药学职称考试中药药理学辅导：清热药
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& &频道为了帮助即将参加的考生顺利复习，搜集整理了相关知识供大家参考，希望可以帮助考生顺利通过考试!　　清热药对免疫功能的影响较为复杂。一方面，多数清热药能提高机体的免疫功能，增强机体的抗病能力。如黄连、黄芩、蒲公英、金银花可促进淋巴细胞的转化;丹皮、赤芍还可增强体液免疫功能。另一方面，某些清热药又可抑制异常的免疫反应。如能对抗过敏反应，产生免疫抑制作用。& &以上是药学职称考试辅导资料，祝大家考试顺利 !
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5月14、15、21、22日“清热、解毒、散结”类中药抗乳腺癌活性成分的筛选及其药理机制研究--《上海交通大学》2014年博士论文
“清热、解毒、散结”类中药抗乳腺癌活性成分的筛选及其药理机制研究
【摘要】：乳腺癌为妇女最常见的恶性肿瘤，其发病率和致死人数居女性恶性肿瘤的首位。传统医学认为：“热者寒之”、“结者散之”的清热解毒散结法，是乳腺癌和乳腺增生的中医治疗的基本法则之一。在检索查阅大量文献资料的基础上，我们发现：蒲公英（28次）、甘草（121次）、瓜蒌（80次）、黄药子（32次）、柴胡（149次）、木香（34次），等六味“清热、解毒、散结”类中药在治疗乳腺癌和乳腺增生的复方中经常使用，因此我们推测这6味药中很可能含有抗乳腺癌活性成分。
在本研究中，我们建立了一种活性为导向的分段筛选平台，即：半制备高效液相色谱（Semi-preparative HPLC–UV）分段、人乳腺癌MCF-7细胞毒性筛选、超高效液相色谱串联飞行时间质谱仪（UPLC-Q–TOF MS）检测。利用该平台我们快速筛选了上述六味中药的潜在抗乳腺癌活性成分，并从木香挥发油（VOSL）中筛选鉴定出两个潜在的抗乳腺癌活性成分：木香烃内酯（Cos）和去氢木香内酯（Dehy）。有趣的是，我们首次发现这两个化合物在体外对MCF-7细胞的增殖具有协同抑制效应。
中药口服后经体内肠道菌群或肝脏代谢，往往会产生一些活性的代谢产物。利用血清药理学的筛选方法，能同时筛选具有活性的中药原药成分和代谢产物。基于血清药理学的方法，结合活性为导向的分段筛选平台，我们发现：11,13-Dihydrotaraxinic acid、Taraxinic acidβ-D-glucoside和Ainslioside是蒲公英中潜在的抗乳腺癌活性成分。其中11,13-Dihydrotaraxinic acid以原药的形式展现其潜在的抗乳腺癌效果，而Taraxinic acid β-D-glucoside和Ainslioside则需要通过肠道菌群介导的β-糖苷键水解，分别产生活性代谢产物Taraxinic acid和Germacranolide acid后才能发挥其抗癌活性。我们建立的这种筛选策略，不仅能消除传统血清药理学中血清内源性成分的干扰，而且还能直观地将中药的化学成分和药理活性对应起来，使得中药活性成分的筛选更加迅速可靠。
利用异源移植的裸鼠乳腺癌模型，我们评价了Dehy、Cos-Dehy及VOSL的体内抗乳腺癌效果，并利用代谢组学的方法研究了异源移植裸鼠乳腺癌的病理机制以及Cos-Dehy和VOSL的药理机制。结果表明：Cos-Dehy和VOSL均能显著抑制MCF-7异源乳腺瘤的生长，而Dehy的抑制作用不明显。基于GC-MS和LC-MS的代谢组学技术，我们从乳腺癌裸鼠模型血清和尿液中共发现了118个差异代谢物，这些代谢物主要涉及到五条代谢通路，即：糖酵解/丙酮酸代谢、缬氨酸/亮氨酸/异亮氨酸代谢、苯丙氨酸/酪氨酸代谢、甾体激素代谢、不饱和脂肪酸代谢，其中，后两条代谢通路在其它癌症中未见报道，可能与乳腺癌特异相关。根据这些代谢物在模型组与健康组中的差异倍数以及ROC曲线的面积，我们进一步筛选出7个潜在异源乳腺癌病理标志物，即：花生四烯酸、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸、亚油酸、双高γ亚麻油酸、20α-羟基孕酮和皮质酮。利用这七个生物标志物综合判别健康组和乳腺癌模型组时，其判断的灵敏度和特异性均达到100%，同时，我们还发现VOSL和Cos-Dehy治疗后，乳腺癌模型组中这几个标志物的表达水平明显恢复，向健康组靠近。因此，这七个生物标志物可以为乳腺癌的临床诊断和药效评价研究提供有价值的线索。VOSL和Cos-Dehy均能干预乳腺癌裸鼠异常的苯丙氨酸/酪氨酸代谢通路、甾体激素代谢通路以及不饱和脂肪酸代谢通路。此外，VOSL还能调节乳腺癌模型鼠异常的能量代谢通路（包括糖酵解/丙酮酸代谢、三羧酸循环），使裸鼠的体重和活力明显优于其它治疗组，因此，VOSL和Cos-Dehy均具有应用于乳腺癌临床治疗的前景。
