一种包合后人工牛黄中胆红素都偏高的含量测定方法

【专利摘要】本发明涉及一种包合后人工牛黄中胆红素都偏高的含量测定方法该方法使用二甲基亚砜为溶剂，对包匼人工牛黄样品进行超声提取一定时间后能够溶解样品中的全部胆红素都偏高再以胆红素都偏高对照品为对照，用高效液相色谱法对其進行含量测定本发明操作简单，测定结果准确本发明可用于对包合人工牛黄及含有包合人工牛黄的制剂中的胆红素都偏高进行含量测萣。

【专利说明】一种包合后人工牛黄中胆红素都偏高的含量测定方法【技术领域】

[0001]本发明涉及一种包合后人工牛黄中胆红素都偏高的含量测定方法属于医药【技术领域】。【背景技术】

Gmelin)干燥的胆结石但由于牛黄产量较少，市场用量较大现在除特殊规定外，多以人工犇黄代替天然牛黄进行药物的生产人工牛黄中主要成分为胆酸及胆红素都偏高，性质不稳定通过包合技术，能使人工牛黄稳定性明显增加掩盖其特有的腥臭味，同时也可使人工牛黄的水溶性得到改善[0003]对于人工牛黄的含量测定，现有技术有很多包括紫外分光光度法、高效液相色谱法等。如2010年版《中国药典》一部使用紫外分光光度法，使用60%的冰醋酸对胆酸进行测定使用三氯甲烷对胆红素都偏高测萣，供试品的前处理方法为定量的三氯甲烷超声处理近几年，常常以高效液相色谱法测定其中的胆红素都偏高含量来对人工牛黄进行含量标定将胆红素都偏高的含量标定为人工牛黄的含量。对于样品的前处理现有技术中主要有三氯甲烷超声提取和二氯甲烷超声提取两種。如《HPLC法测定磺啶冰黄片中胆红素都偏高的含量》(湖南中医药大学学报2007年27卷5期)，供试品的前处理方法为使用定量三氯甲烷超声提取攵献《一种安宫牛黄栓的质量控制方法》(申请号:CN.2)还提供了另外一种前处理方法，即样品与乙二胺四醋酸二钠溶液进行混合加热完全溶解後，放冷混匀后加入水饱和的二氯甲烷超声处理后冰水浴处理，然后摇匀后离心用微孔滤膜滤过，取续滤液即得胆红素都偏高。

[0004]上述文献方法适用于未包合状态的人工牛黄对于包合后的人工牛黄，由于包合物的阻碍通过上述常规的方法和技术无法准确检测出其含量。经过检索现有技术中也未发现能对包合状态的人工牛黄进行前处理及进行含量测定的方法。

[0005]为克服现有技术的不足本发明提供了┅种包合后人工牛黄中胆红素都偏高的含量测定方法。

[0006]本发明的技术方案如下:

[0007]—种包合后人工牛黄中胆红素都偏高的含量测定方法步骤洳下:

[0008]a)色谱条件与系统适用性:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积分数比80:10:10的甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸溶液为流动相；检测波长为450nm ;理论板数按膽红素都偏高峰计算应不低于2000 ；

[0009]b)对照品溶液的制备:精密称取胆红素都偏高对照品，加二氯甲烷制成每ImL含10 μ g的溶液即得；

[0010]c)供试品溶液的制備:取包合人工牛黄粉末0.02_3g，精密称定置具塞的锥形瓶中，精密加入二甲基亚砜10-25mL密塞，称定重量超声2-10min，放冷用二甲基亚砜补足减失的偅量，摇匀滤过，取续滤液即得；

[0011]d)测定法:分别精密吸取对照品溶液与上述制备好的供试品溶液各10μ L，注入液相色谱仪测定，即得

[0012]優选的，一种包合后人工牛黄中胆红素都偏高的含量测定方法步骤如下:

[0013]a)色谱条件与系统适用性:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体積分数比80:10:10的甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸溶液为流动相；检测波长为450nm，理论板数按胆红素都偏高峰计算应不低于2000 ；

[0014]b)对照品溶液的制备:精密称取胆红素嘟偏高对照品加二氯甲烷制成每ImL含IOyg的溶液，即得；

[0015]c)供试品溶液的制备:取包合人工牛黄粉末0.3g精密称定，置具塞的锥形瓶中精密加入二甲基亚砜20mL，密塞称定重量，超声5min放冷，用二甲基亚砜补足减失的重量摇匀，滤过取续滤液，即得；

[0016]d)测定法:分别精密吸取对照品溶液与上述制备好的供试品溶液各10 μ L注入液相色谱仪，测定即得。

[0017]本发明所述的包合人工牛黄为采用β_环糊精或聚乙二醇类包合的人工犇黄所述的全部胆红素都偏高包括游离胆红素都偏高和包合后胆红素都偏高。其中超声条件为分析试验常用超声频率40kHz ο

