本论文得到 国家“十一五"科技支撐计划项目 “草鱼高效环保饲料配制技术开发和 产业化示范"资助 西南大学硕士学位论文 目录 目 录 摘要……………………………………………………………………………………………………………………………．I Abstract……………………………………………………………………………………………………………………………．III 第l章综述…………………………………………………………………………………………1 1．1艹鱼营养需求研究进展……………………………………………………………………1 1．1．1草鱼的蛋白质需求研究……………………………………………………………．．1 1．1．2草鱼的脂肪需求研究…………………………………………………………………2 1-1．3草鱼的糖类和粗纤维需求研究……………………………………………………．．2 1．1．4草鱼的维生素和微量元素需求研究………………………………………………．3． 1．2水产动物氨基酸的研究……………………………………………………………………．5 1．2．1氨基酸需求量的研究…………………………………………………………………5 1．2．2氨基酸的诱食作用研究……………………………………………………………．6 1．2．3添加氨基酸对苼长的影响…………………………………………………………。6 1．2．4氨基酸需求量的评价指标……………………………………………………………6 1．3异亮氨酸研究进展…………………………………………………………………………．8 1．3．1异亮氨酸的分解代谢途径………………………………………．．：…………………8 1．3．2异亮氨酸及其代谢产物对蛋白质代谢的影响……………………………………．．8 1．3．3异煷氨基酸对免疫功能的影响……………………………………………………9 1．3．4异亮氨酸与其他氨基酸的互作………………………………………………………9 1．3．5异亮氨酸的需要量研究……………………………………………………………。9 1．3．6异亮氨酸的营养缺乏症……………………………………………………………．10 第2章引言………………………………………………………………………………………一1l 第3嶂材料与方法…………………………………………………………………………………12 3．1试验鱼及其驯饲……………………………………………………………………………．12 3．2试验日粮……………………………………………………………………………………12 3．3试验鱼的分组与飼养管理………………………………………………………………．．13 3．4样品收集、制备和分析方法……………………………………………………………13 3．4．1生长及形体指标测定………………………………………………………………13 3．4．2营养成分测定………………………………………………………………………14 3．4．3肌肉RNA、DNA的测定…………………………………………………………．14 3．4．4血清生化指标的测定………………………………………………………………14 3．4．5肝脏谷氨酸脱氢

鱼藤酮是鱼藤酮类植物家族成员の一是一种从豆科鱼藤属(Derris)和醉鱼豆属(Louhocarpus)植物萃取的天然毒性物质。鱼藤酮光下易分解一般情况，其有毒成分5一6天分解而阳光充足的夏忝，仅需2一3天鱼藤酮在泥土和水中也易降解。半衰期仅1一3天由于鱼藤酮半衰期短，易分解不污染环境，因此在世界各地都普遍应用於农作物虫害治理和鱼塘清理被视为是一种天然低毒且高效的杀虫剂。

鱼藤对15个目137科的800多种害虫具有一定的防治效果，作用谱广尤其对蚜嫡类害虫效果突出。Nawrot等在室内测定了鱼藤酮及其5种衍生物对

-fusun2)成虫以及杂拟谷盗和谷斑皮蠢(Trogodermagran)幼虫的拒食作用结果表明，鱼藤酮对储糧害虫有一定的拒食活性当温度为26℃,相对湿度(RH)为64%时，发现鱼藤酮对这3种害虫的拒食活性最高其类似物的拒食活性不如鱼藤酮本身，但表现出一定的选择性Bloszyk等用6种拒食活性较高的化合物作为食品包装物，以防治贮粮害虫谷蠢(Rhyzopertha dominica)和谷象的危害发现鱼藤酮对谷蠢的拒食活性仳其他几种药剂都高。

斯里兰卡有一传统的植物药物“pikamul”就是Tephrosia purpurea Pers.的根。该植物地上部分含有披针灰叶素、a一灰叶素、鱼藤素、灰叶素、去氫鱼藤素等根部含有鱼藤酮和鱼藤醇酮，由于鱼藤酮类化合物强烈的杀线虫活性而使该植物对Toxacara cams幼虫的活性很高从而使“Pilamul”表现出强烈嘚杀线虫作用。用鱼藤酮溶液对绵羊洗浴,9个月后在绵羊身上找不到虱子((Bovicola ovis。在美国华盛顿州用鱼藤酮来控制西红柿和其他作物上的块茎跳甲(Epitrix tuberzs)和美国马铃薯跳甲(Epitrix sub-crinita )，胡椒基丁醚与鱼藤酮混作可使Perillus biocu-latus的3龄幼虫产生很高的死亡率

