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考马斯亮蓝G－250染色法测定蛋白含量
&G－250染色法测定蛋白含量&1、实验目的：掌握考马斯亮蓝G－250染色法测定蛋白含量的原理和方法。2、实验内容实验原理：考马斯亮蓝G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（&max），由465 nm变为595 nm，溶液的颜色由棕黑色变为蓝色。经研究认为，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别色精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。在595 nm下测得的吸光度A595 nm,与蛋白质浓度成正比。 试剂与材料：1. 标准蛋白质溶液称取牛血清白蛋白（BSA）10mg，溶于100ml水，配置成100&g/ml的标准蛋白质溶液。2. 考马斯亮蓝G-250染料试剂100 mg考马斯亮蓝G-250溶于50 ml95％的乙醇后，再加入120 ml85％的磷酸，用水稀释至1 L。3. 材料：豆芽操作步骤：1标准曲线的绘制取试管6支按下表操作，摇匀，2～5 min后比色（595 nm），1管为空白对照管。作吸光度-蛋白浓度曲线。
mg/ml标准蛋白质（ml）
蒸馏水（ml）
考马斯亮蓝G-250染料（ml）
2样品蛋白浓度测定准确称取豆芽1.0000g，加入用10mL研磨成匀浆后，5000转/分钟离心10分钟，将上清液转入小烧杯中。准确吸取样品上清液1 ml置干净试管中，加入考马斯亮蓝G-250染料5 ml并摇匀，2～5 min后比色（595 nm）。对照标准曲线求出样品蛋白浓度。是属于国内合资企业，也是生命科学试剂的国际运营商，销售网络已遍布全国各个科研单位，销售的产品涵盖了生物工程领域的各个方面，可提供优质的常规生化试剂、、细胞因子、抗体、等方面相关产品。在长期的销售实践中，我们形成了独特的市场优势：产品齐全、价格合理、经营稳健、信息反馈及时、并能随时随地享受国外供应商最直接、最周到、最完善的售后服务。
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8月3日，上海市食品药品监督管理局制订的《上海
根据《国务院关于改进加强中央财政科研项目和资金管理的若干意见》（国发[2014]11号）、
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【求助】考马斯亮蓝R-250和考马斯亮蓝G-250究竟有何区别？
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考马斯亮蓝R-250和考马斯亮蓝G-250究竟有何区别？
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他们的用途差不多，结构式与分子量不一样。 考马斯亮蓝R-250详细信息：考马斯亮蓝G-250详细信息：
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一般R250 染蛋白，G250 一般测蛋白浓度，也可染胶，敏感性更高但较慢脱色较难。G250常用的蛋白染料，作定性试验用,染色后为蓝绿色;R250较敏感,，做定量实验用,染胶效果较好.染色后为红蓝色考马斯亮蓝R250（Coomassie brilliant blue R250）。C45H44O7H3S2Na，MW=824，λmax=560―590nm。染色灵敏度比氨基黑高5倍。尤其适用于SDS电泳微量蛋白质染色。但蛋白质浓度超出一定范围时，对高浓度蛋白的染色不符合Beer定律，用作定量分析时要注意这点。考马斯亮蓝G250，又名Xylene brilliant cyaninG。比考马斯亮蓝R250多二个甲基。MW=854；λmax=590―610nm。染色灵敏度不如R250，但比氨基黑高3倍。优点在于它在三氯乙酸中不溶而成胶体，能选择地染色蛋白而几乎无本底色。所以常用于需要重复性好和稳定的染色，适于作定量分析。
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平时还真么注意这些问题是该好好学习一下了
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在蛋白质染色中，目前考马斯亮蓝染色法最为常用，1965年考马斯亮蓝应用于聚丙烯酰胺凝胶染色，它步骤简便、灵敏度较高，可进行定量扫描。它可分为考马斯亮蓝R-250和考马斯亮蓝G-250两类：
考马斯亮蓝R-250（Coomassie brilliant blue
R250）C45H44O7H3S2Na，MW=824，λmax=560―590nm。染色灵敏度比氨基黑高5倍。尤其适用于SDS电泳微量蛋白质染色。但蛋白质浓度超出一定范围时，对高浓度蛋白的染色不符合Beer定律，用作定量分析时要注意这点。
考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）又名 Xylene brilliant
cyaninG。比考马斯亮蓝R250多二个甲基。MW=854；λmax=590―610nm。染色灵敏度不如R250，但比氨基黑高3倍。优点在于它在三氯乙酸中不溶而成胶体，能选择地染色蛋白而几乎无本底色。所以常用于需要重复性好和稳定的染色，适于作定量分析。
考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1
000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
两者比较：
结构：考马斯亮蓝R-250为三苯基甲烷(triphenylmethane)，每个分子含有两个SO3H基团，本身偏酸性，磺酸基与蛋白质的碱性基团结合形成染料—蛋白质复合物；R250中的R代表Red，偏红
考马斯亮蓝G-250为二甲花青亮蓝(xylene cyanine brilliant
blue)，是一种甲基取代的三苯基甲烷。G250中的G就是Green，偏绿。
2 灵敏度：考马斯亮蓝R-250灵敏度比氨基黑高5倍；考马斯亮蓝G-250染色灵敏度不如R250，但比氨基黑高3倍。
