&& 查看话题
怎样鉴定基因重组中质粒是否被限制性内切酶切好？
各位高手，
& && && && & 如题，怎么样进行对基因重组中的被切质粒进行鉴定？还有个问题，被切质粒再被SAP去磷酸化后用连接酶是否还能把它连上？如果不能，那为什么被切后去磷酸化的质粒还能与外源基因（目的基因片段，也被切好了）用连接酶连接？这是不是说明碱性磷酸酶只能防止被切后的质粒自身环化，但不能阻止被磷酸化的质粒与外源基因片段连接？
& && && && &&&等高手解答，谢谢！:)
不好意思，因为着急，可能写的不是很清楚。就是在基因重组过程中，需要对质粒载体进行限制性内切酶酶切，以便于目的基因的插入。这个个步骤中，怎样鉴定这个质粒是否被且完全？换句话，怎么才能知道这个质粒已经被切好了？这块儿是不是可以设计个实验来进行鉴定？
不好意思，我竟然没看懂是什么意思？什么叫基因重组的被切质粒？ 你是要构建用于基因重组的质粒还是怎么一回事？ Originally posted by yuxia82012 at
不好意思，我竟然没看懂是什么意思？什么叫基因重组的被切质粒？ 不好意思，因为着急，可能写的不是很清楚。就是在基因重组过程中，需要对质粒载体进行限制性内切酶酶切，以便于目的基因的插入。这个个步骤中，怎样鉴定这个质粒是否被且完全？换句话，怎么才能知道这个质粒已经被切好了？这块儿是不是可以设计个实验来进行鉴定？ 我一般先酶切少量质粒跑电泳，点未酶切质粒作为对照，看酶是否能切动，如果双酶切的话，分别做两个单酶的酶切，确定酶没有问题的话就继续往下做了。
做连接的人都担心质粒酶切不完全，我觉得确定酶没有问题的后，做连接时，载体取少量（20 uL体系，100 ng左右的载体）用于酶切一般都能切完全。反正用于连接时载体只要少量就够了（20 uL 连接体系，20 ng左右载体）。
如果单酶切做连接的话，最好载体酶切后去磷酸化，这样能够防止载体自连，因为片段没有去磷酸化，也就当然可以和片段连接了。 Originally posted by yuliansheng at
各位高手，
& && && && & 如题，怎么样进行对基因重组中的被切质粒进行鉴定？还有个问题，被切质粒再被SAP去磷酸化后用连接酶是否还能把它连上？如果不能，那为什么被切后去磷酸化的质粒还能与外源基因（目的基因 ... 1.关于质粒载体的鉴定风两种情况：1）质粒为单酶切，这种情况鉴定比较简单，酶切完后跑个琼脂糖凝胶电泳就行了，最好拿原始质粒（即不酶切的）做一下对照，如果载体中的酶切位点单一，那么单酶切完后只会产生一条线性条带；如果酶切位点有两个，那就产生两条线性条带。2）质粒为双酶切，这个比较麻烦，建议你在第一次酶切载体时使用交叉酶切的方法，即把载体分在两个酶切体系中分别用两种酶进行单独的酶切，跑胶鉴定是否能切开，如果酶切没问题割胶回收后再分别用另一种酶切。只要两个酶切位点离得不是特别近的话这种酶切方法最保险。最后可以把两管放一起割胶回收
2.关于去磷酸化问题：载体和片段只所以能够进行连接是因为在连接处可以形成3-5磷酸二脂键。载体去磷酸化后没有了磷酸集团，只有羟基，所以无法自连，但是片段两端各有一个磷酸集团，所以可以与载体两端各形成一个二脂键，再通过细胞内酶的修复作用就可以连接形成完整的重组质粒。 Originally posted by 空谷幽风 at
1.关于质粒载体的鉴定风两种情况：1）质粒为单酶切，这种情况鉴定比较简单，酶切完后跑个琼脂糖凝胶电泳就行了，最好拿原始质粒（即不酶切的）做一下对照，如果载体中的酶切位点单一，那么单酶切完后只会产生一 ... 说的我是一头雾水，可能我的理解力太差了。"载体去磷酸化后没有了磷酸集团，只有羟基，所以无法自连，但是片段两端各有一个磷酸集团，所以可以与载体两端各形成一个二脂键，再通过细胞内酶的修复作用就可以连接形成完整的重组质粒。"
