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关于TH17检测
1.做这方面的检测，需要细胞培养，是不是这些步骤都需要无菌呢？绝对无菌吗 ？
2.细胞培养是不是一定要使用RPMI1640,并含有小牛血清？
1、培养时当然需要无菌，否则细胞状态受到明显影响，你的结果还能准确吗？
2、细胞培养用什么样的培养基，是需要看你的细胞种类而定，比如贴壁细胞，就不是用1640培养基了，可以用DMEM等培养基。
培养后的细胞做Th17检测时的步骤，如刺激细胞分泌Th17因子，破膜，染色等步骤是可以不需要无菌的。
赶着，内容很好的
我怎么细胞内染色，然不出来，不知道问题处在那里呢，是不是破膜洗液很重要，啊用什么稀释比较好，用pbs可以么
我也检测Th17，一直做不出~不知道原因在哪~也很想知道可能的问题在哪~希望高手能予以指教~
xx_ss 发表于
我也检测Th17，一直做不出~不知道原因在哪~也很想知道可能的问题在哪~希望高手能予以指教~ ...
可以按照这个图片的样式，把图发上来，讨论讨论，对于流式的问题，图片很重要：
我测Th17 表面抗原能测出来
如果你培养的细胞真的有分泌IL-17等细胞因子的话，一般按说明书操作都能标记上的，测不出来的原因很可能和你的细胞状态有关，一是细胞没活化好，活化的T细胞镜下看会变大变圆的，折光性好，如果不是这样，当然检测不出来IL-17的分泌的，这个时候你再继续做就浪费试剂了，还不如重新养一版状态好的细胞，你可以试试调整TGF-b、IL-6等刺激因子的量，检测前8h到12h内加PMA、Ionomycin和Brefeldin A后再测看看吧
非常感谢分享您的经验，奖励2颗流星，请查收。&
我不知道你说的Th17检测是指哪方面？是在体外诱导分化？还是直接刺激后测细胞因子？
如果是诱导分化，可能时间要几天，就得无菌；如果是刺激后检测细胞因子，一般也不会超过6小时，可以不无菌，但建议加上双抗。
一般血液来源的悬浮细胞都用1640
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什么是无血清培养基？与普通培养基有什么区别？
1.可避免无血清批次间的质量变动，提高细胞培养和实验结果的重复性。2.避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染。3.避免血清组分对实验研究的影响。4.有利于体外培养细胞的分化。5.可提高产品的表达水平并使细胞产品易于纯化。无血清缺点：1.细胞在无血清培养基中易受某些机械因素和化学因素的影响，培养基的保存和应用不如传统的合成培养基方便。2.成本较高。3.针对性很强，一种无血清培养基仅适合某一类细胞的培养。
（来源：上海一研生物科技有限公司）
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加了血清和双抗的细胞培养基能冻藏吗
细胞培养基配多了，血清和双抗都加了。马上细胞房要熏蒸，停用20天，再加上暑假。请问加了双抗和血清的培养基能冻藏吗？有1640，还有DMEM.
另外，已经打开包装的未加血清的培养基需要冻藏吗？能放多久？
那一般加了血清后最好多少天之内用完呢？
最好是半个月内吧，你加血清的培养基可以少配点，取45ml培养基在加5ml血清，放在灭菌好的50ml离心管里。用完的话在重新配也不麻烦。
我的意思是我全培养基配多了，用不了！能不能冻起来？
不过你倒是提醒了我，请问冻存液里加双抗好呢，还是不加双抗好？
我们这边条件一般，所以一般培养基里双抗和两性霉素都加的
冻存液加什么双抗呢？你怕DMSO对细胞影响不大？
因为以前冻存液都是用7:2：1的比例配的。70%的全培养基里原本就加过双抗。我从来没有考虑过这个问题。
那下次我可以考虑单独配冻存液，不用已经配好的加过双抗的养细胞的全培养基！
多的全培养基可以冻起来，在-20度比4度好些，最好以后使用全培养基的时候少配点，一般是半个月内最好使用完，其实时间长了也没太大问题，避免污染就好。加双抗冻存的问题，原来我听说是不好，可是我自己冻存的有时候加了，没出现问题，你可以冻多点，然后有2支用全血清和DMSO的，其他都用含双抗的冻，回来复苏看看，如果双抗有影响，不是还有全血清冻的嘛，
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