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“工程菌”是指
A．用物理或化学方法诱发菌类自身某些基因得到高效表达的菌类细胞株系B．用遗传工程的方法，把相同种类不同株系的菌类通过杂交得到新细胞株系C．用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系D．从自然界中选取能迅速增殖的菌类
题型：单选题难度：中档来源：同步题
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据魔方格专家权威分析，试题““工程菌”是指[]A．用物理或化学方法诱发菌类自身某些基因得到高效..”主要考查你对&&DNA重组技术的基本工具&&等考点的理解。关于这些考点的“档案”如下：
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DNA重组技术的基本工具
DNA重组技术的基本工具：1、基因工程的概念：
2、基本工具：（1）“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）①来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。②功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。③结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。即&当限制性内切酶作用于特定的DNA时，把这段序列沿着特定的切点切开的这个过程分两种情况：a、沿着中轴线切口（即沿着DNA双链中对应的磷酸二酯键）切开，得到的就是两个平末端；b、在中轴线的两端切口切开，得到的就是两个黏性末端。例如：EcoRⅠ限制性内切酶就可以识别G/AATTC的DNA序列，然后在G和A间切开，得到的就是两个黏性末端（之间可以根据碱基互补配对原则重组）限制酶的切口不都是一长一短的，一长一短的叫黏性末端，一样长的叫平末端。“粘性末端”在高中教材中也作“黏性末端”。如图：（2）“分子缝合针”——DNA连接酶
&（3）“分子运输车”——载体①载体具备的条件：能在受体细胞中复制并稳定保存；具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入；具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。②最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。③其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒知识点拨：1、限制酶识别的序列的特点：呈现碱基互补对称，无论是奇数个碱基还是偶数个碱基，都可以找到一条中心轴线，如图，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。如以中心线为轴，两侧碱基互补对称；以为轴，两侧碱基互补对称。2、获取目的基因和切割载体时使用同种限制酶，目的是产生相同的黏性末端。3、获取一个目的基因需限制酶剪切两次，共产生 4个黏性末端或平末端。 4、限制酶切割位点的选择必须保证标记基因的完整性，以便于检测。
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7278172880835981047576947073270急!谁知道“基因工程菌”怎么保藏?谁能告诉我“基因工程菌”怎么保藏?它的保藏方法是什么? 主要说下：1、保藏时候的温度限制2、保藏时间（一次保藏在确保菌种不死的情况下能多长时间）3、适宜的菌种4、优缺点! 说一种就可以了~我们《酶制剂》的作业! 谢谢啦~~~~不懂了的不要乱说呀~ 写错了,老师要批我的...