怎么一会说有，一会说没有？能在解释一下吗？ 单切的话呈线性跑胶就能看出来，双切的话由于切掉的片段很小很难分辨，建议你用一个原来已经连接去片段的质粒来作载体，切开了一目了然。
你说的鉴定载体做得如何，刚进实验室时一般转化都做个负对照来查看，就是把载体当做连接产物转到大肠中，涂板看长得单克隆的数目，数目较多说明绝大部分是自连，反之这个载体质量就相当可以了 加我QQ吧，，这里说太慢了 Originally posted by 空谷幽风 at
1.关于质粒载体的鉴定风两种情况：1）质粒为单酶切，这种情况鉴定比较简单，酶切完后跑个琼脂糖凝胶电泳就行了，最好拿原始质粒（即不酶切的）做一下对照，如果载体中的酶切位点单一，那么单酶切完后只会产生一 ... 载体和片段分清楚就好了，载体是你脱过磷的，没了磷酸集团，片段是你PCR得到的或者从其他质粒中切出来的，没有脱磷，带磷酸集团 影响酶切效果的主要因素如下：
1.质粒DNA的质量，如果质粒制备时有核酸酶后大量RNA污染，或者变性DNA太多，都会导致酶切不完全，进而导致克隆时背景很高。
2.另一个就是酶量，酶加少了，当然酶切不完全，但如果酶量加得过多，又会导致星活性（star activity),从而出现非特异性酶切。
现在有一款在线软件，可以直接用软件帮助计算出精确的酶量，就不太用担心酶切是否完全了。现在免费使用，用户名和密码都是test,&&你可以试一试/enzyme/login.php : Originally posted by susizheng at
我一般先酶切少量质粒跑电泳，点未酶切质粒作为对照，看酶是否能切动，如果双酶切的话，分别做两个单酶的酶切，确定酶没有问题的话就继续往下做了。
做连接的人都担心质粒酶切不完全，我觉得确定酶没有问题的后，做 ... 您好，我想问一下，如果我的酶是单酶切，又拿碱性磷酸酶去完磷酸后，怎么鉴定这个磷酸基团去除完全了，或者说是怎么鉴定我这个碱性磷酸酶是好用的，谢谢啦 : Originally posted by honey倩 at
您好，我想问一下，如果我的酶是单酶切，又拿碱性磷酸酶去完磷酸后，怎么鉴定这个磷酸基团去除完全了，或者说是怎么鉴定我这个碱性磷酸酶是好用的，谢谢啦... l磷酸化我也做过，效果不大好，所以不到万不得已不要用单酶切做连接。
如何考察磷酸酶是否好用，也只能看连接效果怎么样了，多挑些转化子，如果都是自连得空载体，说明磷酸酶不大好用了。 : Originally posted by 空谷幽风 at
1.关于质粒载体的鉴定风两种情况：1）质粒为单酶切，这种情况鉴定比较简单，酶切完后跑个琼脂糖凝胶电泳就行了，最好拿原始质粒（即不酶切的）做一下对照，如果载体中的酶切位点单一，那么单酶切完后只会产生一条线 ... 如果双酶切的两种酶最佳反应温度不一样的话，楼主这样的检验方法可行么？您实验中试过么？因为我是刚开始接触重组实验，所以疑问有点多。。双酶切的话不是应该从高温向低温切？我的实验里面两个位点离得好近（40多bp），maker是10000的，根本看不出来第二种酶切没切开啊。。。试题分析：基因重组指控制不同性状的基因重新组合，AD选项只有一种性状，故错误，C正确；基因重组发生在减数第一次分裂，B错误；
考点：本题考查基因重组，意在考查考生识记所列知识点，并能运用所学知识做出合理的判断或得出正确的结论的能力。
请在这里输入关键词：
请选择年级高一高二高三请输入相应的习题集名称(选填)：
科目：高中生物
下列各项中属于基因重组的是
①镰刀型细胞贫血症& ②大肠杆菌生产胰岛素& ③杂合的黄色圆粒豌豆产生绿色皱粒后代& ④“番茄-马铃薯”的培育& ⑤杂交瘤细胞生产单克隆抗体& ⑥纯合高茎豌豆培养成四倍体& ⑦花粉培养成单倍体植株& ⑧PCR扩增仪将一个DNA分子扩增出100万个DNA分子?
