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【求助】293包装好的慢病毒转染目标细胞一点荧光也没有
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这个帖子发布于4年零206天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
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在下是新手；试验如下：293细胞接种6孔板包装，每孔2ml，SBI公司的GFP载体和Invitrogen公司的三质粒包装系统；30h后收集病毒液；由于没有超高速离心机，新鲜的病毒液0.45um过滤后，直接加1ml进入目标细胞（大鼠骨髓间充质干细胞），25cm的培养瓶，培养体系是5ml，也就是1ml新鲜病毒液和4ml完全培养基（polybrene的浓度约8ug/ml），过夜后换成完全培养基，24h后荧光显微镜下一点绿色荧光也看不出来。请教，难道是病毒太稀了？下图是293
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The GFP signal seen in the 293T cells after plasmid transfection could be from transient transfection, not from generated recombinant virus. The fact that no GFP signal could be seen after infection indicates that there is few infectious lentiviral particles. You need to go back to run p24 antigen ELSA assay or run RT assay for titering viral particles. If you don't have these assays available, try to have the viral medium PEG precipitated and make virion extracts for RT-PCR.
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小神-小神 在下是新手；试验如下：293细胞接种6孔板包装，每孔2ml，SBI公司的GFP载体和Invitrogen公司的三质粒包装系统；30h后收集病毒液；由于没有超高速离心机，新鲜的病毒液0.45um过滤后，直接加1ml进入目标细胞（大鼠骨髓间充质干细胞），25cm的培养瓶，培养体系是5ml，也就是1ml新鲜病毒液和4ml完全培养基（polybrene的浓度约8ug/ml），过夜后换成完全培养基，24h后荧光显微镜下一点绿色荧光也看不出来。请教，难道是病毒太稀了？下图是293应该是病毒没有包装出来，你的包装系统是不是合适啊
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小神-小神 在下是新手；试验如下：293细胞接种6孔板包装，每孔2ml，SBI公司的GFP载体和Invitrogen公司的三质粒包装系统；30h后收集病毒液；由于没有超高速离心机，新鲜的病毒液0.45um过滤后，直接加1ml进入目标细胞（大鼠骨髓间充质干细胞），25cm的培养瓶，培养体系是5ml，也就是1ml新鲜病毒液和4ml完全培养基（polybrene的浓度约8ug/ml），过夜后换成完全培养基，24h后荧光显微镜下一点绿色荧光也看不出来。请教，难道是病毒太稀了？下图是293我们自己包装的都不用离心浓缩等过程的，直接加培液上清。所以不是这些步骤的问题感觉像是包装的问题，比如质粒的比率、293的状态等都会对包装效率有很大的影响。
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一个房产经纪人如何最快,最准找到好的房源《求助!》
我是一个房产经纪人，算是新人。。 待了时间不是太长，加入一个公司，公司规定是有个公司的房友系统，是必须要先将自己找到的房源录入系统里，才可以认可这是你的房源。。 最近几天我发现老人们多半也都是从网上找房源，可是我发现个问题，（因为我们上班九点，然后可能是网络上每天更新的房源数量少，还没找到1到2个基本上我们这一片地区的房源已...
我是一个房产经纪人，算是新人。。 待了时间不是太长，加入一个公司，公司规定是有个公司的房友系统，是必须要先将自己找到的房源录入系统里，才可以认可这是你的房源。。 最近几天我发现老人们多半也都是从网上找房源，可是我发现个问题，（因为我们上班九点，然后可能是网络上每天更新的房源数量少，还没找到1到2个基本上我们这一片地区的房源已经被录完了，然后全天的工作在网上也很少能看见新发布的房源信息，所以这点让我很没办法。。）本来还想的天真，说是将房友系统拷贝到家里，哪怕自己少休息些回家也能做，不过不太可能，系统是公司的，没办法拷贝。。
所以就想问问 有经验的前辈们是不是在这方面有好的方法指导下我。。
还有今天在网上看到有个人说 谷歌有个高级生活搜索引擎