请问基因工程菌的保藏方法是什么? 越详细越好! 谢谢! 看见大家说了这么多的保存方法,我说一个我在实验室里自己用的方法：将菌用LB培养过夜（该加什么如抗生素等别忘了哈）,取14毫升（这个得根据你的离心机来定夺了）3000转离心,然后加3-4 毫升菌种保存液（甘油的量不多,5%而已,你也可以再加大一点）重悬,就行了.再用封口胶封一下,然后放在-20度里.我用这种方法保存的多种菌（包括基因工程菌）,一年的时间里都还没有出过问题.值得一提的是,你保存用的菌种管最好是新的,而且煮过最好,这样可以除去一些有机溶剂对菌的影响. 再说一句哈： 如果你是长期保存用,那么最好放在冰箱里不要经常拿出拿进的.如果是公用的冰柜,经常打开,那么就务必放在冰柜底部. rosewood wrote:请问基因工程菌的保藏方法是什么? 越详细越好! 谢谢!提供经典的菌种保存方法,供学习与交流.1.短期保存菌种,使用琼脂穿刺即可,也为菌种的运输提供方便.2.若长期保存,深低温保藏方法（cryopreseration)较好,特别是对于那些携带有不稳定行状（如质粒、转座插入子和重复子）的基因工程菌株来说,更是如此.保存的菌种,复苏时需注意：确保冷冻的培养物不融化,用这种方法储存的菌种可被传代培养和存活几十年.如果超低温冰箱发生故障,只要把菌种放入另一个超低温冰箱储存即可.尽管存活数会减少,但是大部分菌株都可耐受几次反复冻融.一些实验室使用70%的DMSO为冷冻保护剂,大多数实验室还是喜欢使用甘油. 下面我把微生物保存的常用方法和各方法的操作步骤、各保藏法的应用范围及优缺点提供给各位,谢谢!微生物具有容易变异的特性,因此,在保藏过程中,必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态,才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力. 低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素,所以,菌种保藏方法虽多,但都是根据这三个因素而设计的.一. 保藏方法大致可分为以下几种：1．传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用）,培养后于4—6℃冰箱内保存.2．液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用.3．载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛.4．寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法.病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏.5．冷冻保藏法可分低温冰箱（-20—-30℃,-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法.6．冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）.有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害.保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型.保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等.二. 常用的器材所要保存的微生物；肉膏蛋白胨斜面培养基,灭菌脱脂牛乳,灭菌水,化学纯的液体石蜡,甘油,五氧化二磷,河沙,瘦黄土或红土,冰块、食盐,干冰,95％酒精,10％盐酸,无水氯化钙；灭菌吸管,灭菌滴管,灭菌培养皿,管形安瓿管,泪滴形安瓿管（长颈球形底）,40目与 100目筛子,油纸,滤纸条（0．5×1．2cm）,干燥器,真空泵,真空压力表,喷灯,L形五通管,冰箱,低温冰箱（-30℃）,液氮冷冻保藏器.三. 各操作步骤、各保藏法的应用范围及优缺点1．斜面低温保藏法将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上,待菌充分生长后,棉塞部分用油纸包扎好,移至2—8℃的冰箱中保藏.保藏时间依微生物的种类而有不同,霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2—4个月,移种一次.酵母菌两个月,细菌最好每月移种一次.此法为实验室和工厂菌种室常用的保藏法,优点是操作简单,使用方便,不需特殊设备,能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异与污染杂菌等.缺点是容易变异,因为培养基的物理、化学特性不是严格恒定的,屡次传代会使微生物的代谢改变,而影响微生物的性状；污染杂菌的机会亦较多.2．液体石蜡保藏法（1）将液体石蜡分装于三角烧瓶内,塞上棉塞,并用牛皮纸包扎,1．05kg/cm2>,121．3℃灭菌30分钟,然后放在40℃温箱中,使水汽蒸发掉,备用.