细胞培养上清液ELSA实验遇到的问题(上清液,细胞培养,血清,细胞因子) - 细胞实验 - 生物秀
标题: 细胞培养上清液ELSA实验遇到的问题(上清液,细胞培养,血清,细胞因子)
摘要: [细胞培养上清液ELSA实验遇到的问题(上清液,细胞培养,血清,细胞因子)] 最近要检测细胞培养上清液中的某些细胞因子的含量。请问一般要用多少上清液做ELISA，是200微升吗？另外为了避免血清的影响，处理的时候是否要换成无血清 的培养基？另外上清液能在-20度保存多久？（因为想收集很多标本后再一起用ELISA检测）。请做过这方面实验的同志回帖，谢谢！ 关键词:[上清液 细胞培养 血清 细胞因子 培养基 含量]……
最近要检测细胞培养上清液中的某些细胞因子的含量。请问一般要用多少上清液做ELISA，是200微升吗？另外为了避免血清的影响，处理的时候是否要换成无血清 的培养基？另外上清液能在-20度保存多久？（因为想收集很多标本后再一起用ELISA检测）。请做过这方面实验的同志回帖，谢谢！
回复1、目前市面上有很多细胞因子测定的ELISA盒子卖，一般都是96孔板，96孔板每孔容积是370ul，所以每孔比较合适的反应体积应为100-300ul，检测时加样体积最好在这个范围内。另外，由于ELISA方法有一定的线性范围（说明书一般都有），超过这个范围就不准确了，所以最好让你的标本内的待测物质的浓度在这个线性范围内。先做做预试验，看看目的细胞因子的浓度多高，如果很高，超出线性范围，就稀释一下；如果太低，就浓缩一下。　　2、血清有无影响，视不同细胞因子而定了，如果目的细胞因子在牛血清本来就有，那肯定有影响了，如果没有就影响不大了。用无血清培养基当然最好，能彻底排除血清的干扰，但细胞很可能因为没有油水就不大长了，你可以试着用无血清培养基养养看。如果细胞长不好，就用同样的培养液做对照吧。　　3、理论上讲，当然是标本准备好立马检测最准确，冻融容易使一些不稳定的蛋白质降解，还会影响蛋白质的反应活性。如果你的标本一时凑不齐，那就放低温冰箱吧，-80℃，放1年问题不大。-20℃可能放的时间就短多了，可能会影响你的实验结果。　　4、提醒一下，检测时注意记录不同标本的情况，如这组标本的细胞浓度、总细胞数、培养时间、药物干预时间等等，这样统计结果才能比较，可别忘了！回复　　1、目前市面上有很多细胞因子测定的ELISA盒子卖，一般都是96孔板，96孔板每孔容积是370ul，所以每孔比较合适的反应体积应为100-300ul，检测时加样体积最好在这个范围内。另外，由于ELISA方法有一定的线性范围（说明书一般都有），超过这个范围就不准确了，所以最好让你的标本内的待测物质的浓度在这个线性范围内。先做做预试验，看看目的细胞因子的浓度多高，如果很高，超出线性范围，就稀释一下；如果太低，就浓缩一下。　　2、血清有无影响，视不同细胞因子而定了，如果目的细胞因子在牛血清本来就有，那肯定有影响了，如果没有就影响不大了。用无血清培养基当然最好，能彻底排除血清的干扰，但细胞很可能因为没有油水就不大长了，你可以试着用无血清培养基养养看。如果细胞长不好，就用同样的培养液做对照吧。　　3、理论上讲，当然是标本准备好立马检测最准确，冻融容易使一些不稳定的蛋白质降解，还会影响蛋白质的反应活性。如果你的标本一时凑不齐，那就放低温冰箱吧，-80℃，放1年问题不大。-20℃可能放的时间就短多了，可能会影响你的实验结果。　　4、提醒一下，检测时注意记录不同标本的情况，如这组标本的细胞浓度、总细胞数、培养时间、药物干预时间等等，这样统计结果才能比较，可别忘了！非常感谢.回复山东小汉
你好，我的实验也要用ELISA检测细胞培养上清液中的某些细胞因子的含量，因为买进口的盒，比较贵。我想请教一下如何做预实验比较合适，因为理论上每次做ELISA都要做标准曲线，而且每个样品做复孔，这样一来一块96孔板做不了几份标本了，不知道你有什么好的方法可以教教我，不胜感激回复山东小汉
你好，我的实验也要用ELISA检测细胞培养上清液中的某些细胞因子的含量，因为买进口的盒，比较贵。我想请教一下如何做预实验比较合适，因为理论上每次做ELISA都要做标准曲线，而且每个样品做复孔，这样一来一块96孔板做不了几份标本了，不知道你有什么好的方法可以教教我，不胜感激　　你提的这个问题的确是我们经常遇到的，经费有限，不象老外那么财大气粗，既想多做复孔，或多重复几次，又想少花money，真的很郁闷，个人觉得也没什么好办法。　　你可以去找找国内有无类似的盒子，或者有无国产抗体，若价钱比进口盒子便宜，就自己做ELISA也行，不过我也不知道有无这个可能，你去查查，看看划算与否。　　关于复孔的个数，我觉得最少最少也得3个吧，如果你标本很多的话，就必须多买盒子了，没有省的可能。要知道好文章都是用钱培出来的。　　关于标准曲线，理论上的确是每做一次都要做一次标准曲线，但实际上如果经费实在不允许，盒子质量又过硬，酶联仪也不错，实验结果非常稳定的话，也可以做一次标准曲线，我见不少人这么干过，这样省是省了点，但文章就不好写了。不严谨，不提倡这样。回复山东小汉： “关于复孔的个数，我觉得最少最少也得3个吧，如果你标本很多的话，就必须多买盒子了，没有省的可能。要知道好文章都是用钱培出来的。” 本人做过很多进口ELISA试剂盒，通常都要求做复孔，但基本只是标准品做复孔，发现复孔的差异很小，所以现在都不做复孔了。　　“关于标准曲线，理论上的确是每做一次都要做一次标准曲线，但实际上如果经费实在不允许，盒子质量又过硬，酶联仪也不错，实验结果非常稳定的话，也可以做一次标准曲线，我见不少人这么干过，这样省是省了点，但文章就不好写了。不严谨，不提倡这样。” 标准曲线是每次都要做的，因为反应时间、温度和试剂保存的原因，每次的OD值会有较大的差异，对结果的影响是很大的，而且普通大多不能自己输入标准或应用保存的标准，如果不做标准只能测OD值。回复谢谢你，山东小汉！
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