A【解析】试题分析：目的基因的粘性末端应该和质粒切割后的粘性末端一样，由图可知目的基因含有CAATTG，即可以用MunI酶切，所以质粒应选用含该酶切位点的，故B、D错误。但酶切位点不能破坏标记基因，故A正确，C错误。考点：本题考查基因工程相关知识，意在考察考生对知识点的理解掌握程度和识图能力。
考点分析：
考点1：基因工程、生物技术的安全性和伦理问题
请在这里输入关键词：
科目：高中生物
来源：学年安徽省安庆市高三联考理综生物试卷（解析版）
题型：综合题
（24分）I、（18分）胰岛素是已知的唯一降低血糖水平的激素，请分析胰岛素的作用机制模式图（如下图所示），并回答有关问题：（1）图中的刺激X最可能是
，下丘脑神经细胞接受刺激X后，膜外的电位变化为
，最终引起传出神经末梢释放
，与胰岛B细胞上相应受体结合，引起胰岛素分泌增多。（2）由图可知，胰岛素与
结合后，一方面使
增加，促进葡萄糖进入细胞；另一方面促进
，从而降低血糖。（3）如果给动物注射大剂量胰岛素，动物会因低血糖而休克。通过注射胰高血糖素能促使血糖升高，使休克的动物清醒根据以下实验材料及用品，完成实验方案，证明胰高血糖素能升高血糖。实验材料及用品：小白鼠、注射器、鼠笼、胰岛素溶液、胰高血糖素溶液、葡糖糖注射液、生理盐水。实验方案：选择体重相近的健康小白鼠，按照下表进行处理、观察并填写相关内容。分组实验处理方法预期结果下一步实验处理方法预期结果A组（对照组）①
清醒 清醒B组注射大剂量的胰岛素溶液休克②
未清醒C组③
清醒II、（6分）随着水体富营养化日趋严重，淡水湖泊藻类水华频繁发生，人们正在利用基因工程进一步解析“聚磷基因”和“硝化基因”，将这两种基因重组后导入大肠杆菌中，从而使废水中过高的N、P得到有效的去除，降低水体的富营养化。请回答下列有关基因工程和生态工程的相关问题。（1）人们获取聚磷基因和硝化基因的方法通常有人工合成、
。（2）利用聚磷基因和硝化基因构建基因表达载体时，常用的工具酶是
，它们作用的化学键名称是
。（3）重组DNA导入前，通常用
溶液对大肠杆菌进行处理。（4）要从根本上解决水体污染，还需将城市污水进行回收利用，实现废物资源化，这体现了生态工程的
科目：高中生物
来源：学年山西省忻州市高一上学期期末考试生物试卷（解析版）
题型：选择题
如将一株绿色植物栽培在含H218O的培养液中，给予充足的光照，经过一段时间后，可发现18O存在①周围空气中的氧气中；
②周围空气中的二氧化碳中；
③周围空气的水分子中；
④光合作用生成的水分子中；
⑤光合作用生成的葡萄糖中；A.只有①是正确的
B.只有①③是正确的C.除④之外都是正确的
D.①②③④⑤都是正确的
科目：高中生物
来源：学年山西省忻州市高一上学期期末考试生物试卷（解析版）
题型：选择题
下列有关“探究酵母菌的呼吸方式”实验的叙述，错误的是A. 煮沸葡萄糖溶液是为了灭菌和去除溶液中的O2B. 实验过程中，泵入的空气应去除CO2C. 实验中的无关变量有温度、pH、培养液浓度等D. 通过观察澄清石灰水是否变浑浊来判断酵母菌的呼吸方式
科目：高中生物
来源：学年福建省四地六校高二下学期第一次联考生物试卷（解析版）
题型：综合题
（5分，每空1分）人外周血单核细胞能合成白介素2(IL-2)。该蛋白可增强机体免疫功能，但在体内易被降解。研究人员将IL-2基因与人血清白蛋白(HSA)基因拼接成一个融合基因，并在酵母菌中表达，获得具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2-HSA融合蛋白。其技术流程如图。请回答：(1)图中②表示________过程。(2)表达载体1中的位点________，应为限制酶BglⅡ的识别位点，才能成功构建表达载体2。(3)表达载体2导入酵母菌后，融合基因转录出的mRNA中，与IL-2蛋白对应的碱基序列不能含有________(起始、终止)密码子，才能成功表达出IL-2-HSA融合蛋白。(4)应用________杂交技术可检测酵母菌是否转录出IL-2-HAS的________。
科目：高中生物
来源：学年福建省四地六校高二下学期第一次联考生物试卷（解析版）
题型：选择题
图中是以每个营养级生物的数量多少而绘制的金字塔，其中1、2、3分别代表第一、二、三个营养级的生物，下面哪条食物链与该金字塔相符(
)①草 ②树 ③昆虫 ④兔 ⑤鸟 ⑥狼A.①→③→⑤
B.①→④→⑥
C.②→③→⑤
D.①→③→⑥
科目：高中生物
来源：学年福建省四地六校高二下学期第一次联考生物试卷（解析版）
题型：选择题
如图表示A、B两个特殊生态系统的能量金字塔。有关解释正确的是(
)①一个吃玉米的人所获得的能量一定比一个吃牛肉的人获得的能量多②能量沿食物链单向流动，传递效率随营养级的升高而逐级递减③若A和B中玉米的数量相同且能量传递效率都为10%，当A能养活10 000人时，则B最多能养活1 000人④若土壤含相同浓度的难降解污染物，则A中的人类比 B中的人类体内污染物浓度低A．①③
C．①②③④
科目：高中生物
来源：学年福建省四地六校高二下学期第一次联考生物试卷（解析版）
题型：选择题
在一个阴湿的山洼草丛中，有一堆长满苔藓的腐木，其中聚集着蚂蚁、蜘蛛、蚯蚓、老鼠等动物．这所有的生物共同构成一个
)A．生态系统
B．生物群落
科目：高中生物
来源：学年江苏省东台市高三12月月考生物试卷（解析版）
