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抗菌实验步骤方法
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【求助】抑菌试验怎么做？
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这个帖子发布于12年零93天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
分到了一系列的环二肽，文献上说有抗菌活性，该怎么做呢？纸片法怎么定量，用什么做对照，每一片加多少样品，（样品不多，得省着点用）发文章时数据怎么写？mic法是在是太麻烦了，并且样品用量太大，作不起。除了活性，环二肽还有没有别的切入点可以写。化合物太滥了，真没得写。
不知道邀请谁？试试他们
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我是搞微生物的。起始如果你只是做自己样品比较的话，只要在每个纸片上加的浓度和量一样多就行了，比如每片都是20微升或者15微升。因为不能确定你的纸片大小是多少，你可以先用水（或其他溶剂）试一下，以能将纸片全部浸湿而又不外流为理想状态。至于用什么做对照，那要看你的成分了，你是想达到什么样的效果，是跟抗生素比还是跟成熟的抗菌肽比。要是相同浓度下你的抑菌环比商品抗菌肽还大的话，你就要发了：）我以前筛选微生物抗菌肽就是这样做的。祝好运
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谢谢wenyang76 其实我只是想测个抗菌的活性发文章的时候能用上，也就是说，怎样做才是比较规范的做法，因为我是做天然产物的，对这方面不是很了解。具体一点说，就是想知道用哪几种微生物来作，用什么方法，什么指标，其实说实话就是为了发文章添个数据，增加一点文章的亮点。
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可以这样做，分两部分：①动物体内实验；选择细菌，根据细菌的致病力及其易感动物，如小鼠，注射一定量菌液，造成动物大部分死亡，在感染前或/和感染后给予所试药物，观察动物的一般行为、指标选择死亡数、死亡时间，必要时作病理解剖和细菌学检查，与对照组作比较，并进行统计学处理。 ②体外抑菌试验：方法较多，除你讲的纸片法，还可以试下直接种入法、分层移入法等需要自己摸索。
其中菌株应的选择，可优先选择常见的金色葡萄球菌、表面葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌、绿脓杆菌、伤寒杆菌等，必要时可适当增加菌种及菌株数，以了解该药的抗菌谱。阳性对照药选可选用同类中药或西药（抗菌素）进行对照。
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至于你想采用什么什么菌株来进行抑菌实验，就要看你分离的抗菌肽是想用于什么目的了。比如你想用于食品中的抑菌功能，就可以选用食品中常见***或致病菌，比如沙门菌或大肠杆菌。如果你是想用来防止感染，可以采用绿脓杆菌，金黄色葡萄球菌等代表性菌株。如果你没有确定方向，就用对你的抗菌肽最敏感的菌株，主要包括革兰阴性还是革兰阳性。至于采用什么抑菌方法，其实稀释法和K-B法等在国际上都是通用的，当然结果也就是公认的。不过就你的情况和目的，我觉得用纸片法比较好，可以拍照片（可以抑菌环大小显示优劣），还可以用抑菌环直径得到计量资料进行统计对比，还节约抗菌肽。
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我在研究生期间 主要做抗生素的药物筛选 我感觉还是平皿法比较方便，经济，细菌革兰氏阳阴各选两种，阳性菌的对照药一般用阿齐霉素，阴性菌用庆大霉素，最好参照中国药典附录
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关于丁香园抑菌试验讲义