（2）将需要保藏的菌种,在最适宜的斜面培养基中培养,使得到健壮的菌体或孢子.（3）用灭菌吸管吸取灭菌的液体石蜡,注入已长好菌的斜面上,其用量以高出斜面顶端1cm为准（图Ⅶ-12）,使菌种与空气隔绝.（4）将试管直立,置低温或室温下保存（有的微生物在室温下比冰箱中保存的时间还要长）.此法实用而效果好.霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2年以上不死,酵母菌可保藏1—2年,一般无芽孢细菌也可保藏1年左右,甚至用一般方法很难保藏的脑膜炎球菌,在37℃温箱内,亦可保藏3个月之久.此法的优点是制作简单,不需特殊设备,且不需经常移种.缺点是保存时必须直立放置,所占位置较大,同时也不便携带.从液体石蜡下面取培养物移种后,接种环在火焰上烧灼时,培养物容易与残留的液体石蜡一起飞溅,应特别注意.3．滤纸保藏法（1）将滤纸剪成0．5×1．2cm的小条,装入0．6×8cm的安瓿管中,每管1—2张,塞以棉塞,1．05kg/cm2>,121．3℃灭菌30分钟.（2）将需要保存的菌种,在适宜的斜面培养基上培养,使充分生长.（3）取灭菌脱脂牛乳1—2ml滴加在灭菌培养皿或试管内,取数环菌苔在牛乳内混匀,制成浓悬液.（4）用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内,使其吸饱,再放回至安瓿管中,塞上棉塞.（5）将安瓿管放入内有五氧化二磷作吸水剂的干燥器中,用真空泵抽气至干.（6）将棉花塞入管内,用火焰按图Ⅶ-13熔封,保存于低温下.（7）需要使用菌种,复活培养时,可将安瓿管口在火焰上烧热,滴一滴冷水在烧热的部位,使玻璃破裂,再用镊子敲掉口端的玻璃,待安瓿管开启后,取出滤纸,放入液体培养基内,置温箱中培养.细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏,前两者可保藏2年左右,有些丝状真菌甚至可保藏14—17年之久.此法较液氮、冷冻干燥法简便,不需要特殊设备.4．沙土保藏法（1）取河沙加入10％稀盐酸,加热煮沸30分钟,以去除其中的有机质.（2）倒去酸水,用自来水冲洗至中性.（3）烘干,用40目筛子过筛,以去掉粗颗粒,备用.（4）另取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土,加自来水浸泡洗涤数次,直至中性.（5）烘干,碾碎,通过100目筛子过筛,以去除粗颗粒.（6）按一份黄土、三份沙的比例（或根据需要而用其他比例,甚至可全部用沙或全部用土）掺合均匀,装入10×100mm的小试管或安瓿管中,每管装1g左右,塞上棉塞,进行灭菌,烘干.（7）抽样进行无菌检查,每10支沙土管抽一支,将沙土倒入肉汤培养基中,37℃培养48小时,若仍有杂菌,则需全部重新灭菌,再作无菌试验,直至证明无菌,方可备用.（8）选择培养成熟的（一般指孢子层生长丰满的,营养细胞用此法效果不好）优良菌种,以无菌水洗下,制成孢子悬液.（9）于每支沙土管中加入约0．5ml（一般以刚刚使沙土润湿为宜）孢子悬液,以接种针拌匀.（10）放入真空干燥器内,用真空泵抽干水分,抽干时间越短越好,务使在12小时内抽干.（11）每10支抽取一支,用接种环取出少数沙粒,接种于斜面培养基上,进行培养,观察生长情况和有无杂菌生长,如出现杂菌或菌落数很少或根本不长,则说明制作的沙土管有问题,尚须进一步抽样检查.（12）若经检查没有问题,用火焰熔封管口,放冰箱或室内干燥处保存.每半年检查一次活力和杂菌情况.（13）需要使用菌种,复活培养时,取沙土少许移入液体培养基内,置温箱中培养.此法多用于能产生孢子的微生物如霉菌、放线菌,因此在抗生素工业生产中应用最广,效果亦好,可保存2年左右,但应用于营养细胞效果不佳.5．液氮冷冻保藏法（1）准备安瓿管用于液氮保藏的安瓿管,要求能耐受温度突然变化而不致破裂,因此,需要采用硼硅酸盐玻璃制造的安瓿管,安瓿管的大小通常使用75×10mm的,或能容1．2mm液体的.（2）加保护剂与灭菌保存细菌、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的细胞时,则将空安瓿管塞上棉塞,1．05kg/cm2,121．3℃灭菌15分钟：若作保存霉菌菌丝体用则需在安瓿管内预先加入保护剂如10％的甘油蒸馏水溶液或10％二甲亚砜蒸馏水溶液,加入量以能浸没以后加入的菌落圆块为限,而后再用1．05kg/cm2>,121．3℃灭菌15分钟.（3）接入菌种将菌种用10％的甘油蒸馏水溶液制成菌悬液,装入已灭菌的安瓿管；霉菌菌丝体则可用灭菌打孔器,从平板内切取菌落圆块,放入含有保护剂的安瓿管内,然后用火焰熔封.