基于TiO2-MOAC磷酸化肽富集技术和iTRAQ标记定量技术，我们研究了Cos、Dehy、Cos-Dehy、VOSL干预下，MCF-7细胞的磷酸化蛋白组变化，并结合细胞周期实验，揭示它们抗乳腺癌的药理机制。结果表明：VOSL中的主要抗乳腺癌活性成份为Cos和Dehy，其联合抗乳腺癌的分子机制为：通过AKAP蛋白和cAMP共同介导的蛋白激酶A（PKA, Protein kinase A）活性下调来阻滞MCF-7乳腺癌细胞周期S期，干扰细胞骨架构建、诱导细胞凋亡。
由于Cos和Dehy是VOSL的主要抗癌活性成分，且体内外实验均表明联合用药的效果更佳，因此我们以大鼠为受试动物，研究了Cos和Dehy联合静脉注射给药后的药代动力学和代谢产物。结果表明：Dehy的表观分布容积与清除率要高于Cos的表观分布容积与清除率，而Dehy的血浆最大峰值浓度则低于Cos的血浆最大峰值浓度。同时，这两个化合物的药代动力学特征也有共性，即：尽管两个化合物都有较高血浆蛋白结合率，却有相对较大的表观分布容积和相对短的半衰期。根据这些药代特点，我们推测，这两个化合物应该是“高摄取药物”，因此，我们建议，将这两个化合物以缓/控释剂型给药可能更有理利于维持血药浓度水平，发挥药理活性。我们从大鼠含药血浆、尿液和粪便中鉴定出十个代谢产物。Cos在体内以二相代谢为主，而Dehy在体内则以一相代谢为主。两个化合物也有相同的代谢途径，如：脱氢（Two sequential desaturations）和乙酰半胱氨酸连接（N-acetylcysteine conjugation）。这些代谢产物的信息对这两个药物的研究开发，如结构修饰、药理、毒理等方面的研究提供依据。
【关键词】：
【学位授予单位】：上海交通大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2014【分类号】：R285【目录】：
摘要7-11ABSTRACT11-21符号说明21-24第一章 绪论24-55 1.1 课题背景介绍24-41
1.1.1 乳腺癌的概述24-25
1.1.2 乳腺癌的病理特征、临床分期及分子分型25-27
1.1.3 乳腺癌与乳腺增生的关系27-29
1.1.4 植物药抗肿瘤29-30
1.1.5 中药活性成分筛选的方法30-31
1.1.6 代谢组学介绍31-32
1.1.7 乳腺癌代谢组学研究进展32-35
1.1.8 代谢组学数据分析和处理技术35-37
1.1.9 磷酸化蛋白质组学的研究现状37-41 1.2 课题研究的意义与内容41-44
1.2.1 本课题研究的意义41-42
1.2.2 本课题研究的内容42-44 参考文献44-55第二章 一种快速筛选中药抗乳腺癌活性成分的平台55-71 2.1 引言55 2.2 材料、试剂与仪器55-59
2.2.1 仪器55-56
2.2.2 材料与试剂56
2.2.3 实验方法56-59
2.2.3.1 中药水提取物和甲醇提取物的制备56-57
2.2.3.2 木香分段提取物的制备57
2.2.3.3 木香乙酸乙酯提取段和正己烷提取段的 HPLC 分析57-58
2.2.3.4 木香乙酸乙酯提取段的 HPLC 分段58
2.2.3.5 HPLC 活性段的活性成分鉴定58-59
2.2.3.6 细胞培养和增殖实验59 2.3 结果与讨论59-68
2.3.1 六种中药醇提物或水提物对 MCF-7 细胞增殖的影响59
2.3.2 木香分段提取物对 MCF-7 细胞增殖的影响59-61
2.3.3 木香乙酸乙酯段和正己烷段的 HPLC-UV 分析61
2.3.4 木香乙酸乙酯段的 HPLC 分段对 MCF-7 细胞增殖的影响61-62
2.3.5 段Ⅱ化学成分的鉴定62-65
2.3.6 木香烃内酯和去氢木香内酯体外协同抑制 MCF-7 细胞增殖65-67
2.3.7 快速筛选中药抗乳腺癌活性成分的策略67-68 2.4 本章小结68-70 参考文献70-71第三章 一种基于血清药理学的中药抗乳腺癌活性成分分段筛选平台71-96 3.1 引言71-72 3.2 材料、试剂与仪器72-73
