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关于基因测序引物的设计
本人从NCBI网站上查到了目的基因的序列，想用Primer5设计一对测序引物，要求能测出该基因的全部序列。请问应该注意些什么？还有以什么为模板？以该基因为模板测不出其完整序列。求各位大虾帮帮忙！不甚感激！
原核的。关键是设计引物的时候以什么为模板。如果以该基因为模板设计引物，只能测出该基因中间的部分序列
原核的那就好办了，直接拿一端的PCR引物测序到另一端，或者两个引物同时进行，然后拼接即可，剩下的两头测不到的可以直接在中间设计测序引物后反向再测一个就好了。这个你只要告诉公司你要测全长序列，他们就清楚了。
那测序结果是A还是A加上部分引物
用软件设计的话只能在这段序列的中间。如果要保证一条在上游，一条在下游，是不是只能自己设计、设计好之后用软件分析一下？
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