题型：选择题
下列四组杂交实验中，能判断显性和隐性关系的是(
)①红花×白花→红花②非甜玉米×非甜玉米→301非甜玉米+101甜玉米③盘状南瓜×球状南瓜→盘状南瓜、球状南瓜④牛的黑毛×白毛→98黑毛+102白毛 A、①和②第4章 载体的选择与构建_图文_百度文库
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第4章 载体的选择与构建
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你可能喜欢pCMV-N-HA/真核表达质粒
&产品编号: D2733
&产品包装: 1μg
&产品价格: 862.00元
产品简介：
&&&&pCMV-N-HA是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端和HA&tag(HA标签)融合的目的蛋白
的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的5'端含有一个可以编码HA标签的序列，因此可以表达出含有HA标签的融合蛋白，可以方便地使用抗HA的抗体来识别目的蛋白，有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
&&&&pCMV-N-HA质粒的主要信息如下：
&&&&Feature Nucleotide
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&Position
&&&&CMV promoter
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&1-602
&&&&T3 promoter and T3 primer binding site
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&620-639
&&&&HA tag
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&679-705
&&&&multiple cloning site
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&708-781
&&&&T7 promoter and T7 primer binding site
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&824-845
&&&&SV40 polyA signal
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&857-1240
&&&&f1 origin of ss-DNA replication
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
&&&&bla promoter
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
&&&&SV40 promoter
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
&&&&neomycin/kanamycin resistance ORF
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
&&&&HSV-thymidine kinase(TK)polyA signal
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
&&&&pUC origin
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
&&&&pCMV-N-HA质粒的图谱如下：
&&&&pCMV-N-HA的多克隆位点的详细图谱如下：
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&HA tag&&&&&&&&&&
&&&&&&&&SacI
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&M
&&&&651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCCATGTA CCCATACGAT GTTCCAGATT
&&&&&&&&CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGGTACAT GGGTATGCTA CAAGGTCTAA
&&&&&&&&&&&&&&&XmaI
&&&&&&&&&&&&&&&&PstI
&&&&&&&&&&A
&&&&&EcoRI EcoRV
&&&&701 ACGCTAGCCC GGGCGGATCC AAGCTTCTGC AGGAATTCGA TATCGTCGAC
&&&&&&&&TGCGATCGGG CCCGCCTAGG TTCGAAGACG TCCTTAAGCT ATAGCAGCTG
