一般的演技可以检出铜绿假单胞菌肺炎和大肠杆菌吗

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铜绿假单胞菌
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3秒自动关闭窗口紫外线灭菌灯对大肠杆菌和铜绿假单胞菌有灭菌作用吗?_百度知道
紫外线灭菌灯对大肠杆菌和铜绿假单胞菌有灭菌作用吗?
紫外线的杀菌机制在于破坏细菌的遗传物质,当然需要特定波长的紫外线。对大肠杆菌和铜绿假单胞菌都是有杀菌作用的。
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用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养,也可用于消毒效果测定(GB/T03 中4.7 ,GB/T4...大肠杆菌和铜绿假单胞菌中蛋白表达监测系统的构建--《西北大学》2009年硕士论文
大肠杆菌和铜绿假单胞菌中蛋白表达监测系统的构建
【摘要】:
20世纪90年代,“人类基因组计划”的推进和完成,标志着“后基因组时代”的到来,“功能基因组学”中蛋白质组学的研究提上了未来生命科学研究的日程。目前蛋白质研究的主要方法是通过2-DE配合质谱对蛋白质的分离鉴定。虽然对蛋白质的研究技术在不断地改进,但是目前的生物化学技术已不能满足研究蛋白质组所需要的高灵敏度、高通量以及可规模化的要求,对于蛋白质组学的研究期待着新型的技术方法的突破。
本课题以大肠杆菌和铜绿假单胞菌为研究对象,采用了将带有RBS的目的基因克隆至缺失自身RBS的报道基因luxABCDE上游,构建二者共用RBS的预期的蛋白表达监测系统;报道基因的表达量取决于克隆基因的转录及翻译水平,利用发光值读取仪检测CPS值衡量目的基因蛋白质的表达量。对该监测系统进行验证,并将两种菌的全基因组克隆至各自相应的监测系统中,建立反映蛋白质表达情况的荧光值数据库。
在大肠杆菌中,将重组载体pUCNot-lux中得到的报道基因luxABCDE克隆至蛋白表达载体pPROEX HTa、pPROEX HTb、pPROEX HTc,初步构建得到大肠杆菌的蛋白表达监测系统,命名为pPROEX HTa-lux、pPROEX HTb-lux、pPROEX HTc-lux。报道基因luxABCDE在载体pPROEX HTc-lux中翻译时能够正确阅读;并在IPTG梯度浓度条件下,测定含有载体pPROEX HTc-lux的细菌发光量,由结果可知克隆到蛋白表达载体中的缺失自身RBS的报道基因luxABCDE可以使用载体上游的trc启动子及其RBS,并且该报道基因的蛋白表达受到trc启动子调节因素的调节。测定预期的蛋白表达载体pPROEXHTc-lux中的报道基因luxABCDE两侧的序列,结果表明载体pPROEX HTc与报道基因luxABCDE连接处的碱基序列与已知碱基序列相同。
在铜绿假单胞菌中,将从已构建的大肠杆菌蛋白表达监测载体酶切后得到的luxABCDE(a)、luxABCDE(b)、luxABCDE(c)克隆至去除原有报道基因luxCDABE的pMS402剩余载体中,初步构建铜绿假单胞菌蛋白表达监测系统,命名为pMS402-luxABCDE(a)、pMS402-luxABCDE(b)、pMS402-luxABCDE(c)。
在大肠杆菌和铜绿假单胞菌中构建的蛋白表达监测方法可以实现高通量、高灵敏度、规模化以及更直观地对蛋白表达的监测;该监测方法不仅可用于蛋白质组学的基础理论性研究,而且可用于攻克重大疾病和开发生物医药等领域的实践应用性研究。
【关键词】:
【学位授予单位】:西北大学【学位级别】:硕士【学位授予年份】:2009【分类号】:Q789【目录】:
中文摘要3-4
Abstract4-5
缩写对比表5-9
图表目录9-10
第一部分 引言10-23
1.1 蛋白质组学研究的背景10-12
1.2 蛋白质组学的研究方法12-18
