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双探针显色和荧原位杂交法检测乳腺癌her2基因状态和17号染色体的分析.pdf 63页
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双探针显色和荧原位杂交法检测乳腺癌her2基因状态和17号染色体的分析
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浙江大学硕士学位论文
双探针显色和荧光原位杂交法检测乳腺癌HER2基因状态
和17号染色体的分析
浙江大学医学院
病理学与病理生理学
2007级硕士研究生
任国平教授
乳腺癌是最常见的女性恶性肿瘤，具有较高的死亡率。联合曲妥珠单抗
(Herceptin，赫赛汀)等为主的联合靶向化疗给乳腺癌患者带来了福音．但是曲
妥珠单抗只对HER2基因扩增或HER2蛋白过表达患者有效，同时曲妥珠单抗治
疗价格十分昂贵且具有虽罕见但后果极为严重的心脏毒害作用。因此，目前对于
新诊断的乳腺癌患者，首先评估HER．2状态从而决定其是否可以接受靶向治疗．
ofClinical
前美国临床肿瘤协会及美国病理家协会(American
ofAmerican
Oncology／College
结果是不准确的，这个结论是通过荧光原位杂交(Fluorenscence
hybridization，
FISH)验证mC
2+的病例得出的。IHC结果易于呈现假阳性，一小部分会呈现假
阴性。FISH在国际上被认为是诊断HER2的金标准，我们通过与FISH做比较，
来评估双探针显色原位杂交(Chromogenic
性乳腺癌HER．2基因状态中应用的可靠性及可重复性，同时探讨17号染色体多倍
体对原位杂交诊断HER2基因状态时可能会产生的影响。
收集乳腺浸润性导管癌的常规石蜡包埋标本，分别使用FISH(146侧)和双
浙江人学硕上学位论文
着丝粒(HER2／chromosomc
随机选取的一例乳腺浸润性导管癌，3次双探针CISH重复的结果均为阴性，
平均比值为o．57+0．07，FISH检测HER2／CEN17为o．65。在83例同时做了FISH
和双探针CISH的样本中发现，两种技术对HER2阴性和阳性的诊断符合率分别为
临界诊断的病例数量的1．6倍(13／8)；此外，按拷贝数计数为阳性的所有病例在
同时发现在FISH
显著(p=0．002)高于阴性病例中多倍体的发生率(37．3％，28／75)。
态的结果和FISH技术检测的结果非常一致，两种技术的临床诊断价值相近；我们
的结果也提示，同步检测并计数HER2和17号染色体有助于明确HER2基因状态。
关键词 乳腺肿瘤；基因，erbB．2；染色体，人，17对；多倍性；DNA探针；
浙江大学硕士学位论文
andchromosome17
andfluorescencesitu
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乳腺癌是最常见的女性恶性肿瘤，具有较高的死亡率。联合曲妥珠单抗
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HER2的标准化检测
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【求助】请教探针设计
页码直达：
这个帖子发布于11年零230天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我最近要对RT-PCR的产物进行southern blot 鉴定。要设计一段探针，用地高新标记。我从没设计过探针，所以很头疼。想请教高手帮忙。我的PCR产物是一段237bp的核苷酸序列，编码链是gggtgaccagt
ctgagcgacg ggggcccgtg gtcctccaca ttggccacca gccccctgga ccagcaggac
gtgaagccgg gacgtgaaga tctgcaactg ggagcaatca tccatcaccg ctcgcctcac
gtagcccacc actcgcccca cactaaccat ccgaacgcct ggggagcgag cccggctcca
aactcgtcca tcacgtccag cggccaacct ctcaatgtgt actcgc.这是大鼠brn-4的mRNA,NCBI的序号是NM017252.http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/viewer.fcgi?db=nucleotide&val=.请问如何设计？要设计多长，有什么原则吗？不胜感激!
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求高人指点一二！！
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你可以采用oligo软件设计60mer探针基本原则1、Tm值在89+/-4度；2、GC含量为40-55％；3、重复的单一碱基连续不超过5个；4、探针分子最稳定二级结构配对碱基长度少于6bp5、探针内部发夹结构不超过5个。6、blastn结果，与其他物种结合的分值不要超过40分。按这些原则，你设计一下看。至于原则都是死的，就跟设计引物一样，按软件算出的引物不一定是最好的。仅供参考。
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多谢啊！想请教zjubell什么是"60mer"?oligo软件我在网上找了，好像不好安装，请问你有安装板的oligo软件吗？我的邮箱
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关于丁香园}