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疏肝健脾法促进实验性胃溃疡大鼠生长因子表达的分子机制研究
目的:胃溃疡(GU)是一种全球性常见的消化系统疾病，多由于幽门螺杆菌(HP)、药物及饮食因素、应激精神因素等原因导致胃酸分泌过多、胃蛋白酶消化自身胃壁，致使胃黏膜组织受损而形成的疾病。据统计，约10％的人一生中患过消化性溃疡。现代医学研究认为，胃溃疡属于典型的身心疾病，不良的情绪应激可影响胃肠生理功能，是导致溃疡症状复发或加剧的重要因素。胃炎饮为全国名老中医药专家杨牧祥教授的经验方，具有疏肝健脾，和胃降逆的功效。本次研究通过观察胃炎饮对胃溃疡大鼠胃黏膜病理形态、溃疡面积和表皮生长因子(EGF)、转化生长因子(TGF)、血管内皮生长因子(VEGF)及其mRNA表达的影响，以探讨疏肝健脾法促进溃疡愈合和防止复发的作用机制。　　方法:参照文献，应用冰醋酸腐蚀法制作胃溃疡大鼠模型。清洁级wistar大鼠50只，雄性，体重为200-220g，购自河北医科大学实验动物中心。适应性饲养1周后，随机抽取8只大鼠作为假手术组，剩余42只参与造模。　　在造模完成后第3天，除去死亡大鼠，确认模型复制成功后，将存活大鼠随机抽取32只，分为模型对照组（简称“模型组”）、奥美拉唑阳性对照组（简称“对照组”）、胃炎饮高剂量组（简称“胃高组”）、胃炎饮低剂量组（简称“胃低组”），每组为8只。各治疗组大鼠按10ml/kg体重药液分别灌胃给药，胃高组灌服浓度为2.14g生药/ml的胃炎饮的药液，胃低组灌服浓度为1.07g生药/ml体重的药液，对照组灌服浓度为0.368mg/ml的奥美拉唑肠溶胶囊药液。假手术组、模型组大鼠按照10ml/kg体重灌胃生理盐水。上述各组每天灌药或生理盐水1次，共治疗14天。　　在给药治疗过程中，观察各组大鼠的精神状态、毛发光泽及活动、进食情况。最后一次灌胃给药后禁食24小时，断头处死，无菌操作剖腹取胃组织，沿胃大弯剪开，以冰生理盐水冲洗干净，先肉眼观察胃粘膜的大体形态，再使用游标卡尺量取溃疡的最大长径与垂直最大宽径，计算溃疡面积及溃疡抑制率。在靠近溃疡灶或愈合处周围剪取胃组织，以4％多聚甲醛固定，常规石蜡包埋、切片，HE染色后，在光镜下观察溃疡愈合情况。选取上述石蜡切片，采用免疫组织化学检测EGF、TGF-β1、VEGF的表达情况。在靠近溃疡灶或愈合处周围剪取胃组织，放入玻璃匀浆管中，加入等倍体积的预冷生理盐水，冰盘上匀浆，采用RT-PCR检测EGFmRNA、TGFmRNA、VEGFmRNA的表达。　　计量资料数据用均数±标准差（(x)±S）表示，采用SPSS16.0统计软件统计，统计方法采用单因素方差分析，然后用LSD法进行组间两两比较，显著性差异水平以P＜0.05和P＜0.01为标准。　　结果:　　1.各组大鼠的一般状态模型完成后，假手术组大鼠情况无明显变化，其毛发润泽致密，双目有神，反应灵敏，活动量大，进食正常，大便呈颗粒状。其他各组大鼠均出现不同程度的被毛蓬乱，色黄晦暗，萎靡懒动，反应迟钝，食量减少，喜拱背蜷缩，大便发粘量少。随着造模结束后时间推移和治疗给药的进行，各组大鼠上述症状逐渐好转，其中模型组好转较慢，各治疗组症状好转较快，尤以胃高组恢复最快。　　2.各组大鼠胃黏膜病理组织形态的改变　　2.1 大体形态观察假手术组大鼠胃黏膜呈淡红色，皱襞明显，表面未见溃疡、水肿及充血。模型组大鼠胃黏膜呈凹陷状溃疡，边缘整齐，呈圆形或椭圆形，周围黏膜环堤样水肿隆起，形如火山口，附有白色或黄色炎性渗出物和坏死物，周围黏膜皱襞消失，呈剥脱状，有的溃疡处组织还与周围组织存在粘连。其他治疗组大鼠溃疡形态接近模型组，但溃疡表浅，范围较小，渗出物和坏死物很少，周围黏膜无明显水肿充血，有的还可见新生皱襞，部分出现愈合瘢痕。　　2.2 溃疡面积及溃疡抑制率比较同模型组相比，胃高、低组和对照组溃疡面积均显著缩小，差异都具有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);同时分别与对照组、胃低组相比，胃高组溃疡面积均显著缩小，差异都具有统计学意义(P＜0.05);胃高组溃疡抑制率为62.7％，高于胃低组27.2％和对照组34.7％。　　2.3 光学显微镜观察假手术组大鼠HE染色胃壁结构正常，黏膜上皮完整，腺体排列规律，未见明显炎性细胞浸润。模型组见胃壁结构破坏，黏膜出现坏死、缺损，腺体消失，细胞排列紊乱，黏膜层有炎性细胞浸润。其他治疗组胃壁结构和黏膜恢复较好，可见胃壁厚度增加，有新生上皮覆盖，粘膜下可见肉芽组织，无明显炎性细胞浸润。胃高组病理表现趋向正常，与假手术组相似。　　3.各组大鼠EGF及EGFmRNA表达的比较　　3.1 各组大鼠EGF表达的比较模型组同假手术组相比，大鼠EGF表达平均光度显著升高，而平均灰度显著下降，差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);经用药后，各治疗组同模型组相比，平均光度显著升高，平均灰度显著下降，差异都有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);各治疗组间相比，胃高组比对照组的平均光度升高明显，平均灰度下降明显，差异都有统计学意义(P＜0.05)，而胃高组较胃低组的平均灰度下降明显，差异有统计学意义(P＜0.05)。　　