3.2.1 仪器72
3.2.2 材料与试剂72-73 3.3 实验方法73-76
3.3.1 口灌药物的制备73
3.3.2 给药与取血73-74
3.3.3 含药血清或血浆的 HPLC-UV 分析74
3.3.3.1 样品前处理74
3.3.3.2 色谱条件74
3.3.4 细胞培养和增殖实验74-75
3.3.5 蒲公英含药血清的 HPLC 分段75-76
3.3.5.1 样品前处理75
3.3.5.2 色谱条件75
3.3.5.3 分段收集75-76
3.3.6 UPLC–Q-TOF MS 系统分析活性 HPLC 段76
3.3.6.1 样品前处理76
3.3.6.2 色谱条件76
3.3.6.3 质谱条件76 3.4 结果与讨论76-93
3.4.1 血清药理学血样选择76-78
3.4.2 血清药理实验条件的优化78
3.4.3 含药血清对 MCF-7 细胞增殖的影响78-80
3.4.4 复溶含药血清与常规含药血清对 MCF-7 细胞增殖的影响80-81
3.4.5 蒲公英含药血清 HPLC 分段及其活性评价81-82
3.4.6 活性段的 UPLC–Q-TOF MS 分析82-91
3.4.7 基于血清药理学的中药活性成分筛选策略91-93
3.4.8 两种筛选策略的比较93 3.5 本章小结93-94 参考文献94-96第四章 木香挥发油治疗 MCF-7 异源乳腺癌的代谢组学研究96-132 4.1 引言96-97 4.2 材料、试剂与仪器97
4.2.1 仪器97
4.2.2 材料与试剂97 4.3 实验方法97-103
4.3.1 MCF-7 乳腺瘤异源移植97-98
4.3.2 给药和取样98-99
4.3.3 尿样前处理及 GC GC TOF/MS 分析99
4.3.4 血样前处理及 GC TOF/MS 分析99-100
4.3.5 尿样前处理及 UPLC–Q-TOF/MS 分析100
4.3.6 血样前处理及 UPLC–Q-TOF/MS 分析100-101
4.3.7 质控样本101
4.3.8 数据分析101-102
4.3.9 差异代谢物鉴定102-103 4.4 实验结果103-118
4.4.1 典型谱图103-108
4.4.2 表观药效评价108-110
4.4.3 MCF-7 异源瘤裸鼠与健康鼠的代谢物差异110-111
4.4.4 基于代谢谱的药效评价111-118 4.5 讨论118-126
4.5.1 木香挥发油抗 MCF-7 异源乳腺癌118-119
4.5.2 MCF-7 异源乳腺癌的生物标志物119-122
4.5.3 MCF-7 异源乳腺癌的异常代谢通路122-125
4.5.4 VOSL 或 Cos-Dehy 干预 MCF-7 异源乳腺癌裸鼠的异常代谢通路125-126 4.6 本章小结126-128 参考文献128-132第五章 木香挥发油活性成分作用下人乳腺癌 MCF-7 细胞的磷酸化蛋白质组学和细胞周期研究132-172 5.1 背景介绍132-134 5.2 材料、试剂与仪器134-135
5.2.1 仪器134
5.2.2 材料134-135
5.2.3 试剂135 5.3 实验方法135-141
5.3.1 TiO_2磁珠富集磷酸化多肽的效果评价135-137
5.3.1.1 TiO_2磁珠富集标准磷酸化肽段的特异性和回收率135-136
5.3.1.2 TiO_2磁珠富集标准磷酸化肽段的富集倍数136
5.3.1.3 TiO_2磁珠富集标准蛋白中的磷酸化肽段136-137
5.3.2 细胞培养、给药与全蛋白提取137
5.3.3 胰酶消化137-138
5.3.4 磷酸化多肽富集138
5.3.5 iTRAQ 标记138
5.3.6 除盐138-139
5.3.7 HPLC-UV 系统的分析条件139
5.3.8 Nano-LC/UHR-TOF MS 系统的分析条件139
5.3.9 数据分析139-140
5.3.10 细胞周期分析140-141 5.4 结果141-156
5.4.1 TiO_2磁珠富集标准磷酸化肽段的效果141
5.4.2 TiO_2磁珠富集标准蛋白中磷酸化肽段的效果141-145
5.4.3 给药组与对照组间的差异表达蛋白145-149
5.4.4 不同给药组共同调节蛋白分析149-152
