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请大家帮我看看我的southern blot 图片，不知道问题出在哪里了，谢谢
southern blot 实验目的是为了验证突变体基因被敲除（1,2分别是两个不同突变体）
1.使用单酶切5小时左右；
2.基因组DNA浓度约为450ng/uL，上样量每孔50微升，跑胶（0.8%）5小时左右，条带很亮；
3.试剂盒是Roche Kit I, 洗脱条件为：68℃&&2×SSC，0.1%SDS 洗30min, 68℃&&0.5×SSC，0.1%SDS 洗15min，洗两次；
4.探针是PCR目的基因部分片段的回收产物，大小约为400和700bp。
探针第一和第二次用的相同，第一次Marker（TAKARA DL15000）未杂出条带，目的基因野生型与突变体有目的条带；
第二次-1基因做出来了，-2效果不太好；
第三次-1是新做的探针，有杂带，背景信号也很高，-2仍是之前的探针，却没有杂出目标条带。
麻烦大家帮我分析分析是什么原因，有什么好的解决方法。不甚感激~~~~
第一次-1.jpg
第一次-2.jpg
第二次-1.jpg
第二次-2.jpg
第三次-1.jpg
第三次-2.jpg
PCR目标基因上游或者下游片段，回收后与marker煮沸后加入1号液制成。
我做的是细菌的，每孔总量为20ug左右。我后面用相同的DNA又做了一次，这次效果还不错，条带都很清晰，不过不同的是把探针换了，而且探针煮沸后冰浴着，再加入杂交液的。
不知道您有没有检测探针浓度的方法，Roche Kit I 的英文说明书有些看不明白。。。。
细菌总DNA不需要这么多，是不是浓度测定方法有大误差或者是酶切后纯化时损失太多？一般情况核酸浓度确定需要电泳和分光光度计测定结合，探针标记前测定即可。
之前探针使用时煮沸后未冰浴。。。。实验室流传下来的方法没有这一步。
细菌基因组DNA是用仪器测的，探针用的片段未测浓度。。。
酶切之后，我们没有纯化，第二天直接上样跑电泳的。。。。。
高温灭菌的。。。背景高可能是探针浓度过高了，吸取一点探针出来稀释3~5倍试试。。。Marker亮度如何？目的条带都能杂交出来么？
谢谢，我试着高压灭菌，把探针浓度降低5倍，阳性对照条带明显，但是实验组没有条带，我提取的DNA 浓度是238ng/ul用TAKALA的酶进行酶切，酶切体系是
EcoR1 1ul，BUf 2ul， DNA5ul(说明书上说DNA&1ug), 无菌水12ul，酶切后上样40ul,这样上样量才2ug。请问您是怎么保证上样量20ug的？？？谢谢
对不起额，最近上课比较忙，很久没来小木虫看了。。。我记得我是每次切100 ul 体系，79 ul DNA，（浓度200微克以上），单酶切的话 酶7微升，buffer 14ul，酶切5小时或者过夜都可以。。。。
好的，谢谢，那你的上样量差不多就100ul 啊！？
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随时随地聊科研从数据库中查出图片编号和 电影名字 放到一个集合图片显示出来了怎样将名字显示到对应的图片下面啊？我写的显示不出来。。。大家帮帮忙看看吧？谢谢了。。。 - 开源中国社区
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这是自定义的& Adapter&
public class PictureAdapter extends BaseAdapter {
public int pageIndext = 0;
public int displayCount = 12;
private List&Map&String,Object&&
public PictureAdapter(Context context,List&Map&String,Object&& lsmp,String moviename ){
this.ctx =
this.lsmp =
if(this.lsmp==null){
this.lsmp = new ArrayList&Map&String,Object&&();
public int getCount() {
if(lsmp.size()-displayCount*pageIndext&displayCount){
return lsmp.size()-displayCount*pageI
return displayC
public Object getItem(int position) {
public long getItemId(int position) {
public View getView(int position, View convertView, ViewGroup parent) {
ImageView imageView = new ImageView(ctx);
imageView.setScaleType(ImageView.ScaleType.CENTER_CROP);
imageView.setLayoutParams(new GridView.LayoutParams(50, 50));
imageView.setPadding(4,4,4,4);
//得到图片下面的文字
TextView textView = new TextView(ctx);
Map&String,Object& map = lsmp.get(position);
String fname = (String) map.get(&fname&);
//调出 电影名字 放到 TextView 里面
String mName = (String) map.get(&mName&);
textView.setText(mName);
System.out.println(&名字是------&+mName);
BitmapFactory.Options opt = new BitmapFactory.Options();
opt.inPreferredConfig = Config.RGB_565;
opt.inPurgeable=
opt.inSampleSize=5;
opt.inInputShareable=
File file = new File(fname);
FileInputStream fis = new FileInputStream(file);
BufferedInputStream bis = new BufferedInputStream(fis);
bmp = BitmapFactory.decodeStream(bis, null, opt) ;
Bitmap thbm=ThumbnailUtils.extractThumbnail(bmp, 50,50);
imageView.setImageBitmap(thbm);
bis.close();
if(!bmp.isRecycled()){
bmp.recycle();
System.gc();
}catch(Exception e){
return imageV
这是查询数据库得到& 图片编号&& 后组成图片在SD 卡的路径 和 改图片对应的 电影名字
MovieService ms = new MovieService(this.getBaseContext());
List&Map&String,Object&& typenum = ms.findMovie();
for (Iterator&Map&String, Object&& typeiterator = typenum.iterator(); typeiterator.hasNext();) {
Map&String, Object& num = typeiterator.next();
Integer numint = (Integer) num.get(&allmovie&);
String name = (String) num.get(&movieName&);
listmap = FileList.findFile(Environment.getExternalStorageDirectory()+&/Pictures/&+numint+&.jpg&,name);
这是 上面查询得到数据后& 到这里 取& 图片的以及电影名字
public class FileList {
private static List&Map&String,Object&& listmap = new ArrayList&Map&String,Object&&();
public static List&Map&String,Object&& findFile(String fpath,String name){
File fl = new File(fpath); //图片在SD卡的路径/mnt/sdcard/Pictures/*.jpg
File Mname = new File(name); //对应*.jpg 图片的电影名字
Map&String,Object& map = new HashMap&String, Object&();
String fname =fl.getPath();
String mName = Mname.getName();
map.put(&fname&, fname);
map.put(&mName&, mName);
listmap.add(map);
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