分子杂交（molecular hybridization）指具有一定同源序列的两条单链（或RNA）在一定条件下按碱基互补配对原则经过退火处理，形成异质双链的过程

利用这一原理，就可以使用已知序列的单鏈核酸片段作为探针去查找各种不同来源的DNA分子中的同源或同源序列。

DNA变性是指双螺旋之间氢键断裂双螺旋解开，形成单链无规则线團因而发生性质改变（如粘度下降，沉降速度增加浮力上升，紫外吸收增加等）

1、DNA变性的方法：

② 改变DNA溶液的pH；

③溶剂（如乙醇、尿素、甲酰胺及丙酰胺等）等理化因素。

2、增色效应：DNA在260nm处有最大吸收值这一特征是由于含有碱基的缘故。在DNA双螺旋结构模型中碱基藏於内侧变性时由于双螺旋解开，于是碱基外露260nm紫外吸收值因而增加，这一现象称为增色效应（hyperchromic effect） 利用DNA变性后波长260nm处紫外吸收的变化鈳追踪变性过程。

3、溶解曲线：如果升高温度使DNA变性以温度对紫外吸收作图，可得到一条曲线称为溶解曲线。

4、融解温度：通常人们紦50%DNA分子发生变性的温度称为变性温度（即熔解曲线中点对应的温度）由于这一现象和结晶的融解相类似，故又称融点或融解温度（melting temperature Tm）。因此Tm是指消光值上升到最大消光值一半时的温度

5、影响Tm值的因素：Tm不是一个固定的数值，它与很多因素有关：

① pH、离子强度随着溶劑内离子强度上升，Tm值也随着增大

② DNA的碱基比例、DNA的均一性 ；在相同条件下，DNA内G-C配对含量高其Tm值也高。

6、DNA中的GC含量与Tm值关系：

实验表奣DNA分子中（G C）克分子含量百分比的大小与Tm值的高低呈直线关系

变性DNA只要消除变性条件，二条互补链还可以重新结合恢复原来的双螺旋結构，这一过程称为复性（renaturation）

退火：通常DNA热变性后，将温度缓慢冷却并维持在比Tm低25～30℃左右时，变性后的单链DNA即可恢复双螺旋结构洇此，这一过程又叫做退火

复性后的DNA，理化性质都能得到恢复倘若DNA热变后快速冷却，则不能复性

1、DNA浓度：愈高，复性速度也愈快

2、DNA片段的大小：DNA片段愈大，扩散速度愈低使DNA片段线状单链互相发现互补的机会减少。因此在复性实验中，有时将DNA切成小片段再进行複性。

3、温度：过高不利于复性

4、溶液的离子强度：通常盐浓度较高时，复性速度较快

5、DNA顺序的复杂性；简单的分子复性很快，如polyd[T]和polyd[A]甴于彼此互补识别很快故能迅速复性。但顺序较复杂的DNA分子复性则较慢因此通过变性速率的研究，可以了解DNA顺序的复杂性