浸入水中检查有无漏洞.（4）冻结再将已封口的安瓿管以每分钟下降1℃的慢速冻结至-30℃.若细胞急剧冷冻,则在细胞内会形成冰的结晶,因而降低存活率.（5）保藏经冻结至-30℃的安瓿管立即放入液氮冷冻保藏器（图Ⅶ-14）的小圆筒内,然后再将小圆筒放入液氮保藏器内.液氮保藏器内的气相为-150℃,液态氮内为-196℃.（6）恢复培养保藏的菌种需要用时,将安瓿管取出,立即放入38—40℃的水浴中进行急剧解冻,直到全部融化为止.再打开安瓿管,将内容物移入适宜的培养基上培养.　此法除适宜于一般微生物的保藏外,对一些用冷冻干燥法都难以保存的微生物如支原体、衣原体、氢细菌、难以形成孢子的霉菌、噬菌体及动物细胞均可长期保藏,而且性状不变异.缺点是需要特殊设备.6．冷冻干燥保藏法（1）准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造,形状可用长颈球形底的,亦称泪滴型安瓿管（图Ⅶ-15）,大小要求外径6—7．5mm,长105mm,球部直径9—11mm,壁厚0．6—1．2mm.也可用没有球部的管状安瓿管.塞好棉塞,1．05kg/cm2>,121．3℃灭菌30分钟,备用.（2）准备菌种,用冷冻干燥法保藏的菌种,其保藏期可达数年至十数年,为了在许多年后不出差错,故所用菌种要特别注意其纯度,即不能有杂菌污染,然后在最适培养基中用最适温度培养,使培养出良好的培养物.细菌和酵母的菌龄要求超过对数生长期,若用对数生长期的菌种进行保藏,其存活率反而降低.一般,细菌要求24—48小时的培养物；酵母需培养3天；形成孢子的微生物则宜保存孢子；放线菌与丝状真菌则培养7—10天.（3）制备菌悬液与分装以细菌斜面为例,用脱脂牛乳2ml左右加入斜面试管中,制成浓菌液,每支安瓿管分装0．2ml.（4）冷冻冷冻干燥器有成套的装置出售,价值昂贵,此处介绍的是简易方法与装置,可达到同样的目的.将分装好的安瓿管放低温冰箱中冷冻,无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2>）酒精液或干冰丙酮液,温度可达-70℃.将安瓿管插入冷冻剂,只需冷冻4—5分钟,即可使悬液结冰.（5）真空干燥为在真空干燥时使样品保持冻结状态,需准备冷冻槽,槽内放碎冰块与食盐,混合均匀,可冷至-15℃.装置仪器如图Ⅶ-16,安瓿管放入冷冻槽中的干燥瓶内.抽气一般若在30分钟内能达到93．3Pa（0．7mmHg）真空度时,则干燥物不致熔化,以后再继续抽气,几小时内,肉眼可观察到被干燥物已趋干燥,一般抽到真空度26．7Pa（0．2mmHg）,保持压力6—8小时即可.（6）封口抽真空干燥后,取出安瓿管,接在封口用的玻璃管上,可用L形五通管（图Ⅶ-17）继续抽气,约10分钟即可达到26．7Pa（0．2mmHg）.于真空状态下,以煤气喷灯的细火焰在安瓿管颈中央进行封口.封口以后,保存于冰箱或室温暗处.此法为菌种保藏方法中最有效的方法之一,对一般生活力强的微生物及其孢子以及无芽胞菌都适用,即使对一些很难保存的致病菌,如脑膜炎球菌与淋病球菌等亦能保存.适用于菌种长期保存,一般可保存数年至十余年,但设备和操作都比较复杂. 对于一般的大肠杆菌等基因工程菌,我们室常用的方法是：取原种100微升,在3ml适当培养基（2*YT,LB等）,加好抗生素,37度摇菌过夜；次日取50%甘油（已高压）与培养的菌液按1：1比例混匀（专用的菌种冻存管）,—20度保存.每次使用于冰上操作,动作要快.另外小量分装冻存,避免反复冻融影响细菌质量. 菌种是一种重要的生物资源,菌种保藏是重要的微生物基础工作.菌种保藏就是利用一切条件使菌种不死、不衰、不变,以便于研究与应用. (一)常规保藏方法 2 原理 菌种保藏的方法很多.其原理却大同小异,不外乎为优良菌株创造一个适合长期休眠的环境,即干燥、低温、缺乏氧气和养料等.使微生物的代谢活动处于最低的状态,但又不至于死亡,从而达到保藏的目的.依据不同的菌种或不同的需求,应该选用不同的保藏方法.一般情况下,斜面保藏、半固体穿刺,石蜡油封存和砂土管保藏法较为常用,也比较容易制作. 3 材料 3.1菌株 待保藏的适龄菌株斜面 3.2培养基 肉汤蛋白胨斜面,半固体及液体培养基. 3.3 试剂 10%HCl无水氯化钙、石蜡油、五氧化二磷. 3.4 器具 用于菌种保藏的小试管(10*100毫米)数支、5毫升无菌吸管、l毫升无菌吸管等、灭菌锅、真空泵、干燥器、冰箱无菌水、筛子(40目、120目)、标签、接种针、接种环、棉花、牛角匙等等. 