1.2.1 蛋白质的分离技术12-14
1.2.1.1 二维SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术12-13
1.2.1.2 色谱技术13-14
1.2.1.3 一维电泳(色谱)-质谱技术14
1.2.2 蛋白质的鉴定技术——生物质谱技术14-16
1.2.2.1 基质辅助激光解吸电离质谱(MALDI-MS)15-16
1.2.2.2 电喷雾电离质谱(ESI-MS)16
1.2.3 蛋白质芯片技术16-17
1.2.4 生物信息学17-18
1.3 大肠杆菌及铜绿假单胞菌的相关研究背景18-21
1.3.1 大肠杆菌的概述18-19
1.3.2 铜绿假单胞菌的概述19-20
1.3.3 蛋白质表达中RBS的作用20
1.3.4 报道基因luxABCDE20-21
1.3.5 大肠杆菌和铜绿假单胞菌的表达载体21
1.4 本课题研究内容和意义21-23
1.4.1 研究的内容21-22
1.4.2 研究的意义22-23
第二部分 实验材料和方法23-39
2.1 实验材料23-25
2.1.1 菌株和质粒23
2.1.2 培养基的配置23-24
2.1.3 试剂24
2.1.4 仪器24-25
2.2 实验方法25-39
2.2.1 质粒的小量提取25
2.2.1.1 制备细胞25
2.2.1.2 裂解细胞25
2.2.1.3 回收质粒DNA25
2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备25-26
2.2.3 铜绿假单胞菌感受态细胞的制备26
2.2.4 电转化26
2.2.5 质粒或DNA片段的酶切和连接26-27
2.2.5.1 DNA酶切反应26-27
2.2.5.2 粘性末端连接27
2.2.6 聚合酶链式反应(PCR)27-28
2.2.6.1 聚合酶链式反应(PCR)的一般反应体系27
2.2.6.2 聚合酶链式反应(PCR)的一般反应程序27-28
2.2.7 大肠杆菌中蛋白表达监测系统的构建方法28-35
2.2.7.1 载体的准备28-30
2.2.7.2 连接片段的准备30-32
2.2.7.3 E.coli中预期蛋白表达监测系统的构建32-33
2.2.7.4 IPTG梯度浓度条件下的CPS值的测定33-34
2.2.7.5 E.coli中预期蛋白表达监测系统的平行验证实验34-35
2.2.8 铜绿假单胞菌中蛋白监测系统的构建方法35-39
2.2.8.1 载体的准备35-36
2.2.8.2 报道基因luxABCDE的准备36-37
2.2.8.3 铜绿假单胞菌中蛋白表达监测系统的构建37-39
第三部分 实验结果39-49
3.1 E.coli中预期的蛋白表达监测系统的构建39-46
3.1.1 缺失自身RBS的报道基因luxABCDE的获得39-41
3.1.1.1 pUCNot-lux-BF酶切验证39-40
3.1.1.2 pUCNot-lux的构建40-41
3.1.2 E.coli中预期蛋白表达监测系统的构建41-42
3.1.3 pPROEX HTc-lux的验证42-43
3.1.4 pPROEX HTc-lux测序43-44
3.1.5 E.coli中预期的蛋白表达监测系统的平行验证实验44-46
3.2 铜绿假单胞菌中蛋白表达监测系统的构建46-49
参考文献51-56
E.coli蛋白表达载体pPROEX HTa、pPROEX HTb、pPROEX HTc中MCS碱基序列56-57
蛋白表达载体pPROEX HTa的碱基序列57-59
蛋白表达载体pPROEX HTb的碱基序列59-62
蛋白表达载体pPROEX HTc的碱基序列62-64
luxAB的碱基序列64-65
攻读硕士期间所发表的文章65-66
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