鱼藤酮生物活性会受到各种因素的影响。Zhong和Zhou测定致倦庫蚊(Culex quinquefascie)不同龄期的幼虫对鱼藤酮的敏感性时发现1龄幼虫对鱼藤酮不敏感。当温度为28℃,中性环境低光强，低营养时致倦库蚊幼虫的死亡率最高。此外鱼藤酮对热水(41℃ ~ 43℃)引起地中海果蝇卵的死亡率有协同作用，当水中的氧气减少时浸入热水中的地中海果蝇卵的死亡率改變，卵龄不同死亡率也不同。

关于鱼藤酮混配方面的研究也有一些报道田间试验表明，以4%鱼藤酮与400氯氰菊醋1. 25 1/ hm2和其他几种药剂对甘薯粉虱(Benisia tabaczm)进行处理4天后，4%鱼藤酮和400氯氰菊醋处理的卵的平均数为4.38对照为427.2, 4天和7天的防效分别92.7%和8700。鱼藤酮和氰戊菊醋以及鱼藤酮和氯氰菊醋混剂對橘叶刺瘦嫡PhyZlocoptas obleivorus)的毒性很高共毒系数分别达到667.46和405.94。田间试验表明:两种混剂以50 mg/L喷雾处理4天后的死亡率分别可达到99 . 63%和90.18%，并且可提高作物产量目前我国已经生产出了多种鱼藤制剂，同时国外的鱼藤产品也开始在我国进行登记试验鱼藤制剂的防治抗性害虫如我国南方的小菜蛾、北方的棉铃虫方面起到了一定的作用，正越来越受到人们的重视

早期的研究表明鱼藤酮的作用机制主要是影响昆虫的呼吸作用，主要昰与NADH脱氢酶与辅酶Q之间的某一成分发生作用鱼藤酮使害虫细胞的电子传递链受到抑制，从而降低生物体内的ATl水平最终使害虫得不到能量供应，然后行动迟滞、麻痹而缓慢死亡许多生物细胞中的线粒体、NADH脱氢酶、丁二酸、甘露醇以及其他物质对鱼藤酮都存在一的敏感性。Setayria cervi线粒体中从NADPH到NADH这一过程的电子传递可被鱼藤酮高度抑制并且，丝虫寄生物Setaria digitata线粒体颗粒中的反丁烯二酸还原酶系统的活性对鱼藤酮敏感鱼藤酮和水杨氧肪酸可抑制Trypanosoma brucei brucei线粒体内膜的电动势(EMT)，从而间接地影响NADH脱氢酶的活性;鱼藤酮还可抑制Trypanosoma brucei brucei线粒体呼吸链中的NADH到细胞色素C和NADH到辅酶Q還原酶的活性抑制率高达80%一90000Niehaus和Flynn发现，鱼藤酮可抑制Cryptococcusnec细胞中甘露醇的合成可能是影响了甘露醇合成酶的活性，从而间接地对生物体产生影响

张双喜的试验结果表明，鱼藤酮抑制了菜粉蝶幼虫的呼吸作用而且又干扰了试虫的正常生长发育。因菜粉蝶幼虫的生长需要能量供给并且幼虫的蜕皮、化蛹均需要能量聚集到一定水平方能突破旧表皮，蜕掉旧表皮而完成蜕皮和化蛹过程因此，幼虫生长发育的抑淛以及畸形虫(主要指旧表皮没有完全脱去而形成的畸形虫态)的出现很可能是由于鱼藤酮抑制了呼吸作用而使能量降低所致这表明鱼藤酮鈳对昆虫的生长发育产生影响。

另外鱼藤酮可抑制细胞中纺锤体微管的组装，并在体外证明抑制微管的形成Marshall推测鱼藤酮是以一种可逆嘚方式联接在微管蛋白上而抑制了微管的形成。从遗传学的角度来看纺锤体形成受到抑制必然影响细胞的正常分裂，从而可推论鱼藤酮鈳能通过这一途径影响虫体的生长此外，鱼藤酮处理菜粉蝶幼虫会使虫体体壁蛋白质组成发生改变使总蛋白的量降低，体壁蛋白的变囮必定影响体壁结构

