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食品中的沙门氏菌新种、大肠杆菌和其它肠道细菌
微生物学方法
生物化学试剂盒鉴定方法
&&&&使用普通生化试剂盒进行常规的生化试验41-5(a)－(f)和41-25〔沙门氏菌新种〕是建立在分析学家实验室得出的充足证据，即生化试剂盒与生化试验的联系并可用来进行生化试验41-5(a)－(f)和41-25。普通生化试剂盒不能用来代替41-25，41-28所描述的血清学试验。普通生化试剂盒能用来对食品中分离的其它肠道细菌进行假定鉴定。 A 原理 &&&&本方法使用的试剂盒中含有接种物，通过敏感的指示系统在4h内检测接种物中产生的酶。试剂盒中包含浸有试剂的滤纸盘，用试剂检测微生物产生的特异酶和/或代谢产物。这些试剂包括被微生物酶〔细菌酶〕作用的底物和检测系统。检测系统能与代谢终产物发生反应产生快速可见的颜色变化。精确的底物和/或检测试剂提供到每个盘子上，这样在盘子接种之前化学性质相反的物质就会被分开。包括的试验有：Voges-Proskauer〔VP〕，硝酸盐还原酶，苯丙氨酸脱氨基酶，H2S，吲哚，鸟氨酸脱羧酶，赖氨酸脱羧酶，丙二酸利用，尿酶，七叶苷脱氢，β-半乳糖苷酶和阿拉伯糖发酵，阿东糖醇发酵，肌醇发酵和山梨醇发酵。 B 方法 &&&&$T结果/出现一致^1^/95%可靠范围〔大约〕$$沙门氏菌新种/98.8/97.2－100$$大肠杆菌/97.7/94.6－100$$其它肠道菌^2^/84.6/81.2－88.0$T1 与常规的生化试验一致。$$2 肠道杆菌正确地鉴定到属而不是沙门氏菌和大肠杆菌。 C 仪器、培养基和试剂 &&&&使用蒸馏水或去离子水。 C.a 平板计数琼脂〔标准方法琼脂〕斜面 &&&&5g胰蛋白胨，2.5g酵母浸汁，1g葡萄糖，15g琼脂。将各成分悬浮于1L水中，加热使其完全溶解。分装16×150mm试管，每支8－10ml，高压蒸气灭菌；121℃，15min。培养基凝固前，将试管放到斜面位置从而形成充足斜面。 C.b 生理盐水 &&&&溶解8.5gNaCl于1L H2O中，最后pH应为6±0.5。不要使用含有防腐剂的盐如含有迭氮化钠或一些细菌生长抑制因子的盐。盐水不必灭菌，但必须新鲜制备。 C.c 20%KOH溶液 &&&&慢慢将20gKOH颗粒加到60ml水中，搅动使之溶解，加水定容至100ml。该溶液不用时将盖子拧紧。注意：试剂有防腐蚀性，取用时应小心。 C.d 试管 &&&&16×100mm或更大，一支试管用于一个鉴定样品的分离。 C.e 吸管 &&&&1ml或5ml血清管，用棉塞。 C.f Pathotec细胞色素氧化酶试验〔可相当的产品〕。 &&&& C.g MICRO-ID鉴定试剂盒和手册。 &&&& C.h 支架 &&&&支持试剂盒。 D 接种准备 &&&& D.1 &&&&从琼脂培养基上选择分离的菌落，将菌落转移到平板计数琼脂斜面上。于35℃培养18－24h。注：培养物培养超过30h，将出现假阴性结果。 D.2 细胞色素氧化酶试验取自斜面上长菌部分。 &&&& D.3 &&&&吸约3.5ml生理盐水(b)加到16×100mm试管中，对每个分离物进行鉴定。将斜面上长菌部分接到装有生理盐水的试管中，使细菌悬液的密度等于McFarland No.2〔试管可不必灭菌〕。 E 一般说明 &&&&试验试剂盒的成分和试验程序在如何使用MICRO-ID鉴定系统中已说明。可能得出不满意的结果，应作预备试验。 F 接种和单位读数 &&&& F.1 &&&&打开密闭的、防潮铝盖，移出试验单位。不要移动盖着试验孔的清晰的塑料带子。 F.10 &&&&使用MICRO-ID鉴定手册(g)对每个分离检测5至8个数字；记录分离物鉴定结果。 F.2 记录样品号和由盖子右边上提供的所需其它信息。 &&&& F.3 打开盖子让单位平放在实验台上。 &&&& F.4 吸取约0.2ml菌悬液加到单位上方的接种孔中。 &&&& F.5 盖上盖子将浅盘竖直放在支架上。 &&&&〔确保菌悬液与所有底物盘接触。不要弄湿检测圆盘。〕 F.6 35－37℃培养4h，不要使用CO2培养箱。 &&&& F.7 &&&&培养4h后，将每个单位平放在实验台上，打开盖子，只加2滴〔约0.1ml〕2.0%KOH溶液到VP试验接种孔。不要向其它任何培养孔加KOH。盖上盖子，将浅盘子竖直，确保KOH流下进入VP试验溶液。 F.8 &&&&顺时针旋转单位约90度，这样最初5个孔中上面圆盘变温。将浅盘竖直，轻敲底部，使夹在上部圆盘下的悬液流出。通过这步确保反应小孔1－5内每个上部圆盘变湿。 F.9 &&&&除VP试验外，根据下列表所列颜色变化，立即观察反应结果阳性或阴性。让VP孔中颜色延展10min，观察结果。观察圆盘上部颜色，记录最初5个试验；观察菌悬液颜色，记录剩余10个试验。根据系统提供的编码形式，记录每个生化试验的结果。 G 证实〔只对沙门氏菌〕 &&&&对假定鉴定的沙门氏菌新种进行证实，见41-26C。$$$T试验/阳性反应/阴性反应$$VP/粉到红色/浅黄色$$硝酸盐还原酶/红色/无色到浅粉色$$苯丙氨酸脱氨基酶/绿^1^/浅黄色$$H2S/裼到黑色^2^/白色$$吲哚/粉到红色/浅黄到桔黄$$鸟氨酸脱羧酶/紫到红紫色/黄褐色到黄色$$赖氨酸脱羧酶/紫到红紫色/黄褐色到黄色$$丙二酸利用/绿到蓝/黄色$$尿酶/桔黄到红紫/黄色$$七叶苷水解/褐到黑色/无颜色变化或棕色$$β-半乳糖苷酶/浅黄到黄色/无色$$发酵：/ / $$阿拉伯糖/黄到黄褐/红紫到紫$$阿东糖醇/黄到黄褐/红紫到紫$$肌醇/黄到黄褐/红紫到紫$$山梨醇/黄到黄褐/红紫到紫$T 1 在苯丙氨酸脱氨基酶试验中，菌悬液出现任何绿色都表明为阳性反应。$$ 2 H2S阳性反应可有很大变化：在检测圆盘底部从薄的黑线到圆盘全部变黑。一般在圆盘变黑之前观察结果。
总部电话：8
江苏办：025- 客服电话：1,6 展会合作：9
版权声 明&2016大肠杆菌vp试验_百度知道
大肠杆菌vp试验
枯草杆菌红色更深，这是什么原因，但是过了几分钟，都变成红黑色，都成红色？为什么从沸水浴中取出后大肠杆菌和枯草杆菌的vp试验结果应该是怎么样的
我有更好的答案
能变红，说明是阳性就OK了，变红黑可能有其他的反应。
不影响结果吧。
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> MR-VP培养基
MR-VP培养基Methyl Red Voges Proskauer Broth
用途：用于大肠杆菌的甲基红和VP试验(SN标准)
配方：（g/L）
月示胨 葡萄糖 磷酸氢二钾 pH值6.9&±&0.2&&
7.0 5.0 5.0 25℃
&&&&&& 月示胨提供碳氮源、维生素和生长因子；葡萄糖为可发酵的糖类；磷酸氢二钾是缓冲剂；氯化钠维持均衡的渗透压。 &&&&&& 甲基红（MR）试验：肠杆菌科的细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，生成甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸。大肠杆菌分解丙酮&酸，次生的酸类较多，pH为4.5或更低，甲基红呈现红色（阳性）。在产气杆菌的培养液中一部分丙酮酸变为中性的乙酰甲基甲醇，生成的酸类较少，pH在5.4以上，甲基红呈现桔黄色（阴性）。&& &&&&&& 乙酰甲基甲醇生成试验（V―P试验）：细菌发酵葡萄糖生成丙酮酸，某些细菌可使丙酮酸脱羧形成乙酰甲基甲醇。在碱性溶液中，乙酰甲基甲醇可在空气中氧化成二乙酰（丁二酮）。二乙酰再与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物。试验中加入α―萘酚是作催化剂，使反应的颜色加深，提高反应的敏感性。
&&&&&&& 称取本品&1.7g,加热溶解于100ml&蒸馏水中,分装试管，&121℃高压灭菌&15&分钟备用。
质量控制：
&在36±1℃培养48小时。
产气肠杆菌
MR -,& V-P +
大肠埃希氏菌
MR +,& V-P -
李斯特氏菌
铜绿假单胞菌
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