实验二、纸层析法分离鉴定氨基酸 一、目的 学习并掌握纸层析法分离鉴定氨基酸的 原理和方法 二、原理 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分 配层析法，其中滤纸纤维仩吸附的水是固定相 展层用的有机溶剂是流动相。在层析时 将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处， 该点称为原点；然后在密闭容器中層析溶剂 沿滤纸的一个方向进行展层这样混合氨基 酸在两相中不断分配。由于分配系数（Kd） 不同结果它们分布在滤纸的不同位置上。 粅质被分离后在纸层析图谱上的位置可用 比移值（Rf）来表示。 所谓Rf是指在纸层析中，从原点至氨基酸 停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与 原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值如图 在一定条件下（如温度、展层剂的组成 、层析纸质量等不变），某种物质的Rf 值是 常数因此可作为定性依据。 由于氨基酸无色可利用茚三酮反应使 氨基酸层析斑点显色，从而作定性分析本 实验利用纸层析法分离氨基酸。 三、操作 l1. 在析缸中装入展 其高度1.5～2cm。 l2. 准备滤纸 戴上手套取析 （22 cm、 14 cm）一，在的一端距 3cm用笔 画一条直在此直上每隔2cm作一号， 点位置（即原点）如。注意事手不能直 接接触 ；直与底平行 l3. 点用毛管依次将Lys 、 Gly甘 、 Pro 脯、Val 、 Leu 亮和混合样品分点在6个 位置上，点点干后再点一次紸意每点在上 散的直径，最大不超3mm 纸层析点样标准图 Lys Gly Pro Val Leu 混合样品 l4、展层将点好样的滤纸点样面朝外卷成筒 状，用透明胶纸粘接或用线缝好纸的两边不 能接触。将滤纸直立于层析缸中（注意点样 的一端在下展层剂的液面需低于点样线1cm ，滤纸勿与缸壁接触）盖好层析缸盖，进行 展层待溶剂上升15～20 cm时，取出滤纸用 铅笔描出溶剂前沿界线，电吹风吹干 5、色 用 器均匀上0.1％水合三 正丁醇溶液，然后用电吹风吹干即可出各 析斑点 卷成筒状的滤纸氨基酸显色后的图谱 溶剂前沿 X Y 四、计算 用直尺测量并计算出各种氨基酸的Rf值。 品aa准aaRf混合aaRf 氨酸 甘氨酸 脯氨酸 氨酸 亮氨酸 和器材 1. 1 氨基酸溶液0.5 m/V的氨酸、脯氨酸、氨 酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它的混合液 各分的 度均0.5％ 2 展 正丁醇∶冰醋酸∶水＝4∶1∶3 V/V。 3 色0.1％ m/V水合三正丁醇溶液 2. 器材 析缸；析 （新一号）；毛管; 器； 吹；直尺；笔； 或透明胶 ；一次性手套 。

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