&&&&&&&&BglII
&&&&&&&XbaI
&&&&751 AGATCTCTCG AGTCTAGAAC TAGTGGGCCC GGTACCTTAA TTAATTAAGG
&&&&&&&&TCTAGAGAGC TCAGATCTTG ATCACCCGGG CCATGGAATT AATTAATTCC
&&&&pCMV-N-HA中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-HA)包括：
&&&&Afl II
&&&&&&Asc I
&&&&&Blp I
&&&&BsiW I
&&&&&BspM II
&&&&Bst1107 I
&&&&BstE II
&&&Eco47 III
&&&&&&Fse I
&&&&PflM I
&&&&&&Pml I
&&&&PpuM I
&&Psp1406 I
&&&&pCMV-N-HA中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-HA once)包括：
&&&&&CA`TA,TG
&&&&TAC|GTA
&&&&&&&347
&&&&&G,AGCT`C
&&&&CC,GC`GG
&&&&CCAN,NNNN`NTGG
&&&&&GC`GGCC,GC
&&&&C`CCGG,G
&&&&&C`CCGG,G
&&&&&GCCC|GGGC
&&&&&CCC|GGG
&&&&&&&711
&&&&G`GATC,C
&&A`AGCT,T
&&&&&C,TGCA`G
&&&&G`AATT,C
&&&&GAT|ATC
&&&&&&&742
&&&&&G`TCGA,C
&&&&&GT`MK,AC
&&&&A`GATC,T
&&&C`TCGA,G
&&&&&C`TCGA,G
&&&&&T`CTAG,A
&&&&&A`CTAG,T
&&G`GGCC,C
&&&&&G,GGCC`C
&&&&&&CG,AT`CG
&&&&&&&&&&858
&&&&&&T`GATC,A
&&&&&&&&&1012
&&&&&&C`AATT,G
&&&&&&&&&1105
&&&&&&GTT|AAC
&&&&&&&&&&1118
&&&&&&A`CGCG,T
&&&&&&&&&1241
&&&&CAC,NNN`GTG
&&&&&&1471
&&&&&&GGCCN,NNN`NGGCC
&&&&&GAGGAG 16/14
&&&&&&AGG|CCT
&&&&&&&&&&2176
&&&&&&AT`CG,AT
&&&&&&&&&2195
&&&&&&G`GCGC,C
&&&&&&&&&2354
&&&&&&GG`CG,CC
&&&&&&&&&2355
&&&&&&GGC|GCC
&&&&&&&&&&2356
&&&&&&G,GCGC`C
&&&&&&&&&2358
&&&&&&TGG|CCA
&&&&&&&&&&2437
&&&GACN`N,NGTC
&&&&&&2473
&&&&&GCAATG, 8
&&&&&&&&2588
&&G,DGCH`C
&&&&&&&&&2658
&&&&&CG`GWC,CG
&&&&&&&&2871
&&&&&TT`CG,AA
&&&&&&&&&3037
&&&&&TT`CG,AA
&&&&&&&&&3037
&&&&&&GGTCTC 7/11
&&&&&&3344
&&&&ACCNNNNNNGGT-1/13 3684
&&&&&G`TGCA,C
&&&&&&&&&3959
&&&&pCMV-N-HA质粒中对于插入片断进行测序时，推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下：
&&&&T3 primer(620-639): 5′AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
&&&&T7 primer(824-845): 5′GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
&&&&pCMV-N-HA的全序列信息：
包装清单：
保存条件：
&&&-20℃保存。
注意事项：
&&&&本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人
&&&&为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。
&& 抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. pCMV-N-HA质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，需注意插入基因片断和tag之间
&&&的读码框要一致，即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
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使用本产品的文献：
1. Xing J, Wang S, Lin R, Mossman KL, Zheng C.
&& J Virol. ):3528-40. doi: 10.1128/JVI.06713-11. Epub 2012 Feb 1.