4 流程 斜面保藏→半固体穿刺保藏→石蜡油封存→砂土管保藏 5 步骤 5.1斜面保藏 5.1.1流程 标记试管→接种→培养→保藏 5.1.2步骤 5.1.2.1贴标签 取无菌的肉汤蛋白胨斜面数支.在斜面的正上方距离试管口2-3厘米处贴上标签.在标签纸上写明接种的细菌菌名、培养基名称和接种日期. 5.1.2.2斜面接种 将待保藏的细菌用接种环以无菌操作在斜面上作划线接种. 5.1.2.3培养 置37恒温箱中培养48小时. 5.1.2.4保藏 斜面长好后,直接放入4℃的冰箱中保藏.这种方法一船可保藏三个月至半年. 5.2半固体穿刺保藏 5.2.1流程 标记试管→穿刺接种→培养→保藏 5.2.2 步骤 5.2.2.1贴标签 取无菌的半固体肉汤蛋白等直立柱数支,贴上标签,注明细菌菌名、培养基名称和接种日期. 5.2.2.2穿刺接种 用接种针以无菌方式从待保藏的细菌斜面上挑取菌种,朝直立柱中央直刺至试管底部,然后又沿原线拉出. 5.2.2.3培养 置37恒温箱中培养48小时. 5.2.4保藏 半固体直立柱长好以后,放入4℃的冰箱中保藏.这种方法一般可保藏半年至一年. 5.3石蜡油封存 5.3.1流程 标记试管→接种→培养→加石蜡油→保藏 5.3.2 步骤 5.3.1标记 同5.1.2.1 5.3.2接种 同5.1.2.2 5.3.3培养 同5.1.2.3 5.3.4加石蜡油 无菌操作下将5毫升石蜡油到培养好的菌种上面,加入的量以超过斜面或直立柱1厘米高为宜. 5.3.5保藏：石蜡油封存以后,同样放入4℃冰箱中保存.也可直接放在低温干燥处保藏.这种方法保藏期一般为一至二年. 5.4砂土管保藏 5.4.1 流程 制沙土管→灭菌→制菌液→加样→干燥→保藏 5.4.2 步骤 5.4.2.1制作沙土管 选取过40目筛的黄砂,酸洗,再水洗至中性,烘干备用；过120目筛子的黄土备用；按1份土加4份砂的比例均匀混合后,装入小试管,装量1厘米左右. 5.4.2.2灭菌 加压蒸汽灭菌,直至检测无菌为止. 5.4.2.3制备菌液 取3毫升无菌水至待保藏的菌种斜面中,用接种环轻轻刮下菌苔.震荡制成菌悬液. 5.4.2.4加样 用1毫升吸管吸取上述悬液0.1毫升至砂土管,再用接种环拌匀. 5.4.2.5干燥 把装好菌液的砂土管放入干燥器或同时用真空泵连续抽气,使之干燥. 5.4.2.6保藏 干燥后的砂土管可直接放入冰箱中保藏；也可以用石蜡封住棉花塞后放冰箱中保藏. （二）冷冻干燥保藏法 2　原理 冷冻干燥保藏菌种法可克服简单保藏方法的不足.利用有利于菌种保藏的—切因素,使微生物始终处于低温、干燥、缺氧的条件下,因而它是迄今为止最有效的菌种保藏法之一. 3　材料 3.1　菌株 待保藏的各种菌种. 3.2试剂 2% HCl；牛奶. 3.3器具 安瓿管、标签、长滴管、脱脂棉、干冰、离心机、冷冻真空装置、高频电火花器. 4 流程 备安瓿管→备脱脂乳→制菌悬液→分装→预冻→真空干燥→保藏→活化 5步骤 5.1准备安瓿管 安瓿管先用2%HCl浸泡,再水洗多次,烘干.将标签放入安培管内,管口塞上棉花,灭菌备用. 5.2制备脱脂乳 用鲜奶经处理或使用脱脂奶粉配兑脱脂牛奶,灭菌,并做无菌试验后备用. 5.3制菌悬液 将无菌牛奶直接加到待保藏的菌种斜面内,用接种环将菌种刮下,轻轻搅乱使其均匀地悬浮在牛奶内成悬浮液. 5.4分装 用无菌长滴管将悬浮液分装入安瓿管底部,每支安培管的装量约为0.9毫升.(一般装入量为安瓿管球部体积的1／3) 5.5预冻 将分装好的安瓿管在-25至-40之间的干冰酒精中进行预冻1小时；或在冰箱冷冻室进行预东. 5.6真空干燥 预冻以后,将安瓿管放入真空器中,开动真空泵进行干燥. 5.7封管 封管前将安瓿管装入歧管；真空度抽至0.01毫米汞拄后,再用火焰熔封,封好后,要用高频火花器检查各安瓿管的真空情况.如果管内呈现灰蓝色光,证明保持着真空.检查时高频电火花器应射向安瓿管的上半部. 5.8保藏 做好的安瓿管应放置在低温避光处保藏. 5.9活化 如果要从中取出菌种恢复培养,可先用75%酒精将管的外壁消毒,然后将安瓿管上部在火焰上烧热,再滴几滴无菌水,使管子破裂.在用接种针直接挑取松散的干燥样品,在斜面接种. 6结果 6.1简述真空冷冻干燥保藏菌种的原理. 菌种是一种重要的生物资源,菌种保藏是重要的微生物基础工作.菌种保藏就是利用一切条件使菌种不死、不衰、不变,以便于研究与应用.
---------我也不懂,帮你查了一些,从上述文中自己找找吧http://web.degree-distance.net/dxyz-b-99-t-345518
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