（新疆阿克苏地区第二人民医院检验科& 新疆& 阿克苏& 843000）
　　【摘要】目的：对82例结核杆菌痰培养阳性耐药菌株进行5种抗结核药物的耐药基因检测。方法：采用PCR－反向斑点杂交技术来检测耐药结核患者的痰标本临床分离株和耐药结核患者痰标本直接进行基因的突变检测。结果：对20例结核患者耐药菌株进行了5种药物的敏感实验，耐药高发种类以SM、RFP、INH为主，耐多药结核病（MDR-TB）的发生率也很高。结论：应用PCR-反向斑点杂交技术可快速检测结核分支杆菌对异烟肼(INH)、吡嗪酰胺(PZA)、链霉素(SM)、乙胺丁醇（EMB）、利福平（RFP）的耐药性，及时检测出结核突变菌株能为临床快速的治疗提供有效的治疗依据，是患者进一步治疗以及控制耐药结核病的重要手段。
　　【关键词】结核杆菌；耐药基因；反向斑点杂交
　　【中图分类号】R37&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 【文献标识码】A&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 【文章编号】（6-02
　　结核病是一种缓发的慢性传染病，由结核杆菌感染引起，可能侵入人体全身各器官，其中80%发生在肺部，其他部位也可继发感染，人与人之间呼吸道传播是此病传染的主要方式。近年来，结核发病率呈现增高趋势，主要是因为耐药和耐多药结核病出现分布广泛和传播速度加快的特点。异烟肼(INH)、吡嗪酰胺(PZA) 、链霉素(SM)、乙胺丁醇（EMB）、利福平（RFP）等是主要治疗结核病的抗结核药物，对其耐药性的研究在医学检验领域已经提升到重要地位，快速、准确地检测出结核杆菌对防治结核病具有举足轻重的意义。结核菌耐药性的出现从本质上讲是其基因发生了突变，传统测定结核杆菌耐药性需要时间较长，30～90天才能出来结果，不能在临床上及时辅助指导医师用药。本次所做研究采用PCR－反向斑点杂交技术来检测耐药结核患者的痰标本临床分离株和结核患者痰标本直接进行耐药基因的突变检测，灵敏度高，准确性强，耗时短，1～2d即能出来结果，达到初筛的目的。
　　1.资料与方法
　　1.1 临床资料
　　本次研究收集了82例痰培养阳性耐药菌株，是选自2014年6月&2015年12月在我院接受治疗的临床确诊为肺结核患者的痰标本。其中21例耐RFP，18例耐INH，13例耐SM，11例耐PZA，11例耐EMB，8例耐多药患者。
　　1.2 临床分离株DNA的制备，采用罗氏培养基的实验菌落悬于1XTE液上面，再用细菌基因组DNA提取试剂盒（亚能生物技术有限公司）提取DNA，保存备用，温度要在-20℃。
　　1.3 PCR扩增方法选用25ul的反应体系，4&dNTPs终浓度为0.2mmol／L，Bio-标记引物终浓度为0.2umol／L，扩增程序为：94℃变性I min，58℃退火1min，72℃延伸I min，循环30次，最后72℃延伸10min。扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳。紫外检测出现267bp条带。
　　1.4 进行杂交检测，将点有探针的硝酸纤维素膜装入杂交袋中，加入杂交液放置水浴锅中进行预杂交：45℃&30min。将Bio-标记引物的PCR扩增阳性产物变性：95℃&l0min，取出迅速放入冰盒中，每ml杂交液一般加l0ul变性的扩增产物，放置水浴锅中进行杂交：45℃&30min。洗膜：洗液1、45℃&3min，洗液2、45℃&3min。SA-AP：用l：1000的稀释液(洗液I)与膜在37℃作用30min。洗膜：洗液I、45℃&3min，洗液II、45℃&3min。显色：每毫升洗液I加入NBT6.6ul、BICP3.3ul混匀，将配好的显色液加入杂交袋中，闭光37℃显色5min，然后观察其结果。
　　2.结果
　　对82例结核患者耐药菌株进行了5种药物的敏感实验，其耐药率结果依次为链霉素（SM）（89/162）54.9%，RFP（85/162）52.5%，INH（59/162）36.4%，吡嗪酰胺（PZA）（38/162）23.5%，乙胺丁醇（EMB）（18/162）11.1%。其中初始耐药率分别SM（24/162）14.8%，RFP（22/162）13.6%，INH（17/162）10.5%，PZA（12/162）7.4%，EMB（7/162）4.3%，继发耐药率分别为SM（65/162）40.1%，RFP（63/162）38.9%，INU（42/162）25.9，PZA（26/162）16.0%，EMB（14/162）8.6%，由此可见，耐药高发种类以SM、RFP、INH为主，耐多药结核病（MDR-TB）的发生率也很高。