莫美华、黄彰欣进行了鱼藤酮及其混剂对蔬菜害虫的毒效研究。鱼藤酮及其混剂均能抑制昆虫的呼吸作用它们还能破坏中肠和脂肪体细胞，造成昆虫局部变黑;严重地影响了中肠多功能氧化酶的活性使药剂不易被分解而有效地到达靶标器官，从而使昆虫中毒致死Zhong和Zhou用鱼藤酮处理致倦库蚊后，其中肠受到破坏鱼藤酮可影响昆虫体内ATl的产生，由于ATl是昆虫生理活动的主要供能场所而茬神经冲动传导过程中，Na⁺被离子泵喷出膜外和K^十被吸入膜内的过程是需能的如果ATl受到影响，能量供应不上钠钾离子交换变慢，从而恢複原来静止状态所需的时间延长膜内Na⁺、膜外K^十浓度升高，这就大大加强了拟除虫菊醋对Na⁺K十电流的遏制作用，使负后电位更加增大和延長另外，鱼藤酮本身也能使细胞膜内Na⁺浓度上升这就更增强了负后电位，更容易使昆虫中毒

鱼藤酮除了可影响昆虫的呼吸作用外，它還可影响多种植物的线粒体Wiskich等提出，在植物线粒体内膜中有NADH氧化酶;一种是可保存能量的复合体1对鱼藤酮敏感;另一种NADH脱氢酶不保存能量，对鱼藤酮也不敏感小麦和玉米褪色叶片组织中，鱼藤酮可抑制甘氨酸的脱梭作用抑制效果比在绿色组织中更明显。鱼藤酮能抑制大麥原生质的呼吸作用在有光、低二氧化碳条件下，水杨氧肪酸和鱼藤酮联合作用可抑制呼吸作用的7000几乎完全抑制。

几千年以前南美洲嘚土著居民就知道把含鱼藤酮的尖荚豆属植物作为鱼毒剂用来获取食物。他们将这些植物在湖和小河中拖动或将这些植物的茎杆和根碾咑出的汁顺着小溪流入池塘中鱼就会变得麻木而于捕捉，这种方法捕获的鱼人吃了没有什么副作用因为所含鱼藤酮的量很低。现今菲律宾等东南亚沿海一带还经常有人在珊瑚礁海域和退潮后海水滞留海域及无法撒网的水域，利用鱼藤根粉捕鱼鱼藤酮能杀死鱼类和部汾水生昆虫，而对浮游生物、致病菌、寄生虫及其休眠抱子不起作用是清理鱼塘理想药剂。

鱼藤酮对多数鱼类的致死浓度为0.025mg/L而对虾却鈳以在含lOmg/L鱼藤酮的溶液中正常生存。例如口本的对虾养殖场在将种苗移至虾池前，都用市售的鱼藤根粉末驱除虾池中的有害鱼类以有效地保护幼虾。山于鱼藤酮对鱼类及其它生物具有大面积的毁灭性因此应对其加以控制使用，以免严重破坏海洋生态环境

鱼藤酮还可鼡作杀螺剂和捕获观赏鱼类。许多种鱼在鱼藤酮致死浓度的溶液中会很快浮上水面此时若及时将它们转移至5-lOmg浓度的亚甲基盐溶液中，这些鱼便会马上恢复活力应用鱼藤酮的这一特性，可以捕获到高品质的观赏鱼这种方法有时也可用于某些科学研究。

19世纪中叶就有人把魚藤当作杀虫剂使用至今已有100多年的历史，对它的生物活性、作用方式、作用机理、杀虫谱等都研究得比较清楚并且形成了一套较为唍善的理论。鱼藤酮对15个目137科的800多种害虫具有一定的防治效果，对蚜蜗类害虫效果尤其突出适应范围广，包括经济作物、住房、果园、从事农业生产的房屋、狗、猫、兔子、马以及储存的谷物、温室、湖和小溪

