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质粒转染后luciferase检测 操作手册
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你可能喜欢哪位同学可以介绍下Luciferase 原理(原理) - DNA技术 - 生物秀
标题: 哪位同学可以介绍下Luciferase 原理(原理)
摘要: [哪位同学可以介绍下Luciferase 原理(原理)] 哪位同学可以介绍下Luciferase 原理,或者查什么书？非常感谢！ 关键词:[原理]……
哪位同学可以介绍下Luciferase 原理,或者查什么书？非常感谢！
回复自然界中广泛分布着发光有机体，其中包括细菌、真菌、鱼、昆虫等。在这些发光有机体中催化生物发光反应的各种酶都称之为荧光素酶（Luciferases），底物则命名为荧光素（Luciferin）。自1986— 1987 年首次被当作报告基因使用以来，荧光素酶基因已成为目前运用最广泛的报告基因之一。尽管来自不同物种的荧光素酶及底物存在有很大的差异，但有一个共同点，即在生物发光反应体系中均需发生氧化反应。它通过两个步骤使底物荧光素发生氧化作用，而产生发光反应，此反应是ATP 依赖性的。杂环荧光素首先腺苷化，然后通过氧化脱羧作用，产生AMP、CO2，并通过激活的荧光素中间产物发射光。将反应所需的试剂与含有荧光素酶的细胞裂解液混合即会产生一种迅速衰减（在一秒钟内）的黄绿色闪光（发射峰560 nm），这种光信号可用配备了便于迅速混合反应物的自动注射装置的荧光检测仪（Luminometer）进行检测，也可用标准的液闪仪对光信号进行记录。当底物过量时，发光量的总值与样品的荧光酶活性成正比，因此，可对荧光素酶报告基因的转录进行间接估计。荧光素酶易被蛋白酶降解，在转染的哺乳动物(mammalian)细胞中的半衰期约为3 小时。荧光素酶报告系统为启动子活性的检测提供了一个敏感、快速、非放射性的检测方法。荧光素酶报告基因检测试剂盒(Luciferase Reporter Gene Assay Kit)，是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)。然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。 通过荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在luciferase的上游或其他适当的地方，构建成报告基因质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。回复非常感谢，建议加分！！回复muhaha回复来学习。
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ChIP、RIP、RNA_pull-down、EMSA、Luciferase原理
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官方公共微信图8Luciferase片段缺失分析实验流程；图9Luciferase定点突变分析实验流程；荧光素酶分析可应用于启动子研究中分析顺式作用元件；双荧光素酶报告基因测试，是结合萤火虫和海洋腔肠荧；
Luciferase片段缺失分析实验流程
Luciferase定点突变分析实验流程
荧光素酶分析可应用于启动子研究中分析顺式作用元件和反式作用因子、药物筛选、siRNA和miRNA筛选、分泌途径及蛋白定位报告基因检测、活细胞的实时动态研究、信号转导通路分析、难转染的细胞（包括干细胞和原代细胞）的研究、RNA剪接研究。
双荧光素酶报告基因测试，是结合萤火虫和海洋腔肠荧光素酶先进的共报告基因测试技术。在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时，通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。双荧光素酶报告基因测试系统,结合pRL载体系统，表达第二个报告基因海洋腔肠荧光素酶，在单管中进行双荧光素酶报告基因测试，快速、灵敏、简便。其应用广泛，可同时分析多个调控元件、同时分析多个信号转导通路、单次筛选一个以上的靶点（包括脱靶效应、分析两个或多个通路之间的相互作用）。
包含各类专业文献、生活休闲娱乐、外语学习资料、行业资料、幼儿教育、小学教育、93ChIP、RIP、RNA pull-down、EMSA、Luciferase原理等内容。　
　new tech--RNA pull down protein(RNA IP方法)_生物学_自然科学_专业资料。...(RIP) is the RNA analog of the more well-known ChIP application (... 　RNA-pull down试剂盒 20164说明书_生物学_自然科学_专业资料。Pierce? Magnetic RNA-Protein Pull-Down Kit 说明书 20164 thormo (英语水平有限 其他材料要求 ?... 　RNA pull down、RNA-RIP(RNA Binding Protein Immunoprecipitation)、 ChIRP-seq(Chromatin Isolation by RNA Purification)等方法检测与 lncRNA 结合的 DNA、 RNA、 ... 　EMSA 实验技术及方法简介实验简介凝胶迁移或电泳迁移率实验 (EMSA-electrophoretic ...SPR传感器原理简介17页 2下载券 ChIP、RIP、RNA pull-do... 7页 1下载券 ... 　4、 1ML RIP buffer(加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞。 5、 超声破碎细胞 25 个循环左右。 6、 13000rpm 离心 10min,弃沉淀。 RNA Pulldown 1、 体外转录 (...关注今日：58 | 主题：493525
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【求助】luciferase实验
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这个帖子发布于2年零141天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
实验结果为什么组4比组3荧光信号增高，P&0.05，并且组6与组5增高得更明显？EXCEL表中实验数据分析3中为什么组2与组1相比也有统计学差异，是空载体也会出现统计学差异？是什么原因？文件名对应的实验分组：分组序号合同对应分组名称实验组13’UTR-NC +miRNA-NC实验组23’UTR-NC+miRNA实验组33’UTR+miRNA-NC实验组43’UTR+miRNA实验组53’UTR-MU+miRNA-NC实验组63’UTR-MU+miRNA
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吉凯公司的luciferase实验有没有实验结果相似的？
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你好，我想请问一下，你的实验分组中3’UTR-MU是什么意思？3’UTR-NC是空质粒吗？我是新手，不太懂
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是mutation的意思嘛？
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cheff0412 edited on
同问，为什么第六组比第五组信号强
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3’UTR-MU是3’UTR的突变质粒，是在3’UTR序列中与miRNA的结合位点上做定点突变，3’UTR-NC是3’UTR的阴性对照。
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央宗兰泽 3’UTR-MU是3’UTR的突变质粒，是在3’UTR序列中与miRNA的结合位点上做定点突变，3’UTR-NC是3’UTR的阴性对照。请问这个突变有没有什么原则可以遵守？文献上没有看到自己做的基因的，要自己摸索。
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