IIIIIlllIIII I IIllllllIII Y2687805 本课题受国家自然科学基金课题项目资助 课题编号： 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研 究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致 谓{的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也 不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材 料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确 的说明。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 作者签名： 丝=垒 日期：』翌丛年上月』日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学 位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论 文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以 将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用 复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。 保密论文待解密后适应本声明。 作者签名： 铭一县 一留 万方数据 子机制研究 摘要： 研究目的：探讨miR-33a／b在不同转移潜能人皮肤黑色素瘤细胞 系中的表达特点和意义。干预不同人皮肤黑色素瘤细胞系中 miR-33a／b表达后，体外实验水平观察细胞的增殖、粘附、运动、凋 亡和上皮．间质转化等肿瘤细胞恶性生物学功能的变化。干预黑色素 瘤A375细胞中miR-33a表达后，在体实验水平观察裸鼠皮下种植瘤 的大小、体积、质量及肺脏转移灶数目的变化情况。探讨miR-33a／b 影响人黑色素瘤细胞恶性生物学功能的可能机制。 研究方法：通过real．timePCR法检测miR-33a／b在低转移侵袭力 的皮肤黑色素瘤细胞株WM35及高转移侵袭力的皮肤黑色素瘤细胞 株WM45 素瘤细胞系中的表达情况，筛选miR．33a／b高表达和低表达的黑色素 病毒载体，并将其包装成慢病毒，然后感染A375细胞，建立 1-pYr-LVX．miR- MTT法检测细胞增殖能力；平板克隆形成实验检测细胞克隆数；流 式细胞术检测细胞凋亡率；细胞划痕实验、Transwell实验检测细胞 迁移侵袭力；WesternBlot法检测与EMT相关的E．钙粘连蛋白 讨miR一33a的表达对细胞增殖、细胞凋亡、侵袭转移和EMT等表型 ．33a细胞建立裸鼠种植瘤及移植瘤模型，观察裸鼠皮下种植瘤的大 小、体积、质量及肺脏转移灶数目的变化情况。 采用生物信息学分 析法预测H]F．1et可能为miR．33a的下游靶因；WesternBlot法检测 miR-33a表达变化时HIF—l ct蛋白的表达水平；应用双荧光素酶基因 Ⅱ 万方数据 报告法进一步验证HIF—l0【是否为miR-33a的直接靶基因。 瘤细胞株WM35中表达量均高，而在高转移侵袭力的人皮肤黑色素 (WM35>WM45 的表达能抑制细胞增殖、侵袭转移和上皮一间质转化；抑制WM451 抑制种植瘤的形成速度，减少肺脏转移灶的数目。生物信息学预测 HIF．1 HIF一1 0【 的表达上升。

IIIIIlllIIII I IIllllllIII Y2687805 本课题受国家自然科学基金课题项目资助 课题编号： 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研 究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致 谓{的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也 不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材 料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确 的说明。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 作者签名： 丝=垒 日期：』翌丛年上月』日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学 位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论 文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以 将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用 复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。 保密论文待解密后适应本声明。 作者签名： 铭一县 一留 万方数据 子机制研究 摘要： 研究目的：探讨miR-33a／b在不同转移潜能人皮肤黑色素瘤细胞 系中的表达特点和意义。干预不同人皮肤黑色素瘤细胞系中 miR-33a／b表达后，体外实验水平观察细胞的增殖、粘附、运动、凋 亡和上皮．间质转化等肿瘤细胞恶性生物学功能的变化。干预黑色素 瘤A375细胞中miR-33a表达后，在体实验水平观察裸鼠皮下种植瘤 的大小、体积、质量及肺脏转移灶数目的变化情况。探讨miR-33a／b 影响人黑色素瘤细胞恶性生物学功能的可能机制。 研究方法：通过real．timePCR法检测miR-33a／b在低转移侵袭力 的皮肤黑色素瘤细胞株WM35及高转移侵袭力的皮肤黑色素瘤细胞 株WM45 素瘤细胞系中的表达情况，筛选miR．33a／b高表达和低表达的黑色素 病毒载体，并将其包装成慢病毒，然后感染A375细胞，建立 1-pYr-LVX．miR- MTT法检测细胞增殖能力；平板克隆形成实验检测细胞克隆数；流 式细胞术检测细胞凋亡率；细胞划痕实验、Transwell实验检测细胞 迁移侵袭力；WesternBlot法检测与EMT相关的E．钙粘连蛋白 讨miR一33a的表达对细胞增殖、细胞凋亡、侵袭转移和EMT等表型 ．33a细胞建立裸鼠种植瘤及移植瘤模型，观察裸鼠皮下种植瘤的大 小、体积、质量及肺脏转移灶数目的变化情况。 采用生物信息学分 析法预测H]F．1et可能为miR．33a的下游靶因；WesternBlot法检测 miR-33a表达变化时HIF—l ct蛋白的表达水平；应用双荧光素酶基因 Ⅱ 万方数据 报告法进一步验证HIF—l0【是否为miR-33a的直接靶基因。 瘤细胞株WM35中表达量均高，而在高转移侵袭力的人皮肤黑色素 (WM35>WM45 的表达能抑制细胞增殖、侵袭转移和上皮一间质转化；抑制WM451 抑制种植瘤的形成速度，减少肺脏转移灶的数目。生物信息学预测 HIF．1 HIF一1 0【 的表达上升。