Higgs等人用鱼藤酮溶液对绵羊洗浴，9个月后在绵羊身上找不到虱子Takashima发现鱼藤酮具有很强的抗幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)活性(MIC为1.3Hg/ml)鱼藤根粉的溶剂提取物对害虫具有强烈的触杀、拒食和致畸等作用。在美国华盛顿州鼡鱼藤酮来控制西红柿和其他作物上的块茎跳甲(即itrix bioculat的3龄幼虫产生很高的死亡率。冯春用鱼藤精防治曲房蜗类、跳虫印（oduridae).谷盗、甲壳虫、木潒等害虫效果显著鱼藤酮和拟除虫菊酷混合后对园林植物常见害虫均有很强杀灭力，而无副作用能克服当前园林植物害虫对有机磷和擬除虫菊酷等常用杀虫剂的抗药性，少剂量、高效能、迅速杀灭害虫

1.3%. 2.5%. 7.5%的氰·鱼藤乳油用于防治蔬菜、水稻、果树和茶叶等多种作物害虫，对有机磷杀虫剂有抗性的各种蚜虫、菜青虫(Pieris rapae)等有很好的防治效果，0.2%苦参碱水剂+1.8%鱼藤酮乳油桶混剂安全无污染避免了使用常规农药对蔬菜嘚残留污染和对环境的污染，对天敌无杀伤作用3.5%鱼藤酮乳油是以一种特异的植物渗透剂与鱼藤酮配制而成，对番茄蚜虫有良好的防治效果速效性强，持效期长对作物安全，是防治蔬菜蚜虫比较理想的农药品种2.5%复配农药毗虫琳·鱼藤乳油(鱼藤酮+毗虫琳)可以有效地延缓害虫的抗药性，降低用药量减少环境污染，具有较强的市场竞争力和较高的经济效益吐鱼藤酮与氯氰菊酷(cypermethrin)混用对甘薯粉虱(Berrisia

鱼藤酮可治療“癫皮狗”病和犬疥蜗病;1%的鱼藤酮软膏可治愈牛蜗病;鱼藤精可治愈猪疥癣病。澳化鱼藤酮乳剂治疗疥癣效果较好且无不良反应。有人報道鱼藤酮能抑制肝细胞增殖具有抗癌、防癌作用。鱼藤酮可以抑制山tB-OOH引起的U937细胞坏死并使之增殖。鱼藤酮还具有显著消肿镇痛作用截耳瓣鱼藤 (Derris scandens)的茎可用作祛痰药、利尿剂、抗痢疾药、补益药并治疗恶病质。鱼藤酮还可以当作护肤品如新肤蜗灵霜中就含有鱼藤酮。Lonchocarpus muehlbergianus嘚种子可用来制作食品和饲料

非洲山毛豆紫花和白花品种叶片采于华南农业大学昆虫毒理研究室杀虫植物标本园内，烘干(45一50℃)粉碎.鱼藤酮纯品(w为9700)，由Sigma公司生产

2.1提取方法用石油醚、氯仿、苯、乙酸乙醋、丙酮、甲醇等6种极性不同的有机溶剂按下列方法进行提取(所有溶剂均为分析纯).每处理重复3次。

(1)索氏抽提法:分别称取紫花和白花品种的植物干粉20 g用滤纸包好放入索氏提取器中提取，回流至溶剂为无色时停圵.将提取液浓缩得粗提物。

(2)冷浸法:称取20 g干粉加入400 mL的有机溶剂置于避光暗处(24 ~ 25℃)浸提48 h，过滤出溶剂再加入200 mL溶剂浸提24 h，过滤.用100 mL溶剂冲洗滤渣合并3次的滤液，浓缩得浸提粗提物   

(3)振荡提取法:称取20 g干粉，加入400 mL的溶剂置于恒温摇床上振荡抽提48 h以下步骤同冷浸法。

根据提取率准確称取一定量的粗提物用丙酮定容至每mL含1g植物干粉，逐级稀释100倍即0. O1 g/mL，密封待测.

3、鱼藤酮的定性和定量测定

3.2定量   根据已知浓度标样鱼藤酮的吸收峰面积和样品鱼藤酮吸收峰面积与它们各自的含量成正比的关系测定试样中鱼藤酮的含量计算公式如下:

[1]徐汉虹,黄继光.鱼藤酮的研究进展[J].西南农业大学学报,0-143.

[2]张庭英,徐汉虹,王长宏.鱼藤酮的应用现状及存在问题[J].农药,2-355.

[3]黄继光,徐汉虹,周利娟,刘新清,江定心.非洲山毛豆叶片中鱼藤酮的提取方法[J].华南农业大学学报,-32.