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BamHI、HindI、TaqI都怎么读?
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BamH1 ggattc 同工酶 Bst1 ggattc Hind3 好像没有同工酶吧
我没有问同工酶，而是问它们都怎么读
扫描下载二维码Influence of different 5&-flanking sequences of tRNA genes on their in vivo transcription efficiencies in Saccharomyces cerevisiae - DINGERMANN - 1987 - The FEBS Journal - Wiley Online Library
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We have investigated the influence of 5&-flanking sequences on the in vivo transcription activities in yeast. Since eukaryotic tRNA genes belong to multi-copy gene families monitoring of the activity of a particular tRNA gene is not possible. We therefore used two different tRNA genes from the cellular slime mould Dictyostelium discoideum which are efficiently transcribed and processed in vivo in yeast. The original 5&-flanking sequences of the two tRNA genes were replaced by random plasmid sequences. The modified tRNA genes were introduced into Saccharomyces cerevisiae and bulk tRNAs from the transformants were analyzed for the presence and the relative number of Dictyostelium tRNA gene transcripts. Substantial differences of steady-state levels of RNA transcribed were detected dependent on the 5&-flanking sequence of the tRNA gene. Minute structural changes, such as inserting two additional nucleotides in front of a tRNA gene, can lead to drastic activity changes. The efficiency of tRNA gene transcription can be conferred by sequences located more than 40 nucleotides upstream from the 5& end of the mature tRNA coding region.Enzymes&Restriction endonucleases BamHI, EcoRI, HaeIII, HindII, HindIII, TaqI and ClaI (EC 3.1.21.4)&DNA polymerase (large fragment, Klenow enzyme) (EC 2.7.7.7)&T4 DNA ligase (EC 6.5.1.1)
AdvertisementTaqI限制性内切酶酶切质粒需多长时间(质粒,限制性内切酶酶切,酶切,载体) - DNA技术 - 生物秀
标题: TaqI限制性内切酶酶切质粒需多长时间(质粒,限制性内切酶酶切,酶切,载体)
摘要: [TaqI限制性内切酶酶切质粒需多长时间(质粒,限制性内切酶酶切,酶切,载体)] 我将一个基因片段连到T载体上，这个基因片段上有TaqI酶切位点，BamHI及TaqI酶切鉴定片段连入T载体的方向，如果正确的话，应该有约3000bp及约600bp条带，但酶切结果条带很多，约3600bp； 约1500bp； 约950bp； 约800bp；约470bp，BamHI酶切3小时30度，TaqI酶切3小时65度，我不知TaqI酶切时间是否长了，还是T载体（TakaRa pMD18-T ve 关键词:[酶切 载体 限制性内切酶酶切 质粒 酶切位点 条带 基因片段]……
我将一个基因片段连到T载体上，这个基因片段上有TaqI酶切位点，BamHI及TaqI酶切鉴定片段连入T载体的方向，如果正确的话，应该有约3000bp及约600bp条带，但酶切结果条带很多，约3600bp； 约1500bp； 约950bp； 约800bp；约470bp，BamHI酶切3小时30度，TaqI酶切3小时65度，我不知TaqI酶切时间是否长了，还是T载体（TakaRa pMD18-T vector)上其他位置有TaqI酶切位点，TakaRa pMD18-T vector的多克隆位点上无TaqI酶切位点，请大家帮我分析一下。
回复我想出现这种情况可能有三个原因：第一，酶切不完全，存在3600bp的片段不正好是bp的长度吗？第二：质粒提得不太好，或是酶切体系不合适，内切酶有星活性，所以有很多杂带；第三：当然是我们最不希望看到的一种，你的插入不正确。其实鉴定片段插入的方向，用PCR就可以了，只要在载体上找一引物，用基因上的相对应的引物，如果有目的条带的扩增，就表明是正确的。回复你只考虑了你片段上的酶切位点,而没有查载体的位点.TakaRa pMD18-T vector上有4个TaqI酶切位点,分别在400,430,906,2350.这样酶切当然位有很多条带,以致无法分析.如果你的目的片段上有BamHI位点且偏向一侧的话,只要BamHI单酶切就可以验证正反向连接了.
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