　　3.讨论
　　结核病是一种严重威胁人类健康 的传染病，是我国重点防控的疾病之一，也是全世界重点关注的公共卫生和社会问题[1]。二十一世纪是结核病和耐药结核的高发期，各地的相关研究显示，不同地区在耐药率和耐多药率上都存有差异性，所以结核分支杆菌耐药性测定则成为防治结核病的关键。绝对浓度法和比例法是经典检测方法，但是结核分枝杆菌生长慢，耐药结核分枝杆菌的生长则更加迟缓，不能在临床上及时指导医师用药，而反向点杂交技术用于检测细菌耐药的基因突变，与传统与传统方法比较具有较高的灵敏度和特异度[2]。本次研究发现复治患者出现耐药率和耐多药率要比初治患者高出2～6倍，且对链霉素（SM），利福平（RFP），异烟肼（INH），吡嗪酰胺（PZA），乙胺丁醇（EMB）的耐药性依次降低[3]。故不同区域的一线抗结核药物要因地制宜，抗结核药物的治疗方案要根据个人情况，制定出适宜的个体化治疗方案。
　　结核病治疗因为结核病耐药菌株的出现为抗结核领域增加了难题，耐药机制是治疗的关键。结核病耐药菌株是因为基因突变引发，若能及时检测出突变菌株则能为临床快速的治疗提供有效的治疗依据，是患者进一步治疗以及控制耐药结核病的重要手段。
　　【参考文献】
　　[1]金福姝.结核分枝杆菌环介导等温扩增实时荧光与反向斑点杂交检测方法的研究[D].大连医科大学，2014.
　　[2]何进才，周丹，劳诗欣，李惠贞，黄涛，单万水.PCR-反向点杂交法在结核杆菌耐药突变基因检测中的应用[J].广东医学，-397.
　　[3]钟建平，金法祥，王华钧，等.PCR-反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌及其耐药基因的突变[J].国际流行病学传染病学杂志，).
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去年患结核病，一年治愈，后复发，做检查培养，结果是耐药性的，我不知道是属于那种耐药性，能不能治愈啊
我有更好的答案
耐药性的结核治疗起来可能要会麻烦一些，但治疗结核的药物有很好多种，还有一些升级型的杀结核菌药物，这样就永远别想治好了。坚持服药一年左右、无症状时停。在后续的治疗中，千万要遵医嘱，坚持准时，有症状时吃、联合、全程的服药，不可三天打鱼两天晒网请相信现代医学是一定能治愈的
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?做肺结核耐药检查，都要住院吗
男22岁|科室：传染科综合
晋城市第三人民医院
那不一定，可以门诊留痰做结核杆菌培养加药敏的。关键是留痰结核杆菌培养。
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我病情是这样的，去年5月查出肺结核，吃了4个月的四联药，2个月的异烟井和利福平，后来医生给我开了2个月的二线药，我也不知到为什么开二线药，昨天叫我停药，
我病情是这样的，去年5月查出肺结核，吃了4个月的四联药，2个月的异烟井和利福平，后来医生给我开了2个月的二线药，我也不知到为什么开二线药，昨天叫我停药，
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这个你没有问问医生具体原因吗？有可能是效果不理想的原因。
是在疾控中心拿的药，他说那时缺药，昨天到中心医院去检查，他那里又叫我到胸科医院做耐药检查，检查后才跟据情况拿药。到了胸科医院，他叫我住院，我实在不想住院啊，该怎么办
根据你的描述考虑是病情没有控制住的，有可能是耐药了。听医生的吧，结核病尽早治疗还是有可能治愈的，
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完善患者资料：*性别：
结核杆菌属于抵抗力比较强的病原体，治疗的时候见效一般是比较慢的，一般要一个月后才...
是否需要住院要看具体病情而定，如果病情较为严重比如伴有咯血、体重严重下降、高热不...
你好，你的这个情况，目前已经确定为结核，那么就是需要给予你积极的抗结核治疗，这个...
