确定是癌才做免疫组化化时将阴性对照做成了空白对照对结果有影响吗？影响大吗

点击联系发帖人 时间：2019-03-08 06:22

确定是癌才做免疫组化

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我是免疫组化的初学者希望各位老师指点迷津！先谢了！
本人正在做一实验：用免疫荧光组化方法研究标记大鼠的延髓里的三叉神经脊束核的一个亚核三叉旁核的某些东西，一抗分别是羊抗Fos蛋白IgG（Chemicon, AB1584）、小鼠抗CB IgG（santa cruz sc-58699）二抗分别是AMCA标记的马忼小鼠IgG (Vector, CI-2000)、Fluorescein标记的驴抗羊IgG 实际分3组，其中两组做了造模处理另一只大鼠未作任何处理直接麻醉作为空白组，然后用10%水合氯醛（0.3ml/100g）麻醉大鼠开胸，经左心室插管至升主动脉先用150ml生理盐水冲去血液，再以500ml含4%多聚甲醛的0.1mol/L磷酸缓冲液（PBpH7.4）灌注固定，持续约50min取脑干，于上述新鮮固定液中后固定4～6h（4℃）然后将组织块移入含20%蔗糖的0.1mol/L PB中（4℃）。待组织块在蔗糖溶液中沉底后用恒温式冷冻切片机横切延髓，切片厚度为30?m隔2张去1张。3组切片分别分2组一组作阳性组，另一组作阴性对照组阳性组免疫组化步骤如下：
1.切片入正常兔血清孵育20min，倾去
4.切片入小鼠抗CB IgG血清（1：100）过夜（4℃）。
6.继续将切片置于AMCA标记的马抗小鼠IgG（5μg/ml）、Fluorescein标记的驴抗羊IgG（1：200）混合液中孵育37℃恒温箱内避光孵育0．5h。
阴性对照组以含0.3%Triton X-100的PBS代替两种一抗其余步骤同阳性组。
根据各荧光素的波长在激光扫描共聚焦显微镜下观察并拍照结果显示所有汾组都有阳性结果，连空白组的阴性对照组亦出现阳性结果原因何在？
希望高手指点！~谢谢！~

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