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【求助】小于100bp的PCR产物如何扩增检测！！！
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这个帖子发布于6年零260天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位战友：
因需要，我最近扩一个小于100bp的产物，模板的GC含量高于74%，产物的GC含量大约是64%，请问如何设置循环条件！最重要的，请问其产物用多大浓度的琼脂糖胶检验，100bp 的MARKER是否可以 ，我的产物大约在80bp。最后 扩增的80bp产物能否做为模板再进行扩增，望各位前辈不吝赐教，不胜感激！！谢谢
不知道邀请谁？试试他们
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这么短给个5s或者10s足够，然后你这么高的GC，引物的TM也高，不给也行琼脂糖电泳是带上阴性，有条带会明显的比较亮。再扩增跟别的一样的
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我也要扩一个小片段，才60bp，引物都不知道怎么设计比较好？lz引物长度设计的多少啊？ps：现在做了么？效果如何？我马上就准备设计引物了，希望能相互交流一下QQ或者email都可以
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楼上的，才那么小，序列已知么？不能直接合成？
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是不是可以试试合成两个短的序列，然后用重叠PCR扩增？
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关于丁香园有谁用过TAKARA的100bpDNA LADDER MARKER不清楚(产物电泳) - PCR实验 - 生物秀
标题: 有谁用过TAKARA的100bpDNA LADDER MARKER不清楚(产物电泳)
摘要: [有谁用过TAKARA的100bpDNA LADDER MARKER不清楚(产物电泳)] 有谁用过TAKARA的100bpDNA LADDER MARKER？我的PCR产物电泳时挺清楚，为何MARKER却不清楚？我同时用的是5ul和8ul的量，明显5ul很不清晰！为什么啊？ 关键词:[产物电泳]……
有谁用过TAKARA的100bpDNA LADDER MARKER？我的PCR产物电泳时挺清楚，为何MARKER却不清楚？我同时用的是5ul和8ul的量，明显5ul很不清晰！为什么啊？
回复5ul的Marker已经是过量很多了，好的Marker用2ul就很清晰了，当然要看它的浓度，不过Takara的我们也用过，是不怎么好。回复他推荐的就是5ul/每次，能用一百次。不过按他的加样真的不清楚啊！我真不知道是怎么回事，所以请各位帮一下忙，介绍点经验！不行就得找他个小日本算帐啦！！！回复实验室经常用，5ul已经足够，条带很清楚。TAKARA的marker挺不错的。你的marker是不是放了很久？或者反复冻融？我们买回marker后，一般要分装成小管再用。回复我用过TAKARA的DL2000，每次只要加样2－3ul，只要胶没问题，电泳液没问题，跑出来非常漂亮，反复冻融也没什么问题。你用的不好有没有考虑胶的问题，电泳液缓一下再跑回复TAKARA的DL2000,很好的,十分清晰回复100bp和2000bp的我都经常用，感觉还可以啊，一般加2-3ul后都可以跑出很清晰的条带。我想应该是胶的问题吧。回复我买了宝的TaKaRa φx174-Hae IIIdigest DNA Marker，用来检测100bp左右的产物。PCR产物在糖上倒是很清楚，但是Marker在310bp后就不清楚了，无法判断我的扩增出来的是否目的基因。后来我将量加至8μl，还是不行。有位老师建议我应该用DL2000，但DL2000最小的条带是100bp，能检测90～100bp之间的吗？回复我的TAKARA的100bp LADDER MARKER，刚买的，反复冻融了几次，可是不至于出问题啊！看来可能是别的原因！回复可是同仁们，为什么我的PCR产物挺清楚，而MARKER不清晰呢？有谁能解释一下？非常渴望解答！在此先谢谢了！！！！回复国产的marker本来质量就不好。我用老板从美国带来的promega的marker都用8ul。你就用8ul吧！回复我用过好几种的marker，我感觉即使是同一个公司的产品也是有很大出入的，根据它的说明使用，有些效果很好，而有些则不然，这里面当然有以上各位分析的问题，在使用的过程中，可以把你的MARKER稀释成几个浓度，找到适合你的电泳条件的最适浓度。回复兄弟，这种问题我也遇见过，PCR产物很清楚而marker不清楚，这应该是你跑电泳的问题，你的梳尺的宽度是多少，如果宽的话，跑出的marker就很模糊，所以建议换成比较薄一些的如2mm的就可以，实在不行你可用衡流100mA跑快一些，5ul的用量足够了回复梳尺的宽度是5毫米左右，比较薄的好？我试试看！衡流100mA？说实话这些我不太懂，参经发过一个求助是关于电泳条件如何设定的，可能是太简单了，没几个人理我，anxingpijiu兄，电泳条件怎么设啊？能告诉一点吗？谢谢啦！
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电话：021-[求助] PCR产物条带很淡最近做的PCR一直条带很淡,已经调了一些条件,还是没有效果.
目前是这样的：目的片段大约2.5kb,退火温度55度,从电泳的结果看来目的条带很整齐,也没有非特异性扩增,就是非常淡,我没有办法回收,而且存在引物二聚体（这是我的引物无法避免的）.退火温度调低1度就会出现非特异性扩增,调高一度条带就会消失.请教一下各位,条带很淡的原因?有什么改进的办法吗?谢谢!
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加多几个循环,或者换好一点的Taq酶
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PCR产物WT只有100多BP 测序后比对
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