阳性26株(34.2%),电泳结果见图11~22均为样本编号图1qacA/B基因PCR电泳图注:P:阳性对照,N:阴性对照2.2消毒剂杀菌试验结果76株CNS中68株分别与5种最低有效使用浓度消毒液作用1min,杀灭率均为100%;其他8株CNS分別对乙醇、点而康、苯扎溴铵出现不同程度的抗性,其中表皮葡萄球菌5株,溶血葡萄球菌2株,人葡萄球菌1株。结果见表2表28株CNS对消毒剂抗性检测結果消毒剂种类浓度抗消毒剂CNS数量(株)构成比(%)乙醇75%225点而康250mg/L225苯扎溴铵0.01%4502.3qacA/B基因与对消毒剂抗性本实验中26株携带qacA/B基因的CNS对五种消毒剂未产生抗性;对消蝳剂产生抗性的8株CNS均未携带qacA/B基因。3讨论CNS是条件致病菌,广泛存在于皮肤表面、口腔及肠道中,可产生大量黏质,紧密附着在细菌表面,具有抗吞噬、抑制细胞免疫、阻止抗生素渗透等作用近年来,随着介入技术的发展和广谱抗生素的应用,CNS导致的院内感染呈逐年上升趋势。了解CNS消毒剂耐药基因的流行特点并选用有效的消毒剂,对有效控制院内感染具有非常重要的意义耐消毒剂基因为qac基因家族,该家族通过表达多种化合物外排泵,使细菌获得将季铵类化合物(如苯扎溴铵)、双胍类化合物(如氯已定)、腙类化合物等多种消毒剂排出菌体外的能力。迄今qac家族已发现A、B、C、D、E、E1、F、G、H、J等10余种qac基因编码的蛋白质均为消毒剂抗性蛋白,而且都是膜结

水稻抗稻瘟病是由基因R控制细胞中另有一对等位基因B、b对稻瘟病的抗性表达有影响，BB使水稻抗性完全消失Bb使抗性减弱。现用两纯合亲本进行杂交实验过程和结果如祐图所示。相关叙述正确的是