A.①②③④&&&&&&&&&&&&&&&& B.⑤⑥⑦⑧&&&&&& C.②③④⑤&&&&&&&&&& D.③
科目：高中生物
来源：学年山东淄博金山中学高三上期教学质量抽测生物卷（解析版）
题型：选择题
下列各项中属于基因重组的是①同源染色体的非姐妹染色单体交换片段? ②非同源染色体上非等位基因自由组合? ③染色体上的某一片段移接到另一条非同源染色体上? ④DNA碱基对的增添或缺失? ⑤杂合的黄色圆粒豌豆产生绿色皱粒后代? ⑥纯合高茎豌豆培养成四倍体? ⑦花粉培养成单倍体植株A．①②③??? B．⑤⑥⑦???? C．①②⑤???? D． ②④⑤ 
科目：高中生物
来源：学年山东淄博高三期末考试生物卷（解析版）
题型：选择题
下列各项中属于基因重组的是
①同源染色体的非姐妹染色单体交换片段&&&&& ②非同源染色体上非等位基因自由组合
③染色体上的某一片段移接到另一条非同源染色体上&& ④DNA碱基对的增添或缺失
⑤杂合的黄色圆粒豌豆产生绿色皱粒后代&&&&& ⑥纯舍高茎豌豆培养成四倍体&&&&&&&& ⑦花粉培养成单倍体植株
A．①②③&&&&&&&&&&&&&&&& B．⑤⑥⑦&&&&&&&&&&&&&&&&& C．①②⑤&&&&&&&&&&&&&&&&& D．②④⑤
科目：高中生物
来源：2010年甘肃省高二下学期期中考试生物卷
题型：选择题
下列各项中属于基因重组的是
①镰刀型细胞贫血症②杂合的黄色圆粒豌豆产生绿色皱粒后代③纯合高茎豌豆培养成
四倍体④花粉粒培养成单倍体植株⑤1个DNA通过复制产生出多个DNA分子⑥加热
杀死的S型肺炎双球菌+R型细菌 R 型菌落+S型菌落
A．①②&&& &&&&&&&& B．③④&&& &&&&&&&& C．⑤⑥&&& &&&&&&&& D．②⑥考点：基因重组及其意义
分析：阅读题干和题图可知，本题的知识点是基因重组和基因突变，梳理相关知识点，分析图解，根据问题提示结合基础知识进行回答．B图和C图是利用基因重组进行转基因工程；D图是减数分裂过程中，同源染色体分离的同时，非同源染色体自由组合，属于基因重组．
解：基因突变是基因结构的改变，包括碱基对的增添、缺失或替换．航天育种是诱变育种，利用失重、宇宙射线等手段诱发生物基因突变，所以太空椒的培育没有发生基因重组．故选：A．
点评：本题考查基因重组的相关知识，意在考查考生理解基因重组概念的要点，把握知识间的内在联系的能力以及识图分析能力．
请在这里输入关键词：
请选择年级高一高二高三请输入相应的习题集名称(选填)：
科目：高中生物
下列有关人体免疫的叙述正确的是（　　）①血浆中溶菌酶的杀菌作用属于人体的第一道防线②抗原都是外来异物③人体分泌的乳汁中含有某些抗体④吞噬细胞可参与特异性免疫⑤过敏反应一般不会破坏组织细胞⑥HIV主要攻击人体的T细胞，引起自身免疫病⑦对移植器官的排斥是通过细胞免疫进行的．
A、①④⑤⑦B、①②③⑦C、③④⑤⑦D、②③⑥⑦
科目：高中生物
科学家从苏云金芽孢杆菌中分离出杀虫晶体蛋白基因（简称Bt基因）培育转基因抗虫棉，下列分析正确的是（　　）
