细胞运动和迁移的检测技术及原理_医药保养_中国百科网
细胞运动和迁移的检测技术及原理
    
一、transwell试验transwell试验，又称博伊登室技术，是目前应用最为广泛的细胞运动相关检测技术。博伊登小室由内室及外室两部分构成，其中内室的底部覆盖具有不同孔径(3～12μm)微孔的薄膜。使用该方法检测细胞运动能力时，通常将低血清浓度的细胞混悬液置于内室中，而在外室中加入适量含有较高血清浓度的细胞培养基。当细胞发生迁移时，细胞首先经水平运动到达微孔处，进而经微孔向室外进行垂直方向运动并到达内室底膜的外侧。到达试验终点后，取出内室将迁移至底膜外侧的细胞固定并染色后于显微镜下进行观察和定量分析。二、二维平面内细胞运动的检测方法1.划痕试验 是检测细胞运动能力的另一种常用的方法。该方法通常需借助较为尖锐的器械(如移液器的吸管端等)在已经融合成片的单细胞层上划出无细胞的区域，再通过显微镜观察划痕周边细胞向划痕区域内的迁移情况。在一定时间内划痕宽度的变化可一定程度上反映待测细胞的运动能力。2.细胞排斥区检验 该方法与划痕试验的原理类似。将硅胶柱等阻碍物事先置于细胞培养板内。常规种植细胞，待细胞融合后取出阻碍物以形成边界清晰的无细胞区域。借助于显微镜等技术可定时或实时观察细胞向无细胞区域内运动的情况。3.栅栏式检验 将高分子化学材料、玻璃或者金属材质的环形“栅栏”状阻碍物置于细胞培养板中，将细胞种植于该环形“栅栏”内。待细胞融合成单层细胞层后取出阻碍物，借助于显微镜等技术定时或实时观察细胞向周边无细胞区域运动的情况。4.微球载体检测 将特殊材质的微球表面均匀包被待测细胞后置于细胞培养板内孵育。到达规定时间后取出微球载体，对培养板内存留的细胞进行固定、染色及显微镜下定量分析。5.细胞球迁移检测 将待测细胞预处理使之形成细胞球。将己形成的细胞球置于培养板中，继续维持适宜的细胞培养条件。培养板底物被细胞所覆盖面积的变化可间接反映细胞的运动能力。6.微流体小室迁移检测 该方法中的由两个小室连接而成。在一侧小室种植细胞形成单细胞层后再将含有趋化因子等的培养基加入另一侧小室。使用盖玻片封闭两侧小室的顶部。当细胞发生运动时，可经两侧小室的连接处向另一侧运动。借助显微镜等可观察分析连接处的细胞数，从而间接分析细胞的运动状况。7.毛细管迁移检测 该方法是检测白细胞运动的经典方法之一。将毛细管内的血液标本离心后可见到分层现象。将分层后的标本静置，白细胞层中的细胞可缓慢的从聚集层中游离出来向血浆层运动。借助于显微镜测量器，可以记录细胞迁移的距离。8.琼脂糖白细胞迁移试验 该方法是检测白细胞迁移能力的经典方法之一。将细胞培养板经琼脂糖预处理后可形成三个保持一定距离的圆孔状区域。将细胞种植于中间孔后，在两侧空白区域内分别加入含有不同成分的培养基。若细胞向一侧或两侧运动则需穿过琼脂糖，其在琼脂糖中移动的距离反映了细胞的运动能力。9.单细胞运动检测 该方法的原理简单。将细胞种植于胶体金预处理的细胞培养板中。由于胶体金在显微镜下成像为透光性较差的灰暗颗粒，而细胞定植的区域由于没有胶体金颗粒而显现为明亮的视野。因此，细胞运动可反映为显微镜下明亮视野的出现和扩大，借助于显微镜等可对此变化进行实时或定时的观察并计算明亮视野面积的动态改变。三、依附于活细胞工作站的荧光显微镜记录技术活细胞工作站由高级自动倒置显微镜、活细胞长时间孵育系统、Z轴微光切系统(数码共聚焦系统)、单色仪、高灵敏冷CCD、图像软件工作站组成，用于培养状态下细胞动态的研究。借助于荧光显微镜技术可以实时记录荧光标记的活细胞的动态情况，该技术可更为准确地追踪细胞运动的轨迹以及距离。特别是扫描共聚焦显微镜的出现，使得在亚细胞水平上研究细胞的运动成为可能。该系统可自动聚焦、单细胞追踪、多位点成像，特别是在研究细胞骨架的代谢动力学、细胞骨架3D结构重建及空间定位等方面具有独特的优势。高内涵筛选是新近的一种高通量筛选技术。该技术在保持细胞结构和功能完整性的前提下，同时检测被筛样品对细胞形态、生长、分化、迁移、凋亡、代谢途径及信号传导等方面的影响，从而在单一试验中获取大量与基因、蛋白质及其他细胞成分相关的信息。该系统的原理与活细胞工作站极为类似，借助于荧光显微成像技术和白光成像系统可在短时间内对96孔板或384孔板内的样本进行运动轨迹和规律的实时记录和分析。
收录时间:日 00:09:51 来源:北纳生物 作者:匿名
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