只要设置好几乎很多房源网站的房子都可以很快的看到。。不过谷歌现在已经用不成了。。所以想问问还有没有只要的高级搜索的。。
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二手房经纪人
打电话吧孩子 每个楼盘的业主电话一个个打过去
房天下知识为您分享了一条干货
二手房经纪人
其实楼上说的都是对的，除了线下发掘之外，线上同样重要，我们10家门店80%的经纪人用的都是“房客多”他跟很多平台有合作，能瞬间抓取上面发布的个人房源，设置区域后时时推送超级方便，唯一一点就是他是收费的，费用也不算高，不知道你能不能接受，前6个小时好像是免费的，你可以先试一下。还有一个免费的，搜索公众号：房蚁，然后选择你所在的城市，设置区域后上面也是实时更新的，希望对你有所帮助。
新人一般刚进公司的时候，店长会让你去扫楼，熟悉流程和熟悉小区，小区户型，必要的谈单技巧等等！现在房产中介公司的房源90%以上都是来自网络，房源更是你争我抢，想快速找房源，建议你去使用“房客多软件”，房客多内置有房源采集的功能，专门采集各大网站业主发布的最新信息，过滤我们中介同行的房源！瞬间抓取海量的房源，竞争力瞬间提升，省时省力省钱！www.fangkeduo.net这是网站
用梵讯软件吧，网上房东的房子都能自动给你采集过来，节约不少时间，我们这边都用这个~
新人刚开始都会要求去跑盘，了解商圈的盘源，在跑盘的过程中也能挖掘到好房源，这就要用心。洗盘，就是给业主打电话获取房源。还有扫网，80%的房源来自网络，可以一个挨着一个网站去搜索业主房源，可是这样效率有点低，你可以使用房源采集软件。如果你们公司有房产中介办公管理系统易房大师的话，就方便多了，不仅可以公司办公，也可以利用易房大师的房源采集来抓取网络房源。也很方便。希望能帮到你！
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男性重多问题，求助！
状态：就诊前
希望提供的帮助：
1、我在四川大学华西医院眼科找了3位教授看眼，其中有2位是攻眼眶方向的，他们告诉我，我的Graves眼病非常轻微，不需要做手术，平时注意清洁和用点人工泪液就是了，我想做手术恢复以前的样子。（做了双眼眼眶CT，显示正常，我在2008年做了近视激光矫正术）
2、我想手术，不知道你擅长这类手术不，还有就是第二套方案我想先找上海长征医院眼科找魏锐利教授先做眼睛，等医好Graves眼病后，再找你做双眼皮，我现在左眼是双的，右眼是单的又好像是内双，如果可以不知道能不能做开眼角。
3、我在四川大学华西医院耳鼻喉科看过鼻子，有点鼻中隔偏曲，好像有点歪，想找你帮忙处理下。
4、四川大学华西口腔医院口腔颌面外科的教授帮我检查了，告诉我没有什么问题，是正常的不需要正颌，但是牙齿有一点点畸形，可以正畸也可以不正，我后来去了正畸科，正畸的教授告诉我因为我做了几颗烤瓷牙（因为以前小时候外伤，做了原牙植入，后来患了慢性根尖周炎）最好不做，如果一定要做会很受伤害。因为他告诉我，我的牙齿畸形很轻微。
5、我在四川大学华西医院整形美容外科咨询了一位知名教授，我把这些想法告诉他，他告诉我（原话）：“你长相还是可以五官端正没必要做手术”，所就这样了，看了你写的文章，感觉你是一位好医生，想来上海找你帮帮忙。
6、以前我因为一直忙于生意，没时间和精力想这些，现在事业已达到预期，马上29岁了，想请您帮我解决这些问题，还有就是我的嘴唇上嘴皮有点翘，我也想请您帮我处理下，不知道你擅长做嘴唇的手术不，余医生我是真的想解决这些问题，准备了一百万不知道够不够手术费，请问如果去上海找你，需要提前建卡预约不，麻烦您回复下，感谢！
所就诊医院科室：
四川大学华西医院、华西口腔医院 眼科耳鼻喉口腔颌面
用药情况：
药物名称：左甲状腺素钠片
服用说明：每日112.5微克顿服
&副主任医师
当然也有男的，问题比较多，还是当面来看下吧
状态：就诊前
谢谢回复，我会尽快安排时间来沪。
疾病名称：想做双眼皮以及开眼角&&
希望得到的帮助：请医生给我一些治疗上的建议
病情描述：想做双眼皮以及开眼角，需要提前预约吗 还是直接去医院即可想做双眼皮以及开眼角 大概的费用是多少
另外我眼睛的情况需要切开吗
疾病名称：双眼皮+内眼角修复&&
希望得到的帮助：希望医生可以帮忙看看眼睛
病情描述：医生，图一是我的术前照片，图二是贴双眼皮贴的样子，可以请您解答一下我现在要怎么达到和以前贴双眼皮贴形态接近一点的状态吗? 形态不能接受确实只是因为内眦赘皮的原因吗?
疾病名称：双眼皮整形&&
希望得到的帮助：眼睛距离宽是开眼角还是垫鼻子做过三点还能埋线吗
病情描述：眼睛距宽不知道开眼角还是垫鼻子做过三点还能埋线吗
疾病名称：下睑修复整形&&
希望得到的帮助：松解修复疤痕凹陷
病情描述：女,47岁。去眼袋术后一年多，去皮去脂过多造成下睑退缩疤痕凹陷。,,心情特别沉重，请求帮助！
疾病名称：刚做的双眼皮内双严重&&
希望得到的帮助：双眼皮修复手术
病情描述：前天（3.18）刚做的去皮去脂提肌双眼皮手术，术后第二天左眼就完全看不到双眼皮了，右眼也特别浅，感觉做失败了，想尽快做修复请问最好的修复时间是什么时候？
疾病名称：眼整形&&
疾病名称：眼部整形美容
眼角开大，美容&&眼角开大，美容&&
希望得到的帮助：前一年前在上海第九人民医院做的植皮，和做的眼角开大，感觉不理想，现在还可以做眼角...