A、通过PCR技术扩增Bt基因时需用TaqDNA聚合酶打开DNA双链B、构建基因表达载体需使用限制酶、DNA连接酶C、在棉花细胞中检测出Bt基因转录出的mRNA是培育成功的标志D、需将导入Bt基因的棉花细胞进行高压蒸汽灭菌
科目：高中生物
如图为寒冷刺激下甲状腺激素分泌的调节示意图．据图分析，下列叙述错误的是（　　）
A、寒冷刺激使下丘脑分泌激素增加的结构基础是反射弧B、图中M促进甲状腺激素分泌的过程属于体液调节C、甲状腺激素作用的靶细胞还包括下丘脑细胞和垂体细胞D、炎热刺激下，甲状腺激素对下丘脑和垂体起正反馈调节
科目：高中生物
图1和图2是人体免疫调节的模式图，下列有关叙述错误的是（　　）
A、图中能够特异性识别抗原的细胞有细胞B、细胞C、细胞E、细胞GB、细胞E和细胞D均由细胞C分化而来，在没有变异的情况下两者的DNA和RNA完全相同C、图1中，当同种病原体再次侵入机体时，主要通过④⑦⑧所示过程来消灭病原体D、与病毒类似，结核杆菌、麻风杆菌等胞内寄生菌在侵入宿主细胞后，机体将通过图2所示免疫过程使它们失去寄生的基础，最终被吞噬消灭
科目：高中生物
有关育种的说法，正确的是（　　）
A、多倍体育种过程都要使用秋水仙素B、利用基因工程技术可定向培育优良品种C、用于大田生产的优良品种都是纯合子D、杂交育种与单倍体育种的原理都是基因重组
科目：高中生物
下列不属于生态系统的信息传递在农业生产中的应用的是（　　）
A、利用人工合成的化学信息激素吸引昆虫前来，提高传粉率和结实率B、草原返青时的绿色，为食草动物提供可以采食的信息C、延长光照时间，提高家禽产蛋率D、利用音像设备发出不同的声音信号，诱捕或驱赶某些动物
科目：高中生物
玉米植株的高度达到1.5m以上时，遇到大风雨天气，很容易造成倒伏．某玉米品种种群密度、茎直径、倒伏率之间的关系如图1、图2所示．玉米倒伏后的状况如图3所示．下列有关说法正确的是（　　）
A、合理密植可有效地降低玉米在大风雨天气中的倒伏率B、根据图1、图2可以推知，种群密度越大，玉米的倒伏率越高C、倒伏后的玉米茎背地竖直向上生长，其主要外界因素是光照D、与图3中倒伏玉米茎竖直向上生长有关的植物激素主要是生长素
科目：高中生物
图I为神经系统调节内分泌功能的三种模式，图2为某髙血糖患者体内存在的生理过程．请据图回答下列回答（1）若甲模式中，激素X为甲状腺激素，则垂体产生的激素可以直接调节腺体I，该过程中垂体的分泌活动会受到&（填激素名称）的调节．（2）抗利尿激素的合成和分泌是通过图中模式，当机体细胞外液渗透压升髙时，刺激，引起抗利尿激素的分泌增加．（3）当机体时，可以通过丙模式调节增加胰岛素的分泌，兴奋在A处的传递方向为（填“向上”、“向下”、“双向”）．（4）据图I可知该患者髙血糖的原因，请制定针对性的治疗措施：．怎么区分基因重组，自由组合，分离定律，他们的定义是什么_百度作业帮
怎么区分基因重组，自由组合，分离定律，他们的定义是什么
怎么区分基因重组，自由组合，分离定律，他们的定义是什么
分离定律是只有一对等位基因是分离，然后随机进入雌雄配子。自由组合是两对不在同一条染色体上的基因，控制同一性状的等位基因分离，非等位基因自由组合。至于基因重组和突变就是为生物进化提供原始材料。}