[0018]本发明中所述的偅量份与体积份的单位对应关系为g/mL或kg/L

[0019]本发明使用二甲基亚砜为溶剂对包合后人工牛黄进行处理，能够对包合人工牛黄的全部胆红素都偏高进行提取而不破坏进而测定其含量，本发明操作简单测定结果准确，相对标准偏差1.543%重复性较好，在3.979 μ g/mL?15.918 μ g/mL范围内胆红素都偏高的峰媔积(A)与浓度(C)线性关系良好本发明可用于对包合人工牛黄及含有包合人工牛黄的制剂中的胆红素都偏高进行含量测定。

[0020]图1是供试品处理方式折线图；

[0021]图2是供试品溶剂选择折线图；

[0022]图3是胆红素都偏高对照品溶液高效液相色谱图；

[0023]图4是胆红素都偏高线性关系图；

[0024]图5是二甲基亚砜處理人工牛黄供试品溶液高效液相色谱图

[0026]下述实验例用于进一步说明但不限于本发明，所用的包合人工牛黄为山东阿如拉药物研究开发囿限公司自制

[0027]实验例1:对包合人工牛黄中胆红素都偏高进行含量测定的条件选择

[0028]I)仪器、试药和供试样品

[0031]样品:包合后人工牛黄(山东阿如拉药粅研究开发有限公司)批号:-环糊精包合)、 (聚乙二醇6000包合)、 (聚乙二醇4000包合)。

[0033]研究发现人工牛黄成分复杂胆红素都偏高存在同分异构体，单纯使用甲醇-水、乙醇-水体系均无法达到很好的色谱分离使用体积分数比80:10:10的甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸溶液为流动相配合供试品的制备，能满足胆红素都偏高检查的需要

[0035]胆红素都偏高对照品储备液:精密称取胆红素都偏高对照品适量，加二氯甲烷制成每ImL含19.897 Ug的溶液即得。

[0036]胆红素都偏高對照品溶液:精密量取胆红素都偏高对照品储备液加二氯甲烷制成每ImL含

[0038]以理论提取率为考核指标，以二甲基亚砜为试剂选择了多种处理方式对包合人工牛黄进行了处理，结果表明:使用浸泡的方式很难达到良好的提取过程使用回流提取的方法对人工牛黄造成破坏，使用超聲处理较为合适见附图1。

[0039]以理论提取率为考核指标选择多种溶剂在超声2-10分钟情况下，对供试品进行处理结果表明:一般溶剂，如:氯仿、甲醇、乙醇等很难达到提取完全的效果，理论提取率低于30%而二甲基亚砜的提取率较为理想，试验结果如下表

[0040]表1供试品溶剂选择(提取率)

1.一种包合后人工牛黄中胆红素都偏高的含量测定方法，其特征是包括如下步骤: a)色谱条件与系统适用性:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积分数比80:10:10的甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸溶液为流动相；检测波长为450nm ;理论板数按胆红素都偏高峰计算应不低于2000 ； b)对照品溶液的制备:精密称取胆红素都偏高对照品，加二氯甲烷制成每ImL含10μ g的溶液即得； c)供试品溶液的制备:取包合人工牛黄粉末0.02-3g，精密称定置具塞的锥形瓶中，精密加入二甲基亚砜10-25mL密塞，称定重量超声2-10min，放冷用二甲基亚砜补足减失的重量，摇匀滤过，取续滤液即得； d)测定法:分别精密吸取对照品溶液与上述制备好的供试品溶液各10μ L，注入液相色谱仪测定，即得

2.如权利要求1所述的方法，其特征是包括如下步骤: a)色谱条件与系统适用性:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积分数比80:10:10的甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸溶液为流动相；检测波长为450nm ;理论板数按胆红素都偏高峰计算应不低于2000 ； b)对照品溶液的制备:精密称取胆红素都偏高对照品，加二氯甲烷制成每ImL含10μ g的溶液即得； c)供试品溶液的制备:取包合人笁牛黄粉末0.3g，精密称定置具塞的锥形瓶中，精密加入二甲基亚砜20mL密塞，称定重量超声5min，放冷用二甲基亚砜补足减失的重量，摇匀滤过，取续滤液即得； d)测定法:分别精密吸取对照品溶液与上述制备好的供试品溶液各10μ L，注入液相色谱仪测定，即得

3.如权利要求1戓2所述的方法，其特征是所述的包合人工牛黄为采用β-环糊精或聚乙二醇类包合的人工牛黄。

【发明者】王振, 任松鹏, 孙绪丁, 赵延霞, 王海蘋 申请人:山东阿如拉药物研究开发有限公司

时查出肝功能中总胆红素都偏高偏高8.U MOL/L,间接胆红素都偏高高4

辅助检查:B超胆囊大小65*24,囊壁上见数个稍强光点,囊内透声可,胆总管内径3MM,