染色速度：R250属于慢染，脱色脱的完全，G250属于快染，脱色脱的不彻底。G250染色迅速，着色深的蛋白质区带在数秒内即可显现出来，约45分钟后着色最深，
4 用途：（1）考马斯亮蓝R-250是通过范德瓦尔键与蛋白质结合，考马斯亮蓝R250尤其适用于SDS-PAGE电泳微量蛋白质的染色。
（2）考马斯亮蓝R-250与不同蛋白质结合呈现出基本相同的颜色，并且在比较宽的范围内（15—20
?g），扫描峰的面积与蛋白量呈线性关系，常用于定量试验用
注意：蛋白质浓度超出一定范围时，对高浓度蛋白的染色不符合Beer定律，用作定量分析时要注意这点。
（3）经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品可用考马斯亮蓝R250染色。染色1～2小时或过夜,然后用脱色液脱色；染色液（0.1%
考马斯亮蓝 R250，40% 甲醇10% 冰醋酸
（4）考马斯亮蓝G-250优点在于它在三氯乙酸中不溶而成胶体，能选择地染色蛋白而几乎无本底色。所以常用于需要重复性好和稳定的染色，适于作定量分析。在进行小分子量蛋白的Tricine电泳是常用G250染色，
（5）一般R250 染蛋白，G250 一般测蛋白浓度，也可染胶，但较慢脱色较难。
（6）G250常作为定性试验用,染色后为蓝绿色;R250较敏感，常作为定量实验用,染胶效果较好，染色后为红蓝色。
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Mark！！好东西！
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非常好，谢谢了
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蛋白质含量测定（考马斯亮蓝G－250法
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考马斯亮蓝G250
产品价格：
产品型号：
公司名称：上海信裕生物科技有限公司
所&在&地：
发布时间：
考马斯亮蓝G250本公司生化试剂库不仅品种齐全，覆盖整个生命科学研究领主要用途：域；要用途：而且包装规格灵活多样，满足不同实验人员的不同需求，帮助您在加快实验进程的同时，节约实验经费，有意者，望来电垂询订购！
产品详细信息
考马斯亮蓝G250Coomassie brilliant blue G250BR别名: 考马斯亮兰G250 , 酸性蓝90 , 考马斯亮蓝G , 康美赛蓝G250 , 酸性艳蓝G , 亮蓝 , Brilliant blue G , Serva blue G , Coomassie brilliant blue G , Brilliant indocyanin G , Brilliant blue G 250 , Acid blue 90 , C.I. 42655 考马斯亮蓝G250产地 中国所在目录 色素 CAS号 分子式 C47H48N3NaO7S2分子量 854.02
考马斯亮蓝G250产品性质及属性 级别 BR使用方法1. 将电泳后的PAGE胶（8㎝×10㎝）取下放入容器中，加入50ml双蒸水或去离子水，加热至沸腾后停止（可选 继续在脱色摇床上摇动5分钟），弃去水溶液。2. 加入20ml至25ml本品（按盛胶容器的大小而定，以浸没胶面为准），加热至沸腾后停止（可选 继续在脱色摇床上摇动5分钟），弃去水溶液，此时蛋白条带应已可见。3. 加入约50ml双蒸水或去离子水，加热至沸腾后停止（可选 继续在脱色摇床上摇动5分钟）。4. 弃去水溶液，加入双蒸水或去离子水即可完成脱色，观察结果考马斯亮蓝G250注意事项1. 染色前的清洗步骤（使用方法第1步）中，水的质量非常重要，质量越好灵敏度越高2. 脱色时可用自来水清洗3. 若要得到无背景的染色胶，可重复脱色步骤或将胶放在水中。4. 经本产品染色的PAGE胶，胶的缩涨度小于5%，染色后的胶可在水中放置数月而无明显脱色。5. 每次加热后，继续在脱色摇床上摇动5分钟，可增强染色效果6. 本染色液微有腐蚀性，请带手套操作，使用后请盖好瓶盖，密封保存。性状 液体。以考马斯亮兰G250为主要成分配制而成。用途 生化研究。可用于SDS-PAGE或非变性PAGE蛋白电泳胶的快速染色。由于配方中不含甲醇、乙酸等物质，因此在整个染色过程中清洁、安全，并且用水即可脱色。整个染色脱色过程只需10分钟即可得到清晰可见的结果。灵敏度高，可见10ng蛋白带保存 2～8℃xyP100084亚硝酸钾, AR,97%xyP100085亚硝酸钾, CP,95%xyP100086亚硝酸钾, ACSxyP100385焦磷酸钾, AR,99%xyP101098三氟甲磺酸钾, 98%xyP101302酸氢钾, AR,99.8%xyP101305酸氢钾, GR,99.8%xyP101306酸氢钾, ACS, 99.95-100.05%xyP101327次磷酸钾, AR,99%xyP102035羟基柠檬酸钾, 95%xyP103817金属钾, 99%xyP103819钾标准溶, 浓度范围:1.35-4.29(mg/L),分析标准品xyP103994高酸钾, 99.99% metals basisxyP104004高铼酸钾, 99%xyP111635硝酸钾, GR,99.0%xyP111637硝酸钾, ACSxyP111638硝酸钾, 用于植物细胞培养,≥99.0%xyP111639硝酸钾, 用于细胞培养,≥99.0%xyP111645硝酸钾, 99.99% metals basisxyP111646硝酸钾, 99.997% metals basisxyP112133化钾, GR,99.8%xyP112134化钾, AR,99.5%xyP112135化钾, CP,99.5%xyP112136化钾, PTxyP112138化钾, SPxyP112140化钾, 分析标准品,99.98%xyP112141化钾, 分析标准品,K（99.97%）/Cl（100.00%）xyP112142化钾, ≥99.99% metals basisxyP112145化钾, ≥99.995% metals basisxyP112168重铬酸钾, 99.99% metals basisxyP112206焦硫酸钾, AR,98%
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