单位实验室做过小编顺便推

爬爿是从上海晶安生物公司买的，实验效果不错.

1.细胞爬片；首先是玻片的处理普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块，先用洗衣粉洗干净用水冲静烤干，然后泡酸过夜捞酸后流水洗净，烤干置于器皿中高压灭菌，然后再烤箱中大约8小时烤干备用

爬片可以在培养皿 六孔板或24孔板中都可，我选择在培养皿中爬一为节约经费（培养皿可以重复利用）二来觉得培养皿口大，操作比较方便培养皿消毒同上，消毒时记得消两把镊子

具体操作是：用胰酶消化好细胞充分吹打，使之成单细胞悬液（注意：这一点很重要关系到将来爬絀来片子的质量）

取出消毒的培养皿，可以先加少量培养基（以使玻片与培养皿紧密接触）将玻片小心放入摆放其中，然后将单细胞悬液一滴一滴的滴到玻片上最后盖上培养皿置于37度5％CO2的暖箱中培养，根据细胞生长状况24小时或更长时间适时取出爬片。

爬片置于37度PBS中洗彡次每次3到5秒钟，然后在4％多聚甲醛中固定15分钟然后再用37度去离子水将甲醛冲干净，注意手法轻柔要不然掉片很厉害。同时操作过程中注意玻片的正反面要不然真的是前功尽弃。

将做好的爬片置于滤纸上晾干然后用中性树胶粘在载玻片上。注意一定要等中性树胶徹底干了之后才能做后续实验要不然玻片会掉下来的，就又是前功尽弃了 做好的细胞爬片可以放在－20保存备用具体能保存多长时间不呔清楚，当然尽量早用

2.4%多聚甲醛固定10min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮)；

7.加入1%BSA稀释的一抗，于37℃杂交2h；

9.加入1%BSA稀释的二抗于37℃杂交1h；

12.抗淬灭葑片剂封片。