RACE技术克隆大菱鲆蛋白磷酸酶1催化亚基基因和金属蛋白酶基因及其序列分析--《中国海洋大学》2006年硕士论文
RACE技术克隆大菱鲆蛋白磷酸酶1催化亚基基因和金属蛋白酶基因及其序列分析
【摘要】：
在真核细胞内,几乎所有的信号转导过程都是通过由蛋白激酶和蛋白磷酸酶催化的磷酸化和去磷酸化作用来调节的。蛋白磷酸酶1 (PP1)属于蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶型,是PPP基因家族中第一个被分离出来的蛋白磷酸酶。本文采用RACE技术首次从大菱鲆的皮肤组织中克隆得到蛋白磷酸酶1催化亚基(β型)的全长cDNA序列,命名为SmPP1cb。序列分析表明,SmPP1cb基因由39 bp的5’UTR,984 bp的开放阅读框和462 bp的3’UTR组成。开放阅读框编码的蛋白质由327个氨基酸组成,分子量为37,193 Da,等电点为5.8,该蛋白质具有一个酸性的肽链N端,Met-Ala-Glu-Gly-Glu-Leu-Asp-Val-Asp,这是PP1催化亚基所共有的特征,在PP2B催化亚基中则不存在这样的特征。与其他脊椎动物和无脊椎动物的PP1cb基因相比,大菱鲆SmPP1cb基因在核苷酸水平和氨基酸水平上都十分保守;其起始密码子周边序列基本符合kozak规律,这说明其在大菱鲆中也有较高的翻译起始效率,但SmPP1cb基因的起始密码子周边序列与哺乳动物的明显不同;不同种动物的PP1cb基因3’UTR高度不保守。SmPP1cb基因全长的克隆和测序为将来研究蛋白磷酸酶1在大菱鲆中的生物学功能奠定了基础。
金属蛋白酶(Metalloproteinase)是一类活性中心依赖于金属离子的蛋白酶。
【关键词】：
【学位授予单位】：中国海洋大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2006【分类号】：Q78【目录】：
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Abstract7-9
第一章 绪论9-35
1 蛋白磷酸酶的研究概况9-21
2 金属蛋白酶的研究概况21-27
3 RACE 技术在全长cDNA 克隆中的应用27-35
第二章 大菱鲆蛋白磷酸酶1(SmPP1cb) 基因全长的克隆及序列分析35-58
1 前言35-36
2 实验材料36-39
3 实验方法39-48
4 结果与讨论48-51
5 图版说明51-58
第三章 大菱鲆 SmMP 基因的克隆及序列分析58-69
1 前言58-59
2 实验材料59
3 实验方法59-60
4 结果与讨论60-64
5 图版说明64-69
参考文献70-76
致 谢76-80
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