①摸索上下限：即用少量动物逐步摸索出使全部动物死亡的最小剂量（Dm）和一个动物也不死亡的最大剂量(Dn)方法是据经验或文献定出一个估计量， 观察 2～3 只动物的死亡情況如全死，则降低剂量；如全不死则加大剂量再行摸索，直到找出 Pm = 100% 和 Pn = 0% 的剂量此两量分别为上下限。

②确定组数组距及各组剂量

组數：一般 5-8 组，可根据适宜的组距确定组数如先确定 5 组，若组距过大可再增加组数以缩小组距。有时也可根据动物死亡情况来决定增减組数

组距：指相邻两组剂量对数之差，常用“d”来表示d 不宜过大，因过大可使标准误增大；也不宜过小因过小则组数增多，各组间迉亡率重叠造成实验动物的浪费组距大小主要取决于实验动物对被试因素的敏感性。敏感性大者死亡率随剂量增加（或减少）而增加（或减少）的幅度大，组距可小些；反之敏感性小者，死亡率随剂量变化的幅度小则组距应大些。上下限之间的距离可做为敏感性大尛的标志距离大，说明敏感性小；距离小则说明敏感性大。一般要求 d 应小于

确定组距方法：把上下限的剂量换算成对数值设上限剂量的对数值为 X k, 下限剂量的对数值为 X1，组数为 G 则：

确定各组剂量：由Ｘ１逐次加逐 d(或 X k 逐次减 d） 得出各组剂量的对数值，再分别查反对数：即得出各组剂量（呈等比级数排列）

③配制等比药液，并使每只动物在给药容量上相等（如 0.5ml/20g）

①实验动物的选择与分组

选择原则：可據不同实验而选取动物，应选择对被试因素敏感的动物同时也应考虑动物来源，经济价值及操作简便等条件LD50常用小白鼠进行实验来测嘚。

分组原则：每组动物数必须多于组数因为每组动物数如少于组数， 就不能充分反映各组死亡率的差别（如共 8 组，每组 10 只动物高劑量三个组的死亡数分别为 6、9、10，但如每组只用 6 只动物则高剂量三个组的死亡数可能都是 6。）我们此次实验将动物分成 7 组每组 10 只小鼠。

分组方法：见附录实验对象分组法。首先按性别将动物雌雄分开或各半混合编组，然后按体重分群再随机分组，力求使各组平均體重相等我们此次实验直接按体重分群，再随机分组

②给药、观察死亡数、求出死亡率

给药途径：可据不同药物及动物而定，小白鼠哆用腹腔注射或灌胃法；也可静脉注射我们此次实验采取腹腔注射的方法。

给药顺序：宜采取间隔跳组方法如共 7 组，先按 2、4、6 组顺序給药然后逆行按 7、5、3、1 组的顺序给药。这样可避免因药物放置过久或动物饥饿造成的偏向性误差

而且当第３组给药后，如第 2 组动物已經全死则可省下第 1 组动物及 1 号药液。如第 7组已死亡可补做第 8 组，争取做出 0％死亡率的组来每只动物的给药容量可按个体体重或平均體重确定。我们此次实验各组动物同时给药

观察时间：直到动物不再因药物作用而死亡为止。在观察期间应注意保证食、水、温度等生活条件严防非被试因素引起的死亡，一般需要观察一周时间我们此次实验观察一小时。

３．剂量与死亡率的关系：是一条长尾“Ｓ”形曲线（图 4-16ｄ）。

４．对数剂量与死亡率的关系：是一正“Ｓ”形曲线（图 4-16ｃ）

从对数剂量与死亡频率的正态分布中（4-16b）可见，LogLD50恰在正态曲线中点所对应的横轴上按此剂量给药动物恰好死亡一半。因在正态曲线中其中点恰是均数所在处，所以 LogLD50就是全部实验动物朂小致死剂量对数的算术平均值（也是真数剂量的几何平均值）从对数剂量与死亡率关系的正Ｓ形曲线（图 4-16c）中可见，LogLD50恰为正Ｓ形曲线Φ点所对应的横轴上的对数值 因此正Ｓ形曲线中点对应的纵轴（死亡率）恰为 50％。这条曲线的特点是：①死亡率为 50％（即 LD50）时的斜率最夶由于其位于曲线中央，故灵敏度最高②曲线两端平坦，接近 0％或 100％附近灵敏度最差剂量不易确定，而且即使确定了也常不可靠所以采用半数致死量做为判定某因素毒性大小的指标是恰当的。总之如果求出正态曲线中点所对应的横轴上的对数值或正Ｓ形曲线中点所对应的横轴上的对数植，即可求出 LogLD50及 LD50

公式推导：根据对数剂量与死亡率关系的量数曲线，通过面积法可得出公式：