四、抑菌试验1．Optochin敏感试验 &(1)原理：Optochin(奥普托欣)是盐酸乙基氢化羟基奎宁的商品名。对肺炎链球菌有特异抑制作用，其作用机制可能是干扰叶酸生物合成作用，而对其它链球菌则无此作用。(2)方法：用棉拭子将待检菌的肉汤培养物均匀涂布于血琼脂平板上，贴上一张含5μg奥普托欣纸片，置烛缸或二氧化碳孵箱，35℃ 孵育18~24h，观察结果。(3)结果：抑菌圈直径大于14mm为敏感，小于或等于 14mm为阴性。(4)应用：主要用于肺炎链球菌（敏感）与其它链球菌（耐药）的鉴别。2．杆菌肽敏感试验&(1)原理：A群链球菌对杆菌肽几乎是100%敏感，而其它群链球菌对杆菌肽通常耐药。故此试验可对链球菌进行鉴别。(2)方法：用棉拭子将待检菌的肉汤培养物均匀涂布于血琼脂平板上，稍干后贴一张含0.04U的杆菌肽纸片，置35℃ 孵育18~24h，观察结果。(3) 结果：抑菌圈直径大于10mm为敏感，小于10mm为耐药。(4)应用：主要用于A群与非A群链球菌的鉴别。从临床分离的菌株中有5%~15%非 A群链球菌也对杆菌肽敏感，如6%的B群链球菌、7.5%的C群链球菌和G群链球菌等。3． O/129试验(1)原理：O/129（2，4二氨基-6，7-二异丙基喋啶）能抑制弧菌属、发光杆菌属和邻单胞菌属细菌生长，而气单胞菌属和假单胞菌属细菌则耐药。(2)方法：用棉拭子将待检菌菌悬液均匀涂布于碱性琼脂平板上，将10μg/片及150μg/片的O/129诊断纸片贴于平板上，置35℃孵育18~24h，观察结果。(3)结果：出现抑菌圈者表示敏感，无抑菌圈者为耐药。(4)应用：主要用于弧菌属、邻单胞菌属与气单胞菌属的鉴别，弧菌属和邻单胞菌属菌为敏感，气单胞菌属菌为耐药。其它菌属有发光杆菌属为敏感，假单胞菌属为耐药。中国知网客户端
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香连溶液抑菌试验
& & &摘 &要：选用不同的实验方法测定香连溶液的抑菌、杀菌效果。通过实验发现，当香连溶液使用浓度为1.：256倍时为标准大肠杆菌和禽源大肠杆菌的抑菌圈分别达到7mm和11.67mm，以1：2000倍的浓度对水箱中病原微生物的杀菌率达60%以上。& & &香连溶液是北京生泰尔技术研究院在深入研究中国传统的驱瘟避秽良方的基础上，对数十种具有抗菌、抗病毒作用的中药，以体外对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和链球菌的杀菌效果为指标，通过现代科学的组方配伍，经过上百次的试验研究，最终研究得出即可内服也可外用的纯天然植物杀菌剂。& & &一、材料与方案& & &【试验材料】香连溶液、大肠杆菌、沙门氏菌标准株、禽源大肠杆菌、沙门氏菌，肉汤、培养基。& & &【试验方法】& & &1.抑菌试验：选用标准大肠杆菌、沙门氏菌与禽源大肠杆菌和禽源沙门氏菌，香连溶液采用管碟法进行，二倍稀释法进行。& & &2.环境消毒试验：香连溶液以1:200倍的使用剂量进行养鸡场进行消毒，测定消毒前、中、后舍内细菌总数变化。& & &3.饮水消毒试验：香连溶液以1:2000倍的使用剂量进行进行水体消毒。观察香连溶液对水管内水的消毒效果。& & &【试验结果】& & &1.抑菌试验情况：重复3次，得到抑菌效果，如下表：mm& & & & && & &抑菌圈达7mm以上表示有抑菌效果，抑菌圈在10--14mm为中敏，抑菌圈15-20mm为高敏，抑菌圈20mm以上为极敏。因此，从上表可以看出，当香连溶液稀释256倍时对禽源大肠杆菌和禽源沙门氏菌均有抑制作用。& & & & &&& & &2.环境消毒情况& & &选取鸡舍5个点，香连溶液以1:200倍的使用进行进行喷雾消毒，在消毒前、消毒中、消毒后进行测定细菌总数变化，每间隔15分钟测定一次。见下表：& & & & &&
& & &通过上表可以看出，香连溶液以1:200倍的使用剂量进行喷雾消毒，杀菌率平均达48.06%。& & & & &&
& & & & &&
& & & & &&
& & &3.饮水消毒情况& & &
& & &采用香连溶液1:2000倍稀释加入水箱加入方法，测定消毒液加入前、中、后细菌总数变化（每间隔15分钟检测一次），见下表：&& & & & &&
& & &从上表看出，香连溶液对饮水有较好的消毒效果，水中细菌中减少率平均为64.86%。& & & & & & & & & & &&& & &二、结论& & &1.将香连溶液稀释至256倍使用抑菌圈仍可达到7mm的抑菌效果；& & &2.香连溶液以1:200倍的使用剂量进行环境喷雾消毒，杀菌率平均达48.06%；& & &3.香连溶液以1:2000倍的使用剂量对饮水进行消毒，水中细菌减少率平均为64.86%。&& & &综上所述，本实验表明，香连在饲养使用过程以及实验中，香连溶液对细菌具有明显的抑制作用，杀菌率可达50%以上，可明显抑制菌群生长、杀灭菌群、减少环境中病原微生物的含量、净化环境、降低疾病的发生几率，具有很高的投入产出比。（北京生泰尔生物科技有限公司）
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