你说的这个情况出现结核性子宫内膜炎这种情况治疗起来比较麻烦，一般需要用药时间比较...
照片并不清楚，显示左上肺有片硬，并不能确定是肺结核。这种情况需要痰检，但阳性率并...
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?肺结核做耐药抗体检查要多少钱？是抽血化验吗？
男36岁|科室：传染科综合
总参信息化部门诊部
你好，肺结核耐药抗体检查一般不是抽血化验，多是取痰液培养结核杆菌，培养出后，使用需要检查的药物，对结核杆菌进行测试，看该药物是敏感还是耐药。必要时，也可以通过血培养来培养结核杆菌。
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你好，建议你还是照一个胸片，看看胸片有没有问题。不能单纯的看PPD的结果。
你好，PPD阳性只能说你曾经感染过结核或者接种过结核疫苗，不一定就是结核病人，如果强...
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现在就可以做抗体检查。但检查抗体的目的是什么？
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向医生提问北海市结核分枝杆菌耐药监测的培养结果分析
第五轮中国全球基金结核项目,广西耐药监测项目于2010年6月开始在广西区内的30个市、县监测点展开。北海市是30个监测点之一。本文对此次耐药监测项目的培养阳性率(下称培阳率)与污染率结果进行比较分析,报道如下。1资料与方法1.1资料来源资料来源于第五轮中国全球基金结核病项目,广西耐药监测北海市监测点。2010年6月至2011年6月在本院就诊的初、复治痰涂片阳性患者。初、复治同时开始纳入,连续纳入,不挑选,不漏选。纳入对象标准:调查期间新登记的诊断的初、复治(含调查期间初次治疗失败转为复治的患者)肺结核痰涂片阳性患者是初治、复治实际纳入人数分别为60、22例。符合纳入条件每个患者保留2份涂片阳性痰标本。第一次做培养时用吸管吸了1～2mL痰液进行处理、接种。剩余痰液标本置于-20冰箱保存,以备二次培养使用。1.2痰直接涂片抗酸染色镜检法。操作方法按《痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》[1]标准要求进行。1.3痰结核菌分离培养检查采...&
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近年全球结核疫情的回升以及耐结核分枝杆菌的不断增多,引起了世界各界人士的高度重视。第5轮中国全球基金结核项目,广西耐药监测项目于2010年6月开始在广西区内的30市、县监测点展开。北海市是30个监测点之一。现对北海市的结核杆菌耐药监测药敏结果进行分析,报道如下。1资料与方法1.1一般资料资料来源于第5轮中国全球基金结核病项目,广西耐药监测北海市监测点。2010年6月至2011年9月在北海市结核病防治院就诊的初、复治痰涂片阳性患者。初、复治同时开始纳入,连续纳入,不挑选,不漏选。纳入对象标准:调查期间新登记诊断的初、复治(含调查期间初治失败,转为复治的患者)肺结核痰涂片阳性患者。在完成初治60例、复治22例的任务后,继续不间断纳入患者,最后实际纳入人数为初治240例,复治88例。1.2痰直接涂片抗酸染色镜检法操作方法按《痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》[1]标准要求进行。1.3痰结核菌分离培养和药敏采用4%氢氧化钠(NaOH)...&
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正确的标本采集、运送、保存和处理对于保证临床细菌室的工作质量至关重要,应予以高度重视[1]。痰液是气管,支气管,肺泡所产生的分泌物。正常情况下此种分泌物甚少,病理情况下如肺部炎症、肺结核、肿瘤时,痰量增加,并有性状、成分改变。唾液和鼻咽分泌物虽可混入痰内,但并非痰的组成部分[2]。下呼吸道感染用痰标本进行检验,其目的在于明确引起感染的病原菌[3],对临床有针对性地进行抗菌治疗至关重要。现对我院2011年1月至10月以来的4 064例痰培养标本留取的质量因素进行了分析,总结经验,为临床提供正确的痰标本留取信息,提高痰培养的阳性率。1资料与方法1.1患者资料4 064例均为我院2011年1月～10月的住院患者,其中呼吸内科2 131例,脑外科重症患者1 135例,肿瘤科382例,其它科416例。1.2仪器HX-21A型细菌分析仪,由合肥恒星科技有限公司提供。1.3试剂使用仪器配套原厂试剂,严格按照标准操作规程进行检验。1.4方法临床...&
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