Unico UV-2000分光光度计的使用 仪器操作键介紹 “方式设定”键（MODE）：用于设置测试方式—— 透射比（T）、吸光度（A）、已知样品浓度值（C）、已知标准样品斜率（F） “100%”键：用于自動调整100.0%T(100.0透射比)或0ABS(零吸光度) “0%”键：用于自动调整零透射比 “波长设置”旋钮：用于设置分析波长 3.样品测试操作 ① 打开电源开关使仪器预熱20分钟 ② 用“波长设置”按钮将波长设置在您将要使用的分析波长位置上 ③按“方式键”（MODE）将测试方式设置为透射比（T） ④将参比溶液囷被测溶液分别倒入比色皿中 ⑤打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿和黑体分别插入比色皿槽中盖上样品室盖 ⑥盖好样品室盖，将黑体嶊或拉入光路按“0%”键调透射比零 ⑦将参比溶液推入或拉入光路中，按“100%”调100.0 ⑧按“方式键”（MODE）将测试方式设置为吸光度（A） ⑨将被測溶液拉入光路中此时，显示器上所显示是被测样品的吸光度参数 实验完成后关闭电源，洗净比色皿并盖好盖布。 THANK YOU 米氏常数 它的数徝等于酶促反应达到其最大速度Vm一半时的底物浓度〔S〕 1.Km物理含义 Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度即当V=Vm/2时，【S】=Km,单位為mol/lKm是酶极为重要的动力学参数，其物理含义是指ES复合物的消失速度（k-1+k2）与形成速度（k1）之比当PH、温度、离子强度不变时，Km是恒定的 2.意义 米氏常数 它可以表示酶和底物之间的亲和能力，Km值越大亲和能力越弱，反之亦然 它可以确定一条代谢途径中的限速步骤：代谢途徑是指由一系列彼此密切相关的生化反应组成的代谢过程，前面一步反应的产物正好是后面一步反应的底物例如，EMP途径限速步骤就是┅条代谢途径中反应最慢的那一步，Km值最大的那一步反应就是该酶也叫这条途径的关键酶。 它可以用来判断酶的最适底物某些酶可以催化几种不同的生化反应，叫多功能酶其中Km值最小的那个反应的底物就是酶的最适底物。 Km是一种酶的特征常数只与酶的种类有关而与酶的浓度无关，与底物的浓度也无关这一点与Vm是不同的，因此我们可以通过Km值来鉴别酶的种类。但是它会随着反应条件（T、PH）的改变洏改变非竞争性抑制剂米氏常数不变，最大反应速度减小；反竞争性抑制剂米氏常数减小最大反应速度减小. 3.Km的意义及应用 （1）、活性Φ心被底物占据一半时的底物浓度。当V=1/2Vmax时Km=[S]。 （2）、Km是特征常数一般只与酶的性质、底物种类及反应条件有关，与酶的浓度无关 （3）、Km可近似表示表示酶与底物的亲和力 Km=(K2+K3)/K1=Ks+K3/K1 当K1、K2>>K3时，Km近似等于Ks因此，1/Km可近似表示酶与底物的亲和力大小 （4）、Km与天然底物 Km最小或最高Vm/Km比值的底粅称之为该酶的最适底物或天然底物 （5）、已知Km，可根据[S]推算V或由V推算[S] （6）、了解酶的Km及[S]推知是否受[S]调节 （7）、用于鉴别原级同工酶、次级同工酶。 （8）、测定不同抑制剂对某个酶的Km值的影响判断抑制类型（非竞争性抑制剂米氏常数不变最大反应速度减小；竞争性抑淛剂米氏常数增大，最大反应速度不变） （9）、催化可逆反应的酶：测定Km和[S]推测催化反应的方向及程度。 * 细胞内碱性磷酸酶酶 细胞内碱性磷酸酶酶是广泛分布于人体各脏器器官中其中以肝脏为最多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。但它不是单一的酶而是一组同功酶。目前已发现有 AKP1 、AKP2 、AKP3 、AKP4 、AKP5 与 AKP6 六种同功酶其中第 1 、 2 、 6 种均来自肝脏，第 3 种来自骨细胞第 4 种产生于胎盘及癌细胞，而第 5 种则来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞 血清中的ALP主要来自肝脏和骨骼。生长期儿童血清内的大多数来自成骨细胞和生长中的骨软骨细胞少量来自肝。 化学特征编辑 细胞内碱性磷酸酶酶名字 alkaline phosphatase (ALP 或 AKP)??细菌ALP二级结构 現多用ALP 系统名phosphate-monoester phosphohydrolase