3.2 各组大鼠EGFmRNA表达的比较模型组同假手术组相比，大鼠EGFmRNA表达显著升高，差异有统计学意义(P＜0.05);经用药后，各治疗组同模型组相比，EGFmRNA表达显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01）;各治疗组间相比，胃高组EGFmRNA表达显著高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.01)，也显著高于胃低组，差异有统计学意义(P＜0.05)。　　4.各组大鼠VEGF及VEGFmRNA表达的比较　　4.1 各组大鼠VEGF表达的比较模型组同假手术组相比，大鼠VEGF表达的平均光度显著升高，而平均灰度显著下降，差异都有统计学意义(P＜0.01);经用药后，各治疗组同模型组相比，平均光度显著升高，平均灰度显著下降，差异都有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);各治疗组间相比，胃高组比对照组的平均光度升高明显，平均灰度下降明显，差异都有统计学意义(P＜0.01)，而胃高组较胃低组的平均灰度下降明显，差异有统计学意义(P＜0.01)。　　4.2 各组大鼠VEGFmRNA表达的比较模型组同假手术组相比，大鼠VEGFmRNA表达显著升高，差异有统计学意义(P＜0.01);经用药后，各治疗组同模型组相比，EGFmRNA表达显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01）;各治疗组间相比，胃高组EGFmRNA表达显著高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)，也显著高于胃低组，差异有统计学意义（P＜0.01）。　　5.各组大鼠TGF-β1及TGF-β1mRNA表达的比较　　5.1 各组大鼠TGF-β1表达的比较模型组同假手术组相比，大鼠胃黏膜TGF-β1表达的平均光度显著升高，而平均灰度显著下降，差异都有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);经用药后，各治疗组同模型组相比，平均光度显著升高，平均灰度显著下降，差异都有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);各治疗组间相比，胃高组比对照组的平均光度升高明显，平均灰度下降明显，差异都有统计学意义(P＜0.05)，而胃高组较胃低组的平均灰度下降明显，差异有统计学意义（P＜0.05）。　　5.2 各组大鼠TGF-β1mRNA表达的比较模型组同假手术组相比，大鼠TGF-β1mRNA表达显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01）;经用药后，各治疗组同模型组相比，EGFmRNA表达显著升高，差异有统计学意义(P＜0.01);各治疗组间相比，胃高组EGFmRNA表达显著高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.01)，也显著高于胃低组，差异有统计学意义(P＜0.05)。　　结论:　　1 疏肝健脾法能明显改善胃溃疡大鼠病理组织形态，提高溃疡抑制率，促进溃疡愈。　　2 疏肝健脾法可增强胃溃疡大鼠胃组织EGF及EGFmRNA的表达，加强胃黏膜修复，促进溃疡愈合。　　3 疏肝健脾法可增强胃溃疡大鼠胃组织VEGF及VEGF mRNA的表达，促进血管新生，促进溃疡愈合。　　4 疏肝健脾法可增强胃溃疡大鼠胃组织TGF-β1及TGF-β1 mRNA的表达，调节细胞生长和分化，促进溃疡愈合。
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实验针灸学复习题
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荆花胃康胶丸对实验性胃溃疡及幽门螺杆菌的抑制作用
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实验针灸学复习资料
实验针灸学的定义：是在中医理论的指导下，运用现代科学技术和方法，主要开展针灸理论，针灸作 用规律，针灸作用机制和针灸应用技术等相关研究的一门新兴学科，是针灸学科 一个新的分支。
实验针灸学的研究内容：
针灸对机体的作用：
“三个方面”：针灸的镇痛作用，神经-内分泌-免疫网络的调控作用，对失调的脏腑器 官功能的调整作用。
“三个特点”：整体性，双向性和良性调节。
“三大影响因素”：机体功能状态，刺激质量，穴位组选
针灸效应的机制
针灸的应用技术
实践及技能训练
针灸作用的基础研究
穴位的功能与结构
穴位功能的双重含义：感受刺激和反应病症
穴位感受刺激的三个特点:
穴位可以感受多种形式的刺激
穴位对不同形式的刺激有不同的适应症 【（电针最易，毫针不易）（皮肤触觉属于快适应感受器，肌梭和关节囊属于慢适应感受器）】
穴位对不同形式的刺激感觉阈不同 【电针 手针 艾灸】
反应病症：指脏腑病变时，常在体表某些穴位出现病理反应，可表现为穴位的感觉异常，组织形态改 变，生物物理特性改变等形式。
穴位病理反应的形式：
感觉异常：
疼痛---皮肤自觉痛，穴位压痛，痛觉过敏
知热感度变化---井穴或原穴， 赤羽氏指数 1.5,快，实证；赤羽氏指数 1.5,慢，虚证。 实证-对热的敏感性↑，知热感度变化数值偏低; 虚证-对热的敏感性↓，知热感度变化数值偏高。
组织形态改变：主要表现在穴位局部皮肤色泽和形态的改变
生物物理特性改变：
电学特性改变：穴位与非穴位相比，穴位皮肤具有低电阻，高电位的电学特性。
热学特性改变：穴位与非穴位相比，温度要高0.5～1℃，正常人两侧同命
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