5.4.5 四个给药组所有差异蛋白的综合分析152-153
5.4.6 Cos、Dehy、Cos-Dehy 和 VOSL 对 MCF-7 细胞周期的影响153-156 5.5 讨论156-163 5.6 本章小结163-165 参考文献165-172第六章 木香烃内酯和去氢木香内酯在大鼠体内的代谢研究172-190 6.1 引言172-173 6.2 材料、试剂与仪器173
6.2.1 仪器173
6.2.2 材料与试剂173 6.3 实验方法173-176
6.3.1 给药和取样173-174
6.3.2 药代动力学实验的样品前处理174
6.3.3 代谢产物研究的样品前处理174-175
6.3.3.1 血浆样品前处理174
6.3.3.2 尿样前处理174-175
6.3.3.3 粪样前处理175
6.3.4 HPLC-UV 的分析条件175
6.3.5 UPLC–Q-TOF/MS 的分析条件175-176
6.3.6 药代动力学分析的方法学考察176
6.3.7 药代动力学参数分析176 6.4 结果与讨论176-187
6.4.1 色谱图176-177
6.4.2 方法学考察结果177-179
6.4.3 药代动力学分析179-181
6.4.4 Cos 和 Dehy 的 MSE 碎裂方式分析181-182
6.4.5 Cos 和 Dehy 的代谢产物鉴定182-187 6.5 本章小结187-188 参考文献188-190第七章 研究总结与展望190-195 7.1 研究工作总结190-192 7.2 全文结论192-193 7.3 论文创新点193-194 7.4 研究展望194-195附录 1195-201附录 2201-203附录 3203-207致谢207-208博士期间已发表和待发表的论文208-209
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中药理学习题11
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　　金银花药理作用　　1、抗菌作用　　在体外对多种细菌(伤寒杆菌、副伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌，霍乱弧菌以及球菌、链球菌、肺炎双球菌、脑膜炎球菌等)均有抑制作用。对各种细菌的敏感性，各家报告有些不同。一般而言，对沙门氏菌属，作用较强，尤其对伤寒及副伤寒杆菌在体外有较强的抑制;高浓度时对志贺菌属均可抑制，低浓度时则对志贺氏痢疾杆菌作用较强，舒氏痢疾杆菌较次，弗氏痢疾杆菌几无效。亦有谓金银花提取液对金黄色葡萄球菌有效，而对大肠杆菌则否。对慢性中某些常见细菌(肺炎球菌、甲型链球菌、卡他球菌)也有抑菌作用(平板法)。另在体外能使敏感细菌发生菌体膨大的形态变化，而革兰氏染色的性质不受影响。高压消毒，可显著影响其抗菌效力。煎煮后作用亦减弱。其真正有效成分，迄未提出，早年报告为一种不挥发的油状物，其水溶性很高，性质较稳定，冷藏液可维持3～4周，仍有抑菌作用。据云叶较花有更强的抗菌作用，尚待研究。　　金银花在体外对人型结核杆菌有某些抑制作用。在对小鼠接种人型结核杆菌后的实验治疗中，金银花亦能较显著的减轻肺脏病变，但器官的直接涂片及培养仍能查到结核菌。其水浸剂(1：4)在体外对若干真菌有轻度抑制作用。煎剂在体外对皮肤真菌的作用虽很小，但在含金银花(30%)的培养基上，某些真菌呈现不同程度的绿晕现象，其意义尚待阐明。水煎剂在体外对钩端螺旋体的抑菌作用强于醇提取物，弱于黄连或荔枝草。它还能延缓呼吸道病毒对细胞的病变作用。银翘散合剂在体外对PR株有灭活作用;但在鸡胚体内，对病毒繁殖无任何影响。　　2、其他作用　　给禁食大鼠服大量胆甾醇，如同时服金银花(2.5克/公斤)，则血胆甾醇水平较对照组为低，故金银花似能减少对胆甾醇的吸收。流浸膏对家兔及犬的呼吸、血压及尿量均无明显影响，呼吸幅度略有增大，血压微有变动，但不一致;口服或注射，吸收皆不完全;对局部有刺激作用。毒性很小，小鼠皮下注射之半数致死量为53克/公斤。另据报道，金银花热水浸剂对大鼠幽门结扎性有轻度预防作用，如与猪肾、、人参、芡实及真珠等组成合剂，则预防作用更强;上述合剂的提取物，对无直接作用，但能减轻患癌动物肝脏中过氧化氢酶及胆碱酯酶活性的降低。（图片来源：CFP）
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