病情描述：一年前在上海第九人民医院做的植皮，眼角开大，感觉不理想。
疾病名称：双眼皮修复手术&&
希望得到的帮助：请医生给我一些治疗上的建议,目前病情是否需要手术？,我预约加号您是24号，但24号我就...
病情描述：一年前割了双眼皮开了眼角，觉得没割好想修复一下
疾病名称：想问问这个是眼袋还是泪沟 要怎么处理&&
希望得到的帮助：我这个是眼袋还是泪沟 要怎么解决 内切可以吗？
病情描述：我这个是眼袋还是泪沟 要怎么解决 内切可以吗？
疾病名称：割双眼皮&&
希望得到的帮助：需要做什么样的双眼皮，以及要不要开眼角
病情描述：眼睛是单眼皮，有点内双，看起来很小，没有贴过双眼皮贴。
疾病名称：割双眼皮&&
希望得到的帮助：要手术
病情描述：五官正可是内双
想做双眼皮手术
眼睛想更大一些
做双眼皮价位是多少
疾病名称：想问问这个是眼袋还是泪沟 要怎么处理&&
希望得到的帮助：请问我这个是眼袋还是泪沟 要怎么解决呢，直接内切去脂肪不填充能达到效果吗
病情描述：请问我这个是眼袋还是泪沟 要怎么解决呢，直接内切去脂肪不填充能达到效果吗
疾病名称：双眼皮术后眼皮长肉疙瘩&&
希望得到的帮助：双眼皮术后眼皮长肉疙瘩，肉疙瘩怎样会消
病情描述：双眼皮术后两个月，眼皮上长有肉疙瘩，为什么，什么时候会消
疾病名称：双眼皮手术后其中一个眼袋发乌&&
希望得到的帮助：该怎么办呢，？能消肿吗，全切双眼皮在伤口处摸机雪霜可以吗？
病情描述：一周前的双眼皮手术后，右眼袋发乌一直不见好转，一直很黑，麻烦了
疾病名称：眼科&&
希望得到的帮助：请医生给我一些治疗上的建议
病情描述：1.14在九院吴医生做了埋线双眼皮，现在消肿后发现左眼变成单眼皮了，吴医生说要补一两针，可是他好像要休假了，年后才能做。请问您可以做手术吗？我现在眼睛一个大一个小，过年也很不方便，麻烦...
疾病名称：做全切双眼皮开内眼角半年了，突然出现红肿&&
希望得到的帮助：这种情况是什么病症啊且用什么药物
病情描述：半年前做了全切双眼皮开内眼角，感觉好的差不多了，突然一周前出现伤口发红现象，开眼角伤处发红的面积越来越大且红，还有点痒。前几天起过针眼，用了点眼药水
疾病名称：内双&&
希望得到的帮助：是否需要就诊?就诊前做哪些准备？
病情描述：眼睛容易成单眼皮 特别的内双 想要开一个自然的双眼皮 宋欣姐姐 请问 直接去总院周一下午找你面诊可以嘛
疾病名称：双眼皮&&
希望得到的帮助：全切双眼皮恢复如何？刀口处有褐色结痂能用祛疤膏吗？
病情描述：全切双眼皮一个月了，可以使用疤克吗？
疾病名称：想割双眼皮，贴了两年双眼皮贴能割吗？价格&&
希望得到的帮助：价格，是否能割
病情描述：想割双眼皮，但是贴了两年双眼皮贴，眼皮松弛，可以割吗？
疾病名称：孩子右眼上眼睑下垂&&
希望得到的帮助：现在我们应该还怎样进行护理、希望吴主任给与帮助指导。
病情描述：吴主任您好、患儿时**11月27日在您那做的手术。
曾经治疗情况和效果：
术后孩子近期感觉眼睛不舒服、眼角有充血、还有些感觉疼、我们在当地就诊、医生诊断为暴露性角膜炎、让服用维生素B2.和维...
投诉类型：
投诉说明：（200个汉字以内）
余东大夫的信息
新法双眼皮\开眼角，眼综合整形；
磨骨改脸型,下颌角缩小,颧骨整形,眼眶整形,尖嘴畸形.正颌外科。
余东，男，博士后,整形博士、
1995年大学毕业参加整形外科工作，15年专业整形美容工作，上万例的手术经验，...
整形科可通话专家
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上海第九人民医院
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上海第九人民医院
八大处整形医院
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上海第九人民医院
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