2. Xing J, Ni L, Wang S, Wang K, Lin R, Zheng C.
&& J Virol. 2013 Jul 3.
3. Cai M, Li M, Wang K, Wang S, Lu Q, Yan J, Mossman KL, Lin R, Zheng C.
&& PLoS One. ):e54586. doi: 10.1371/journal.pone.0054586. Epub 2013 Jan 28.
4. Qiu Y, Ding Y, Zou L, Tan Z, Liu T, Fu X, Xu W.
&& PLoS One. 2013 Apr 23;8(4):e61508. doi: 10.1371/journal.pone.0061508. Print 2013.
5. Zhang J, Wang S, Wang K, Zheng C.
&& Med Microbiol Immunol. 2013 May 1.
6. Huang Y, Zhang J, Halawa MA, Yao S.
&& Virus Genes. ):243-51. doi: 10.-013-1006-z. Epub 2014 Jan 8.扫扫二维码，随身浏览文档
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质粒介导AmpC+β内酰胺酶的研究进展
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3秒自动关闭窗口携带bla_(CTX-M-15)流行质粒的研究 - 中国优秀硕士学位论文全文数据库
中国优秀硕士学位论文全文数据库
携带blaCTX-M-15流行质粒的研究
【作者基本信息】
【摘要】 目的研究广州地区携带blaCTX-M-15质粒的分子生物学特征。方法以2007年到2008年期间来源于广州9家医院的产ESBL的181株大肠杆菌和180株肺炎克雷伯菌为研究对象,PCR方法筛查携blaCTX-M-15菌株、确定大肠埃希菌的系统发育群和分析流行质粒的耐药基因构成,PFGE和MLST了解blaCTX-M-15阳性株的同源性, MIC检测菌株对常用抗生素的敏感性。血清凝集试验确定血清型。接合实验了解携带blaCTX-M-15质粒的可接合性,限制性内切酶分析质粒的同源性。二代测序技术对质粒的全序列进行测序。结果检出blaCTX-M阳性菌株243株,其中CTX-M-14和CTX-M-15分别为115和84株。37株大肠埃希菌和47株肺炎克雷伯菌携带blaCTX-M-15。blaCTX-M-15阳性的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分别用PFGE确定为28个和30个基因型。携blaCTX-M-15大肠埃希菌的系统发育群以D群（67.8%）和A群（21.4%）为主。大肠埃希菌的血清型呈散在分布,未发现025:H4血清型。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ST型无明显集中趋势。58个基因型的代表菌株中有40株可将携blaCTX-M-15的质粒传递给受体菌E.coli C600（Rifr）,其中大肠埃希菌有19株、肺炎克雷伯菌有21株。35.7%（10/28）的大肠埃希菌中携带blaCTX-M-15的质粒大小为65KB,40.0%（12/30）的肺炎克雷伯菌中携带blaCTX-M-15的质粒大小为92KB。通过限制性内切酶分析,发现存在2种流行质粒,命名为p15-e和p15-k。通过PCR调查, p15-e上存在blaCTX-M-15和ISEcpI; p15-k上存在blaCTX-M-15, blaTEM-1。分析p15-k全序列发现同浙江发现的质粒pKF3-94具有明显的同源性。结论广州地区CTX-M型ESBL主要以CTX-M-14为主;CTX-M-15位居第二位,但上升趋势非常明显。广州地区携带blaCTX-M-15的菌株主要以独立基因型为主,没有细菌克隆株大规模传播的证据。携带blaCTX-M-15的大肠埃希菌的种系发育群主要以D群和A群为主,同国外比较存在地域差异。广州地区携带blaCTX-M-15的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ST型和血清型均与国外报道存在差异。blaCTX-M-15存在于可接合性质粒上。大肠埃希菌中主要集中在大小约65Kb的质粒;肺炎克雷伯菌主要集中在92Kb质粒。广州地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中分别存在一个65Kb（pc15-e）和92KB（pc15-k）的流行质粒。质粒pc15-k和浙江发现的pKF3-94具有高度的同源性,提示中国国内可能存在一个携带blaCTX-M-15的流行质粒。
【关键词】 ；
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