第二军医大学 硕士学位论文 乙型肝炎病毒preS2-S基因（adr亚型）转基因小鼠的建立 姓名：苏小平 申请学位级别：硕士 专业：细胞生物学 指导教师：胡以平 第二军医大学硕士学位论攵 摘 要 入类乙型肝炎病毒属嗜肝DNA病毒科至少有4种亚型：ayw、adr、ayr、 和adw。其中adr亚型是中国人的主要流行株其基因组DNA已被克隆，全长 3．2kbp与其怹3种亚型在DNA水平和蛋白水平具有一定差异。HBV基因有4 frameORFs)，其中编码外膜蛋白分子的同一阅读框 reading 个开放阅读框(open 前对中蛋白在乙型肝炎病毒生活周期中的功能及与其它乙型肝炎病毒蛋白间的 相互作用尚不清楚。转基因技术是研究基因功能的理想方法建立表达中蛋白的 转基因小鼠将为中蛋白功能的研究提供理想的动物模型。 本研究采用已经构建了的含有CMV启动子和preS2一S基因(adr亚型)开放 阅读框的口阳舳S基因表达载体pcDNA3一S2一S酶切鉴定证实载体构建成功，DNA 测序证实插入的preS2-S基因序列与报道的序列一致该载体转染入Hela细胞后， 免疫细胞化学检测发现M蛋白可在Hela细胞嘚细胞质和或细胞核中表达。将该 载体经BglII限制性内切酶线性化后用原核显微注射法将其注射入受精卵雄原 核，制备转基因小鼠共得箌23只存活的新生鼠。经PCR方法检测后获得5只 Founder转基因小鼠转基因整合率为21．7％(5／23)，以抗HBs进行肝组织切片 免疫组化检测3只小鼠呈阳性，阳性率为60％命名为 和正常同系小鼠交配获得28只F2代小鼠，PCR检测发现6只阳性阳性率为 21．4％(6／28)。 上述结果表明目的基因不但可以在转基因小鼠體内稳定地遗传，而且可以 在转基因小鼠体内表达目的蛋白该品系转基因小鼠的建立为研究乙型肝炎病毒 中蛋白的功能及基于中蛋白的治疗性DNA疫苗提供了一个候选的动物实验模 型。 关键词乙型肝炎病毒 M蛋白转基因小鼠 细胞生物学教研室 第二军医大学硕士学位论文 ABSTRACT Human Bvirtlsisthe fora