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电泳过程中的不正常现象和对策
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主题：【求助】求助：MDQ毛细管电泳电流前十分钟电流不稳定。但是十分钟后就平缓了。是怎么回事儿？
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发表于： 20:11:44
年前做实验一直是好好的但是年后回来就出现了这个问题在做之前我拿甲醇，Hcl，NaOH又重新再生过一次。然后昨天和今天做了四次实验。都是电流在前十分钟呈跳跃式阶梯式上升。然后大约十分钟后电流就稳定了。这到底是怎么回事儿啊？做了四次电流的规律都是这个样子啊。而且如果只是单纯的在两级加电压。电流不会这样上升。会在很短的时间内上升到正常电流。好苦恼啊。求大神解答啊。然后会在十分钟那块会有吸收峰。样品的吸收峰预计应该是在五十分钟左右才会出啊。
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原文由 nini2006(nini2006) 发表:很正常，样品区和缓冲溶液区的溶液性质不一样，电导率不同，需要有一段时间去平衡。前面的峰是溶剂峰，也是很常见，只要不影响分离，不必介怀。但是会在电流将要恢复正常的时候有吸收峰。这个正常嘛？做了几次都是这个样子呀。
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同志们。正解来了。我给贝克曼的技术经理发了封邮件。她说有可能是进样量太大了。进样量如果超过了毛细管的百分之一可能会出现这种情况。然后我就把进样量减低了些。这个情况就消失了。可能我在开始的时候没有把我的实验条件说的太明白。我使用是非涂层的毛细管。做的实验室利用α-萘胺衍生法分离葡萄糖和果糖。用的缓冲液是ph=9.7的75mmol/l的硼砂缓冲液（没有脱气，但是以前做的时候都是正常的）。分离条件是8kv，正常电流会达到65~70mA。进样条件是5.0psi，8s。谢谢大家了。
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原文由 ericwong(ericwong) 发表:原文由 CEcret(v2812644) 发表:1.柱活化不用HCl,因为对处理硅羟基没帮助。只用NaOH,然后水，然后buffer.2.buffer冲洗时间要足够长，如果你的毛细管在水冲洗以后用buffer冲洗不够，就会出现电流上升的情况。赞同第二条。进样品之前，一定要用buffer长时间冲洗，尤其是PBS，绝对不能冲洗20分钟就完事。二十分钟？我从来都没有冲洗过那么长时间啊。我一般就是缓冲5~7分钟就完事儿了。最经做实验分离葡萄糖和果糖时，会出来三条吸收峰。然后我就单独分离了下葡萄糖和果糖。果糖是正常的，但是葡萄糖会出来两条峰。最近很愁这个情况。有人说可能是在衍生的时候出现了葡萄糖的同分异构体。也说缓冲液的ph值可能会有影响。这个缓冲时间会有影响吗。个人觉得出现葡萄糖的同分异构体的可能性比较大。但是不知道怎么去验证这个结果啊。
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原文由 nini2006(nini2006) 发表:原文由 瀛台寂(v2772193) 发表:原文由 ericwong(ericwong) 发表:原文由 CEcret(v2812644) 发表:1.柱活化不用HCl,因为对处理硅羟基没帮助。只用NaOH,然后水，然后buffer.2.buffer冲洗时间要足够长，如果你的毛细管在水冲洗以后用buffer冲洗不够，就会出现电流上升的情况。赞同第二条。进样品之前，一定要用buffer长时间冲洗，尤其是PBS，绝对不能冲洗20分钟就完事。二十分钟？我从来都没有冲洗过那么长时间啊。我一般就是缓冲5~7分钟就完事儿了。最经做实验分离葡萄糖和果糖时，会出来三条吸收峰。然后我就单独分离了下葡萄糖和果糖。果糖是正常的，但是葡萄糖会出来两条峰。最近很愁这个情况。有人说可能是在衍生的时候出现了葡萄糖的同分异构体。也说缓冲液的ph值可能会有影响。这个缓冲时间会有影响吗。个人觉得出现葡萄糖的同分异构体的可能性比较大。但是不知道怎么去验证这个结果啊。是标准品做的吗？其实只要分得好，随便选一个来做定量，另外一个就以副产物处理就好了。如果想考察它的结构就打一下质谱，有CE-MS最好，没有的话就LC-MS。还可以这样子做啊？是做的标准品。可是这样出现两条吸收峰。怎么做定性啊？没办法确定那条峰才是我想要的啊。
