肺结核痰结核杆菌定量PCR;PCR是指什么_百度知道
肺结核痰结核杆菌定量PCR;PCR是指什么
PCR是指什么
聚合酶链式反应，例如用於判断检体中是否会表现某遗传疾病的图谱，用於扩增特定的DNA片段、基因复制，以及亲子鉴定Polymerase chain reaction （PCR）是一个化学反应，被广泛地运用在医学和生物学的实验室、传染病的诊断。是一种分子生物学技术
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体内有结核杆菌就能提取出他的DNA，经PCR扩增后DNA数量就会变多（PCR扩增是特异性的，也就是说只扩增结核杆菌DNA）扩增DNA
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PCR假阴性的原因分析
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肺结核的PCR法和涂片法检查的比对
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RT-PCR反应空白对照和阴性对照都P出条带了是怎么回事
劳驾各位老师:hand:：
& && & 我买的RT-PCR是两个盒子一个是提RNA的盒子，一个是RT-PCR反应的盒子。这个RT-PCR反应的盒子将反转录反应和PCR反应合为一步，具体操作就需要加盒子里的反应液（具体怎么配置的没说）、酶和模板就OK了，也就说正个反转录反应PCR反应的加样工作就完成了。我的问题是，开始按照说明书的步骤做：提RNA后进行RT-PCR反应跑胶结果空白对照、阴性对照、阳性对照及所有样品都有目的条带，只是阳性对照条带更亮、更粗，值得一提的是空白对照、阴性对照以及样品的条带亮度、粗细都差不多。后来为了排除提RNA过程的操作问题我没提RNA直接在RT-PCR反应液里分别加无酶水、阴性和阳性对照，结果还是都跑出了目的条带而且条带亮度、粗细基本一致。请问各位老师是厂家的RT-PCR反应的盒子有问题，还是别的其他什么原因？感谢各位，圣诞快乐:victory:！！！
根据你说的情况应该是PCR体系污染。很可能是试剂、水、枪头、空气等的污染。你应该一个个排除。 : Originally posted by puresnowlqin at
根据你说的情况应该是PCR体系污染。很可能是试剂、水、枪头、空气等的污染。你应该一个个排除。 您好！我的枪头和水都是无酶的也是新的盒子也是新拿的而且我们是两个人同时拿的两个新的盒子！难道说是空气污染？气溶胶？怎么污染？请您详解 有没有在的朋友 有可能RT-PCR试剂盒被污染了 : Originally posted by 未知时光 at
有可能RT-PCR试剂盒被污染了 那您说是在我这儿污染的还是在厂家污染的？重点是怎么污染的，这种模板链不常见啊 : Originally posted by 落叶拾忆 at
那您说是在我这儿污染的还是在厂家污染的？重点是怎么污染的，这种模板链不常见啊... 我想说厂家的试剂盒一般是不会有问题的，而且你也说了你的模板不常见，所以很有可能是你的原因，但你的具体实验环境我也不了解，所以具体怎么污染的我也不好妄下结论。 从结果情况看应该是污染，各个都有带，还都是目的条带，应该不是试剂盒问题，应该是人为污染，比如水什么的。具体情况不了解，没法细致诊断。最简单办法是全换新的试试 p出的带可能不是真的带 送去做一下测序
有可能是primer自合的产物 之类 不是真正产物 同意楼上的说法，是引物的非特异性扩増，导致阴性对照有条带 1.产物拿去测个序，看看到底是不是和你的目的条带一样的
2.我们实验室是做载体的，都是基于GFP构建的，所以当初我做载体拷贝数的时候相当痛苦，GFP气溶胶到处都是，用水为模板都能P出很亮的条带，最后没办法了我就买商业态的水，其他的所有东西，包括枪头，离心管，移液枪等等，全部放在UV下照3个小时以上，这样才使得negative control里没有带 : Originally posted by konaz at
p出的带可能不是真的带 送去做一下测序
有可能是primer自合的产物 之类 不是真正产物 但是我所有的条带和阳性对照都在一个位置上而且是100多bp的，您说的产物应该不会有这么大吧? 而且我昨天又重新做了一遍，在超净台，盒子，枪头换的都是新的...... : Originally posted by mm的毛毛 at
从结果情况看应该是污染，各个都有带，还都是目的条带，应该不是试剂盒问题，应该是人为污染，比如水什么的。具体情况不了解，没法细致诊断。最简单办法是全换新的试试 我昨天又重新做了一遍，在超净台，盒子，枪头换的都是新的结果还是一样，而且是两个人做的结果也是一样的。另外，我的这个盒子的反应体系是不用加水补齐的...... : Originally posted by 未知时光 at
我想说厂家的试剂盒一般是不会有问题的，而且你也说了你的模板不常见，所以很有可能是你的原因，但你的具体实验环境我也不了解，所以具体怎么污染的我也不好妄下结论。... 我也觉得厂家不会范这么低级的错误。但是我们（是两个人）昨天又重新做了一遍换了屋子在超净台上做的，盒子，枪头都是新，除了离心的时候就没开过超净台。有点想不明白了.... 如果你之前 p过这个产物，有可能是加样的枪污染了，跑胶上样的枪要和做PCR的枪分开。 应该是你的模板抽提时被阳性样本污染了。建议紫外，酒精等进行一次彻底消毒，并空一天再进行实验 请问各位老师引物非特异性扩增的片段一般是多大？100bp的条带能是非特异性产物吗？ 你说的情况可以确定有污染，引物2聚体长度可以推断。
下面可以作2个实验：
用这个盒子，枪头，新加样器，在超净台，作一遍；
用其他盒子，枪头，这套加样器，在超净台，作一遍；
根据结果，多半可以推测那里污染了做PCR时阳性对照和阴性对照是什么_百度知道
做PCR时阳性对照和阴性对照是什么
提问者采纳
比如你觉得有污染不好你好，一般PCR结果条带不单一才有必要做单双引物对照的，那就可以用阳性里加模板，这样可以检测是否是单引物扩增，单双引物检测，阴性里不加模板，而另一个加一对，不过一般做对照都是检测引物，这份好多种。希望对你又帮助，一个只加一个引物，要看你要做对照的目的
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