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原文由 ericwong(ericwong) 发表:原文由 瀛台寂(v2772193) 发表:原文由 ericwong(ericwong) 发表:原文由 CEcret(v2812644) 发表:1.柱活化不用HCl,因为对处理硅羟基没帮助。只用NaOH,然后水，然后buffer.2.buffer冲洗时间要足够长，如果你的毛细管在水冲洗以后用buffer冲洗不够，就会出现电流上升的情况。赞同第二条。进样品之前，一定要用buffer长时间冲洗，尤其是PBS，绝对不能冲洗20分钟就完事。二十分钟？我从来都没有冲洗过那么长时间啊。我一般就是缓冲5~7分钟就完事儿了。最经做实验分离葡萄糖和果糖时，会出来三条吸收峰。然后我就单独分离了下葡萄糖和果糖。果糖是正常的，但是葡萄糖会出来两条峰。最近很愁这个情况。有人说可能是在衍生的时候出现了葡萄糖的同分异构体。也说缓冲液的ph值可能会有影响。这个缓冲时间会有影响吗。个人觉得出现葡萄糖的同分异构体的可能性比较大。但是不知道怎么去验证这个结果啊。对毛细管进行活化的时候，如果缓冲液没有进行长时间的平衡，会出很多的问题。活化的时候只用缓冲液冲洗20分钟，我都是觉得时间太短。really？我年前做都没有冲洗很长时间啊。但是自我感觉结果还不错啊。这个和管子是不是也有关系的。我用的是贝克曼送的管子。貌似很不错。|/|/|/|/|/|
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【求助】琼脂糖电泳的电压和电流应该设为多少？
我用六一的双恒电源，电压设80V,电流设30mA，结果显示实际值电压83V，电流11mA，请问这些正常吗？应该怎么设定电压和电流？1.5％浓度琼脂糖。谢谢！
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您的位置： &&请问高手，电泳时电流太大如何解决？ - 实验交流 - 生物秀
标题: 请问高手，电泳时电流太大如何解决？
摘要: [请问高手，电泳时电流太大如何解决？] 我做电泳时在规定的电压下测得的电流强度都很大，这是怎么回事啊？会对试验有太大影响吗？是不是跟我配的缓冲液有关啊？应该怎么改进让电流小些？ 关键词:[缓冲液 电泳 电泳缓冲液 琼脂糖 染色]……
我做电泳时在规定的电压下测得的电流强度都很大，这是怎么回事啊？会对试验有太大影响吗？是不是跟我配的缓冲液有关啊？应该怎么改进让电流小些？回复琼脂糖凝胶电流，电流的大小对结果影响不大。如果有Marker，电压低点分离的效果会更好些。
如果跑的是要活性染色的，电压就要低一点。可以设置怛流或者恒压调整。回复电泳缓冲液是否按规定先配成贮存液，再稀释成指定的浓度；如电泳时电流太大会影响电泳结果的重复性，有时会烧胶的。回复可降低缓冲液的浓度，例如将1*TBE降低成0.5*TBE回复肯定是缓冲液配错了!回复恒压下电流过大肯定是你电泳缓冲液配的浓度大了，这样发热太多，有可能使琼脂糖凝胶变软甚至溶化从而影响电泳效果。若是PAGE活性染色的话，电流就更不能过大了，否则会失活，放在冰箱里跑可以好一点。回复电流太大，可能是缓冲液有问题。电流太大，不能及时散热，可能烧胶。而且带会不在一条直线上回复是不是电极损坏？回复降低电泳缓冲液是可行的
另外得看你用的是什么电泳仪，如果是国产的可能会刚开始电流小，但过一段时间电流加大。进口的一般不会出现这种情况。回复一般用0.5乘的tbe.新配的0.5乘的缓冲液正常情况下应该电压大于电流，用过多次后，电流会比电压大，这时的缓冲液该弃置不用了。否则会影响电泳效果。
新配的缓冲液电压比电流大，证明有问题。回复7楼解释的很对。
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电话：021-影响电泳实验结果的几个因素_百度文库
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影响电泳实验结果的几个因素
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